この方法は、急性胆道膵炎で起こる炎症事象を再生するために使用することができる。膵臓組織の変化を初期段階で研究することは可能であり、これは一般的に診療所では不可能である。この技術の主な利点は、訓練を受けた研究者のために迅速かつ容易に再現でき、ヒトの急性膵炎と同様の結果を提供することです。
この方法は、膵臓および隣接する器官における炎症性媒介細胞の研究を可能にするため、薬物分子および他の治療介入の薬理学的免疫応答を研究するために使用することができる。このプロトコルを試みる際には、臓器を見つけ、カヌリケーション領域を確立することが重要です。臓器の位置を暗記し、メチレンブルーなどの着色溶液を使用して最初に注射用途を行使します。
つま先ピンチで麻酔の深さを確認した後、5%ポビドネヨウ素溶液で麻酔マウスの腹部を洗浄します。トリマーを使用して、胸部と下腹部の間の毛を取り除き、70%のアルコールで約2平方センチメートルの手術領域をきれいにします。外科用基板上の動物を固定し、腹部の上部に水平に皮膚の5ミリメートルを切断し、xiphoidプロセスの下に1センチメートルを切断するためにはさみを使用しています。
腹膜の切り傷を繰り返し、腔の暴露を最小限に抑え、腹腔切り出しを行います。レトラクタを使用して、腸から約1センチメートルで頭に向かって肝臓を引っ張り、膵臓と十二指腸の領域を見つける。鉗子を使用して、動物の頭に向かって肝臓を持ち上げます。
小腸の一部を穏やかに引っ張ることによって、2つの側面端を6-0ポリプロピレン縫合糸で固定し、共通の胆管の遠位部分をよりよく見ることができる。マイクロ容器クリップを使用して、近位共通胆管を一時的に閉塞する。腹腔から臓器を露出する。
その後、8-0で遠位共通胆管の一時的な閉塞を行う縫合。一般的な胆管にアクセスするには、小腸の壁の白っぽい部分として現れる百壁領域を穿刺する。0.54ミリメートルのポリエチレンチューブに接続された0.4ミリメートルの針で、3分間体重10グラムあたり10マイクロリットルの一定速度で2.5%ナトリウムタウロキロ酸溶液注入のための注入ポンプを開始します。
注入後、マイクロ容器クリップを取り外し、一時的な8-0縫合、膵胆管からの注射針を用いた。6-0非吸収性モノフィラメントポリプロピレン縫合糸で腹部を縫合する。開腹術と縫合の終わりまでの時間は30分以下であるべきである。
手術後、木の削りくずと水と食品のアドリビタムが並ぶポリエチレンボックスに動物を収容します。皮膚を引き戻して動物をそっと持ち、眼球のわずかな突起を促進し、目を上向きにして動物を配置します。動物の目に局所麻酔薬を含む目の軟膏の滴を植え付ける。
眼の内側の隅に毛細管の端部を配置し、約30〜45度の角度で眼球の下にそっと挿入します。血流が始まるまで毛細管を回転させます。コレクションが終わったら、まぶたを軽い圧縮で閉じておくことでホメオスタシスを確実にします。
その後、27ゲージ針を使用して、4ミリリットルの氷冷PBSをマウスの腹腔に注入する。注射後、腹骨を10秒間静かにマッサージし、接着した細胞を除去します。はさみとピンセットを使用して、内皮と筋肉に0.5センチメートルの小さな切り傷を作り、腹腔を露出させます。
腹部に球根ピペットを挿入し、脂肪組織を吸引しないように、できるだけ多くの流体を収集します。さらに処理するためにヘッド領域から膵臓の一部を収集します。採取した流体を氷の上に保管されたチューブに堆積させます。
その後、腹膜液をGの250倍5分間遠心分離し、インターロイキン6の加量に上清をストックする。血清を得るために、採取した血液サンプルを700回Gで15分間遠心分離し、アミラーゼおよびインターロイキン6投薬のために上清をストックする。急性膵炎の誘導から12時間後に膵臓組織を分析した結果、恥群の組織サンプルと比較して、患部の臓器に激しい炎症が見られた。
同様の結果は、shamおよびAPTAからの組織サンプルのヘマトキシリン・エオシン染色後の組織学的検査によって表された。血清の分析は、シャム群と比較してAP群における血清アミラーゼおよびインターロイキン-6サイトカイン濃度の有意な増加を示した。同時に、インターロイキン−6濃度は、AP群において腹腔内流体において有意に高かった。
このモデルにおける膵炎の重症度は、濃度、注入の体積および圧力、および急性膵炎誘導の時間に比例して依存する。この技術の助けを借りて、重度の急性膵炎に対する連続腹膜洗浄の効果を研究することができる。
