Nuestro protocolo proporciona un método detallado para una inducción confiable y una calificación integral de la discinesia inducida por levodopa en un modelo de rata de la enfermedad de Parkinson. La principal ventaja de nuestra escala de calificación de discinesia es que permite cuantificar tanto la intensidad de un movimiento involuntario anormal dado como la cantidad de tiempo dedicado a exhibir ese comportamiento. Los modelos animales confiables de discinesia inducida por levodopa son fundamentales para lograr el objetivo final de encontrar tratamientos efectivos para reducir o eliminar el efecto secundario en individuos con enfermedad de Parkinson.
Comience la preparación para el experimento pesando ratas semanalmente para calcular la cantidad apropiada de medicamentos en función de los cambios de peso. Proporcione a las ratas golosinas nutricionalmente completas y altamente sabrosas. En el primer día de tratamiento con L-DOPA, transfiera las ratas a una vivienda única suministrada con el enriquecimiento aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional.
Y mantenga a las ratas en la vivienda individual durante todo el estudio para evitar la interferencia de los compañeros con las evaluaciones de comportamiento. En los días de clasificación de discinesia, retire las botellas de agua, los estantes de alimentos y el enriquecimiento en la jaula para evitar interferencias con las evaluaciones de comportamiento, y coloque las jaulas en un estante de alambre de acero en un ángulo de aproximadamente 45 grados, luego voltee las etiquetas de identificación hacia arriba. Antes de la inyección de L-DOPA, agregue el volumen apropiado de solución salina estéril a la mezcla de L-DOPA liofilizada y benserazida prepesada en el vial de ámbar y agite bien durante 10 segundos.
Inmediatamente después de la preparación, llene el volumen requerido de la mezcla L-DOPA-Benserazide para cada animal en jeringas individuales montadas con una aguja calibre 26 y etiquete cada jeringa con una identificación individual del animal. Después de llevar la primera jaula al banco de inyección, retire la rata de su jaula para colocarla en la superficie de inyección. Use la mano no dominante para sujetar la cabeza y los hombros de la rata con la palma contra la superficie y desaliparar la piel de la espalda que cubre las escápulas con el pulgar y el índice.
Use la mano dominante para inyectar volumen de L-DOPA en el espacio subcutáneo entre los dedos, manteniendo la aguja paralela al cuerpo para evitar la inyección intramuscular. Después de la inyección, mueva la rata a la jaula. A continuación, configure el temporizador durante uno o dos minutos y repita el procedimiento inyectando una rata cada uno o dos minutos hasta que se inyecten todas las ratas.
En el día de la calificación, coloque un temporizador al lado de la jaula para observar la discinesia inducida por levodopa o la intensidad del comportamiento LID mientras estima la frecuencia de cualquier comportamiento dado durante el período de calificación. Califique la intensidad y la frecuencia de los movimientos de discinesia distónica e hipercinética, incluido el inicio inicial del comportamiento LID, el comportamiento máximo y la fase de disminución en el número deseado de puntos de tiempo. Si usa intervalos de calificación de un minuto, establezca un temporizador durante un minuto para calificar a la primera rata y continúe la calificación a través de todas las ratas a intervalos de un minuto.
La calificación LID para comportamientos involuntarios anormales en las ratas parkinsonianas se clasificó para incluir la intensidad y la frecuencia de los comportamientos. Se observó una variedad de movimientos involuntarios anormales, incluidos comportamientos distónicos, hipercinéticos y estereotípicos en ratas. El análisis representativo proporciona un ejemplo de los datos presentados como dosis máxima LID durante toda la línea de tiempo experimental y el programa de dosificación.
La dosis máxima de LID se definió como un momento en que la puntuación promedio de LID del grupo fue la mayor. Además, los datos de calificación de LID se examinaron durante cada curso de tiempo de calificación diaria a diferentes concentraciones de L-DPOA con los grupos combinados y trazados como animales individuales. El tejido postmortem de sujetos evaluados conductualmente se puede utilizar para explorar los mecanismos moleculares asociados con las discinesias inducidas por levodopa y el impacto de las intervenciones terapéuticas en dichos mecanismos moleculares.
Los modelos animales de discinesia inducida por levodopa han sido útiles para dilucidar varios mecanismos que se cree que subyacen a esta enfermedad conductual. Tal comprensión ha llevado a la evaluación preclínica y clínica de varios objetivos.
