Las inyecciones por chorro de agua de componentes activos, como líquidos, nanopartículas, micropartículas, medicamentos encapsulados o incluso células vivas, se pueden aplicar con mucha más precisión en comparación con las inyecciones con agujas en diferentes tejidos dirigidos. Los enfoques mínimamente invasivos requieren una localización precisa del medicamento en capas predeterminadas del tejido objetivo mediante la preselección de presiones de inyección. Nuestro enfoque actual es la terapia celular para la incontinencia urinaria.
Sin embargo, esta técnica ya se ha extendido a la regeneración del tejido muscular infectado después de ataques cardíacos severos. En la actualidad, la técnica solo puede ser aplicada por investigadores experimentados o médicos con licencia en estudios preclínicos. No está destinado a ser utilizado en procedimientos de laboratorio de rutina, ya que se desarrolla para futuros fines clínicos.
Para comenzar, coloque la uretra con la vejiga de conexión diseccionada de un cerdo autóctono hembra adulto en una esponja que imita la elasticidad del suelo pélvico inferior. Luego, usando la vejiga, determine la orientación de la uretra. Esto es posible debido a la localización del uréter y los tres ligamentos, que fijan la vejiga en la cavidad abdominal y pélvica.
Después de orientar correctamente la uretra, córtela longitudinalmente en el lado dorsal con la ayuda de un catéter. Después de ajustar la densidad celular de las células del estroma derivadas del tejido adiposo porcino a 2,4 veces 10 a la sexta célula por mililitro, etiquete las células con una tinción de células vivas permeables de membrana fluorescente verde, luego aspire la suspensión celular con la jeringa y aplique la aguja de inyección citoscópica Williams. A continuación, sostenga la aguja poco por encima de los dos mililitros de medios de crecimiento en un tubo de centrifugación de 15 mililitros o inserte la aguja en el tejido abierto de la uretra.
En ambos casos, inyectar manualmente 250 microlitros de la suspensión celular. Células inyectadas en la uretra cadavérica desde una cúpula de inyección. Recoger las células inyectadas en el medio directamente por centrifugación.
Para las células inyectadas en la uretra cadavérica, aspire fuera de la cúpula de inyección con una aguja de calibre 18 aplicada en una jeringa. Transfiera las células aspiradas a un tubo de centrifugación y gránulos por centrifugación. Resuspend ambos gránulos celulares en cuatro mililitros de medios de crecimiento.
Para determinar el rendimiento celular y la viabilidad, mezcle 20 de la suspensión celular a fondo con 20 microlitros de azul de tripano. Luego llene 10 microlitros de esta mezcla en cada cámara del hemocitómetro. Bajo un microscopio, cuente las células en los cuatro cuadrados de las esquinas.
Cuente los glóbulos blancos no teñidos como células viables y las células teñidas de azul como células muertas, luego calcule el número de células por mililitro. Para las inyecciones a través del chorro de agua, ajuste la densidad de las células estromales derivadas del tejido adiposo porcino a seis veces 10 a seis células por mililitro. Etiquételos como se demostró anteriormente y llene la suspensión celular en la unidad de dosificación del dispositivo de chorro de agua sin aguja.
Luego sostenga la boquilla de inyección poco por encima de los dos mililitros de medios de crecimiento en un tubo de centrifugación de 15 mililitros o poco por encima del tejido de la uretra abierto. En ambos casos, inyectar 100 microlitros de la suspensión celular. Use alta presión para la penetración del tejido seguida de una fase de baja presión para las inyecciones celulares.
Las células inyectadas en la uretra cadavérica forman una cúpula de inyección. Recoger las células inyectadas en el medio directamente por centrifugación. Para las células inyectadas en la uretra cadavérica, aspire fuera de la cúpula de inyección.
Transfiera las células aspiradas a un tubo de centrifugación y ginelas mediante centrifugación, como se demostró anteriormente. Después de la centrifugación, resuspender ambos gránulos en cuatro mililitros de medios de crecimiento. Sembrar las células recuperadas después de las inyecciones en platos de cultivo de tejidos a una densidad de cinco veces 10 a la quinta célula por plato.
Después de una incubación de tres horas a 37 grados centígrados, y justo antes de la medición de AFM, reemplace el medio de crecimiento con tres mililitros de medios L-15 de Leibovitz sin L-glutamina. Para medir la elasticidad de las células individuales, identifique visualmente una célula y concéntrese en ella. Luego coloque el mouse de la computadora en el centro de la celda y, para mejorar la precisión de las mediciones, coloque la punta AFM directamente sobre el núcleo celular.
A continuación, concéntrese en el voladizo y muévalo en el mouse de la computadora. Luego comience la medición con run y mida al menos 50 celdas. Se utiliza el parámetro de punto de ajuste obtenido por calibración del voladizo y se mide una celda tres veces.
La viabilidad de las células administradas a través de la aguja Williams fue mayor que las inyecciones por chorro de agua utilizando la configuración E60-10. La evaluación biomecánica de las inyecciones en el líquido de captura reveló que las inyecciones con aguja de Williams no mostraron diferencias significativas en los módulos elásticos en comparación con los controles, mientras que las inyecciones de chorro de agua redujeron significativamente los módulos elásticos celulares en un 40 a 50% Del mismo modo, en muestras de tejido uretral cadavérico, las inyecciones con aguja de Williams no produjeron diferencias significativas en los módulos elásticos celulares en comparación con los controles. Sin embargo, se observó una reducción significativa del 51% después de las inyecciones de chorro de agua.
Uno solo tiene que asegurarse de que las inyecciones de aguja no penetren completamente en el tejido que está infligiendo la lesión. Con el chorro de agua, solo hay que colocar el dispositivo en la posición correcta en el área de inyección, mientras que el resto lo hace automáticamente el propio dispositivo. Como el dispositivo de chorro de agua se desarrolló para que coincida y se ajuste a los dispositivos endoscópicos, puede usar las aplicaciones de chorro de agua para cualquier sitio del cuerpo al que se pueda llegar mediante estas tecnologías cistoscópicas o endoscópicas para regenerar los tejidos y hacer el trabajo de reparación.
