Los biobancos son recursos esenciales para la investigación traslacional y clínica básica, pero también actúan como actores clave que vinculan la investigación académica y la industria farmacéutica-biotecnológica. Este protocolo presenta los procedimientos operativos estándar del biobanco en el IAO, un biobanco totalmente certificado que trabaja de acuerdo con el estándar más reciente para biotecnología, biobancos y requisitos generales para biobancos. La disponibilidad de biomuestras de alta calidad de pacientes con cáncer es fundamental para el desarrollo de herramientas de diagnóstico de próxima generación y los terapeutas las adaptan a pacientes individuales.
El biobanco de material biológico de un paciente con cáncer requiere personal especializado y numerosas certificaciones. El personal debe estar constantemente capacitado y actualizado. Por lo tanto, este protocolo debe ser el punto de partida para aquellos que deseen establecer un biobanco.
Para comenzar, transmita un video educativo de dibujos animados en las salas de espera para informar a los pacientes sobre la importancia del impacto de RPA. Proporcione marcadores de gadgets a todos los pacientes. Utilice el software LIMS para rastrear todas las muestras biológicas.
Identificar a los pacientes mediante códigos. Asigne un código único a cada individuo que coincida con el número de registro médico. Verifique si el paciente está inscrito en un ensayo clínico o en un proyecto de investigación aprobado especificado completando correctamente el campo del proyecto de estudio en cada perfil de paciente.
Informe a los técnicos si se desconoce el riesgo de infección. Deseche las muestras con resultados positivos o riesgos desconocidos. Para muestras frescas, registre las muestras de sangre en el software del biobanco.
Etiquete los vacutainers con el código de identificación del biobanco y entréguelos a los usuarios autorizados. Para las muestras congeladas almacenadas en el biobanco, prepare dos tubos recubiertos de criobanco 2D cada uno de 900 microlitros de sangre. Registrar las alícuotas en el software del biobanco.
Colóquelos en una placa de código de barras específica y guárdelos a menos 80 grados centígrados para garantizar una temperatura constante. Vierta la sangre de los tubos de recolección de EDTA en el tubo cónico estéril vacío de 50 mililitros y dilúyalo usando PBS estéril 1X. Use el PBS para enjuagar el tubo de sangre.
Centrifugar los tubos a 400 RCF durante 30 minutos a 20 grados centígrados y procesar los tubos bajo una campana de riesgo biológico. Recupere la capa blanca intermedia que contiene PBMC con una pipeta Pasteur y colóquela en un nuevo tubo cónico estéril de 50 mililitros. Agregue hasta 45 mililitros de PBS para lavar los PBMC.
Mezclar y centrifugar a 400 RCF durante 10 minutos a cuatro grados centígrados. Recuperar el pellet y resuspenderlo en PBS. Luego cuente las celdas usando cámaras de Burker desechables.
Repita el lavado PBS para PBMC como se describe en el texto manuscrito. Diluya las PBMC en el medio congelador y prepare tubos recubiertos con cryobank 2D transfiriendo un mililitro de células resuspendidas a cada tubo criogénico. Coloque las muestras en una caja criogénica específica y guárdelas a menos 80 grados centígrados lo antes posible.
Centrifugar el vacutainer que contiene las muestras de sangre entera a 2.000 G durante 10 minutos a cuatro grados centígrados. Retire la capa superior del plasma con una pipeta Pasteur de tres mililitros y transfiérala a un tubo cónico estéril de 15 mililitros. Luego centrifugar a 16, 000 RCF durante 10 minutos a cuatro grados centígrados para eliminar las células sanguíneas contaminantes.
Transfiera el plasma a tubos recubiertos de criobanco 2D de un mililitro. Registrar las alícuotas en el software del biobanco. Colóquelos en una placa de código de barras específica y guárdelos a menos 80 grados para garantizar una temperatura constante.
Haga que un patólogo examine muestras de tejido para determinar si el material que no es necesario para los procedimientos de diagnóstico es suficiente para fines de investigación. Siempre que sea posible, recoja incluso la contraparte no patológica del tejido patológico. Coloque las muestras en placas de Petri de cultivo celular estéril etiquetadas como P y NP. Mantenga el tejido en el hielo a cuatro grados centígrados y divídalo en tres partes cada una.
A, B y C si hay suficiente material disponible. Para muestras de tejido fresco etiquetadas como A, colocar las alícuotas frescas de tejido P y NP en tubos con el medio de cultivo apropiado definido en cada protocolo específico y enviarlas a unidades de investigación externas. Para muestras de tejido OCT etiquetadas como B, llénelas con resina OCT y colóquelas inmediatamente en un aparato de congelación instantánea a menos 80 grados centígrados.
Para muestras de tejido etiquetadas como C, coloque las muestras de tejido restantes en tubos recubiertos con cryobank 2D en el aparato de congelación rápida. Guarde los platos a menos 80 grados centígrados. Se recogieron un total de 38.446 biopsias líquidas biológicas anotadas y 10.205 muestras de tejido entre abril de 2012 y diciembre de 2021.
El número de muestras recolectadas, especialmente tejidos de 2020 a 2021, disminuyó debido a la pandemia de COVID-19 y la reducción relacionada en los procedimientos oncológicos. Se analizaron en detalle las muestras recolectadas obtenidas de las divisiones de urología, ginecología, sonología y las divisiones de cirugía de cabeza y cuello, abdominal, pélvica y torácica. El mayor número de muestras de tejido se recogieron de tumores de mama.
La recolección de otros especímenes biológicos, como orina, heces e hisopos bucales, ha aumentado significativamente después de la demanda a lo largo de los años. Esta opción proporciona una plataforma fundamental para el almacenamiento de muestras biológicas y mejora la reproducibilidad de los programas de investigación del cáncer. Estas muestras se pueden utilizar para diferentes aplicaciones de investigación, como la secuenciación de próxima generación o la espectrometría de masas.
Nuestra plataforma es capaz de implementar nuevos algoritmos de inteligencia artificial en la investigación traslacional con el potencial de cambiar la forma en que se trata a los pacientes con cáncer.
