TGFR ofrece una evaluación en tiempo real de las funciones renales. En comparación con los marcadores tradicionales, TGFR puede monitorear los cambios en la función renal en los mismos animales varias veces. Además, la técnica no requiere ninguna recolección de sangre u orina.
Con los recientes avances en xenotrasplantes, se llevarán a cabo más investigaciones utilizando el modelo porcino. Por lo tanto, creemos que esta herramienta será esencial para la investigación traslacional, y es más probable que se utilice clínicamente en los próximos años. El experimento se lleva a cabo en lechones de tres a siete días de edad.
Los animales son propensos a la hipotermia, hipovolemia y otras complicaciones derivadas de la cirugía. Por lo tanto, se requiere una estrecha vigilancia durante todo el procedimiento. Además, la metodología requiere práctica, ya que implica traqueotomía y canulación de vasos.
Después de preparar al animal para el procedimiento, use una cuchilla quirúrgica para crear una incisión vertical paramediana izquierda de cinco a seis centímetros, ya que el ciego en los cerdos se encuentra en la fosa paralumbar izquierda. Diseccionar las capas de la pared abdominal, evitando lesiones en los vasos epigástricos superficiales. Una vez incisa la capa peritoneal, utilizar un retractor para mejorar el acceso a las estructuras intraabdominales e identificar el colon espiral en el cuadrante superior izquierdo del abdomen.
Para localizar el ciego, traza el colon espiral caudal y dorsalmente. El colon espiral en la base del ciego está unido al ilion. Ligate el ciego justo distal a la unión ileocecal.
Usando una aguja de calibre 18, haga siete punciones en el ciego y extruya las heces en el área peritoneal. Cierre las capas abdominales con una sutura de seda 3/0, utilizando puntos simples interrumpidos o continuos. También se puede usar una grapadora para cerrar la capa de piel si está disponible.
Después de ocho horas de ligadura cecal, inicie la medición transdérmica de la TFG. Utilice la versión 3.0 del software MB Service para ajustar la frecuencia de muestreo en el dispositivo GFR. Con el conector USB, conecte el dispositivo transdérmico GFR al ordenador.
Abra el software MB Service. Haga clic en conectar y ajuste el tiempo a 4, 000 milisegundos. Haga clic en escribir para guardar la configuración y, a continuación, haga clic en desconectar.
Fije los parches adhesivos de doble cara con una ventana transparente a un lado del dispositivo. Conecte la batería al dispositivo, asegurándose de que el diodo emisor de luz cubra la ventana transparente para permitir la detección del trazador. Una vez que la batería esté conectada, pegue inmediatamente el parche adhesivo con el dispositivo en su lugar.
Asegúrese de que esté bien asegurado. Dado que los lechones están profundamente anestesiados, la cinta puede ser innecesaria para mantener el dispositivo en su lugar. Prepare 50 miligramos por mililitro de solución de FITC-sinistrin con solución salina y extraiga la dosis adecuada en una jeringa.
Coloque la jeringa con medicamento en un lado de una llave de paso de tres vías y una descarga salina en el otro lado de la llave de paso. Empuje el FITC-sinistrin, seguido inmediatamente de cinco mililitros en bolo salino antes de cerrar la llave de paso de tres vías a la vena del lechón. Mantenga el dispositivo conectado al lechón durante cuatro horas.
Para evitar artefactos de movimiento durante este tiempo, mantenga al lechón bajo anestesia como se describe en el manuscrito. Al final de las cuatro horas, retire el dispositivo y desconecte inmediatamente la batería. Conecte el dispositivo transdérmico de TFG al ordenador mediante el conector USB proporcionado por el proveedor.
Abra el software MB lab para recuperar datos del dispositivo. Para guardar los datos sin procesar, haga clic en conectar y seleccione leer. Luego, espere a que el dispositivo termine de leer.
Haga clic en cambiar nombre y, finalmente, haga clic en guardar. Procese y evalúe los datos guardados en el software de análisis de acuerdo con las instrucciones del manual. Brevemente, abra MB studio y haga clic en cargar para importar los datos guardados.
Ajuste las posiciones de desplazamiento, inicio y parada utilizando los marcadores automatizados. Elimine los artefactos si es necesario. Seleccione el modelo de tres compartimentos y haga clic en ajustar para obtener una lectura que muestra el aclaramiento de sinistrintrina FITC en minutos y calcule el TGFR utilizando esta ecuación.
Tanto los animales simulados como los de sepsis tenían pesos comparables. Después de 12 horas de sepsis, se observó un aumento de los niveles séricos de proteína C reactiva, un marcador de sepsis, en el grupo de sepsis. Se mostraron curvas de aclaramiento de FITC-sinistrina para lechones simulados y sépticos 12 horas después de la cirugía.
Los cerdos sépticos con insuficiencia renal demostraron un aumento del área bajo la curva. Los lechones con sepsis mostraron un aclaramiento alterado de FITC-sinistrin, lo que indica lesión renal aguda. La vida media media promedio para FITC-sinistrin en los grupos de simulacro y sepsis fue de 114 y 537 minutos, respectivamente.
La TFG promedio en el grupo simulado fue significativamente mayor que en el grupo de sepsis. El nivel de creatinina sérica a cero y 12 horas fue similar en el grupo simulado. Sin embargo, se observó un aumento significativo en el nivel de creatinina en los cerdos sépticos después de 12 horas.
Asegúrese de que la batería esté conectada correctamente a los lechones. Si las baterías se desprenden, el dispositivo no funcionará. Intente inyectar el FITC-sinistrin en un bolo fluido para evitar múltiples picos.
Además, asegúrese de que el dispositivo esté conectado correctamente a los lechones para evitar artefactos de movimiento. Con una medición en tiempo real de la TFG, podemos evaluar adecuadamente la función renal para detectar la LRA en etapa temprana y posiblemente evaluar los agentes terapéuticos bajo investigación.
