TGFR bietet eine Echtzeit-Bewertung der Nierenfunktionen. Im Vergleich zu herkömmlichen Markern kann TGFR Veränderungen der Nierenfunktion bei denselben Tieren mehrmals überwachen. Darüber hinaus erfordert die Technik keine Blut- oder Urinsammlung.
Mit den jüngsten Fortschritten in der Xenotransplantation wird mehr Forschung mit dem Schweinemodell durchgeführt. Wir glauben daher, dass dieses Tool für die translationale Forschung unerlässlich sein wird, und es ist wahrscheinlicher, dass es in den kommenden Jahren klinisch eingesetzt wird. Das Experiment wird an drei bis sieben Tage alten Ferkeln durchgeführt.
Die Tiere sind anfällig für Unterkühlung, Hypovolämie und andere Komplikationen, die sich aus einer Operation ergeben. Daher ist während des gesamten Verfahrens eine engmaschige Überwachung erforderlich. Außerdem erfordert die Methodik Übung, da sie Tracheostomie und Gefäßkanülen beinhaltet.
Nachdem Sie das Tier für den Eingriff vorbereitet haben, verwenden Sie eine chirurgische Klinge, um einen fünf bis sechs Zentimeter großen linken paramedianen vertikalen Schnitt zu erstellen, da der Blinddarm bei Schweinen in der linken paralumbalen Fossa liegt. Sezieren Sie die Bauchwandschichten und vermeiden Sie eine Verletzung der oberflächlichen Oberbauchgefäße. Sobald die Peritonealschicht eingeschnitten ist, verwenden Sie einen Retraktor, um den Zugang zu den intraabdominalen Strukturen zu verbessern und den Spiraldickdarm im oberen linken Quadranten des Abdomens zu identifizieren.
Um den Blinddarm zu lokalisieren, verfolgen Sie den spiralförmigen Dickdarm kaudal und dorsal. Der Dickdarmspirale an der Basis des Blinddarms ist mit dem Darmbein verbunden. Ligate den Blinddarm nur distal zum ileozökalen Übergang.
Machen Sie mit einer 18-Gauge-Nadel sieben Einstiche im Blinddarm und extrudieren Sie Kot in den Peritonealbereich. Schließen Sie die Bauchschichten mit einer 3/0-Seidennaht, entweder mit einfachen unterbrochenen oder kontinuierlichen Stichen. Ein Hefter kann auch verwendet werden, um die Hautschicht zu schließen, falls vorhanden.
Nach acht Stunden Ligatur des Stuhls mit der transdermalen GFR-Messung beginnen. Verwenden Sie die MB Service Software Version 3.0, um die Abtastrate auf dem GFR-Gerät anzupassen. Verbinden Sie das transdermale GFR-Gerät über den USB-Anschluss mit dem Computer.
Öffnen Sie die MB Service Software. Klicken Sie auf Verbinden und stellen Sie das Timing auf 4.000 Millisekunden ein. Klicken Sie auf Schreiben, um die Einstellungen zu speichern, und klicken Sie dann auf Trennen.
Befestigen Sie die beidseitigen Klebepflaster mit einem klaren Fenster an einer Seite des Geräts. Schließen Sie die Batterie an das Gerät an und stellen Sie sicher, dass die Leuchtdiode über dem transparenten Fenster liegt, um eine Tracererkennung zu ermöglichen. Sobald die Batterie angebracht ist, kleben Sie den Klebepflaster sofort mit dem Gerät an Ort und Stelle.
Stellen Sie sicher, dass es gut gesichert ist. Da die Ferkel tief betäubt sind, kann das Klebeband unnötig sein, um das Gerät an Ort und Stelle zu halten. Bereiten Sie 50 Milligramm pro Milliliter FITC-Sinitrin-Lösung mit Kochsalzlösung vor und ziehen Sie die entsprechende Dosierung in eine Spritze.
Befestigen Sie die Spritze mit Medikamenten auf einer Seite eines Drei-Wege-Absperrhahns und einer Kochsalzlösung auf der anderen Seite des Absperrhahns. Drücken Sie den FITC-Sinistrin, unmittelbar gefolgt von fünf Milliliter Salzbolus, bevor Sie den Drei-Wege-Absperrhahn zur Ferkelvene schließen. Halten Sie das Gerät vier Stunden lang am Ferkel befestigt.
Um Bewegungsartefakte während dieser Zeit zu vermeiden, halten Sie das Ferkel unter Narkose, wie im Manuskript beschrieben. Entfernen Sie nach Ablauf der vier Stunden das Gerät und trennen Sie sofort den Akku. Verbinden Sie das transdermale GFR-Gerät über den vom Lieferanten bereitgestellten USB-Anschluss mit dem Computer.
Öffnen Sie die MB Lab-Software, um Daten vom Gerät abzurufen. Um die Rohdaten zu speichern, klicken Sie auf Verbinden und wählen Sie Lesen. Warten Sie dann, bis das Gerät mit dem Lesen fertig ist.
Klicken Sie auf Umbenennen und schließlich auf Speichern. Verarbeiten und werten Sie die gespeicherten Daten in der Analysesoftware gemäß den Anweisungen des Handbuchs aus. Öffnen Sie kurz das MB Studio und klicken Sie auf Laden, um die gespeicherten Daten zu importieren.
Passen Sie die Offset-, Start- und Stopppositionen mit den automatisierten Markern an. Entfernen Sie bei Bedarf Artefakte. Wählen Sie das Drei-Kammer-Modell aus und klicken Sie auf Anpassen, um eine Anzeige zu erhalten, die die FITC-Sinitrin-Clearance in Minuten anzeigt, und berechnen Sie den TGFR anhand dieser Gleichung.
Sowohl die Schein- als auch die Sepsistiere hatten ein vergleichbares Gewicht. Nach 12 Stunden Sepsis wurden in der Sepsis-Gruppe erhöhte Serumspiegel von C-reaktivem Protein, einem Marker für Sepsis, beobachtet. FITC-Sinitrin-Clearance-Kurven wurden für Scheinferkel und septische Ferkel 12 Stunden nach der Operation gezeigt.
Septische Schweine mit eingeschränkter Nierenfunktion zeigten eine vergrößerte Fläche unter der Kurve. Die Ferkel mit Sepsis zeigten eine gestörte Clearance von FITC-Sinistrin, was auf eine akute Nierenschädigung hindeutet. Die durchschnittliche Halbwertszeit für FITC-Sinistrin in der Schein- und Sepsis-Gruppe betrug 114 bzw. 537 Minuten.
Die durchschnittliche GFR in der Scheingruppe war signifikant höher als in der Sepsis-Gruppe. Der Serumkreatininspiegel nach null und 12 Stunden war in der Scheingruppe ähnlich. Es wurde jedoch ein signifikanter Anstieg des Kreatininspiegels bei den septischen Schweinen nach 12 Stunden beobachtet.
Stellen Sie sicher, dass die Batterie ordnungsgemäß an die Ferkel angeschlossen ist. Wenn sich die Batterien lösen, funktioniert das Gerät nicht. Versuchen Sie, das FITC-Sinistrin in einen Flüssigkeitsbolus zu injizieren, um mehrere Spitzen zu verhindern.
Stellen Sie außerdem sicher, dass das Gerät ordnungsgemäß mit den Ferkeln verbunden ist, um Bewegungsartefakte zu vermeiden. Mit einer Echtzeitmessung der GFR können wir die Nierenfunktion richtig bewerten, um AKI im Frühstadium zu erkennen und möglicherweise die untersuchten Therapeutika zu bewerten.
