TGFR предлагает оценку функций почек в режиме реального времени. По сравнению с традиционными маркерами, СКФ может контролировать изменения функции почек у одних и тех же животных несколько раз. Кроме того, техника не требует сбора крови или мочи.
С недавними достижениями в области ксенотрансплантации будут проводиться дополнительные исследования с использованием модели свиней. Поэтому мы считаем, что этот инструмент будет необходим для трансляционных исследований, и он, скорее всего, будет использоваться клинически в ближайшие годы. Эксперимент проводится на трех-семидневных поросятах.
Животные склонны к переохлаждению, гиповолемии и другим осложнениям, возникающим в результате хирургического вмешательства. Следовательно, требуется тщательный мониторинг на протяжении всей процедуры. Кроме того, методология требует практики, поскольку она включает в себя трахеостомию и канюляцию сосудов.
После подготовки животного к процедуре используйте хирургическое лезвие для создания пяти-шестисантиметрового левого парамедианного вертикального разреза, так как слепая кишка у свиней лежит в левой параягичной ямке. Рассекайте слои брюшной стенки, избегая травмирования поверхностных эпигастральных сосудов. Как только перитонеальный слой разрезается, используйте втягивающее устройство для улучшения доступа к внутрибрюшным структурам и идентификации спиральной толстой кишки в верхнем левом квадранте брюшной полости.
Чтобы найти слепую кишку, проследите спираль толстой кишки каудально и дорсально. Спиральная толстая кишка у основания слепой кишки соединена с подвздошной костью. Лигат слепой кишки только дистальнее илеоцекального соединения.
Используя иглу 18-го калибра, сделайте семь проколов в слепой кишке и выдавите кал в область брюшины. Закройте брюшные слои шелковым швом 3/0, используя либо простые прерванные, либо непрерывные швы. Степлер также может быть использован для закрытия слоя кожи, если таковой имеется.
После восьми часов лигирования слепой кишки инициируют трансдермальное измерение СКФ. Используйте программное обеспечение MB Service версии 3.0 для настройки частоты дискретизации на устройстве GFR. С помощью разъема USB подключите трансдермальное устройство GFR к компьютеру.
Откройте программное обеспечение службы MB. Нажмите кнопку «Подключить» и отрегулируйте время до 4 000 миллисекунд. Нажмите кнопку Записать, чтобы сохранить параметры, а затем нажмите кнопку Отключить.
Прикрепите двусторонние клеевые пластыри с прозрачным окном к одной стороне устройства. Подключите батарею к устройству, гарантируя, что светодиод перекрывает прозрачное окно, чтобы обеспечить обнаружение трассировщика. Как только батарея будет прикреплена, немедленно приклейте клейкий пластырь к устройству на место.
Убедитесь, что он хорошо защищен. Поскольку поросята глубоко обезболены, лента может быть ненужной для удержания устройства на месте. Приготовьте 50 миллиграммов на миллилитр раствора FITC-синистрина с физиологическим раствором и введите соответствующую дозировку в шприц.
Прикрепите шприц с лекарством к одной стороне трехстороннего запорного крана, а солевой смыв на другой стороне запорного крана. Толкните FITC-синистрин, сразу после чего следует пять миллилитров физиологического болюса, прежде чем закрыть трехсторонний запорный кран к поросеновой вене. Держите устройство прикрепленным к поросенку в течение четырех часов.
Чтобы избежать артефактов движения в течение этого времени, держите поросенка под наркозом, как описано в рукописи. По истечении четырех часов извлеките устройство и немедленно отсоедините аккумулятор. Подключите трансдермальное устройство GFR к компьютеру с помощью разъема USB, предоставленного поставщиком.
Откройте лабораторное программное обеспечение MB, чтобы получить данные с устройства. Чтобы сохранить необработанные данные, нажмите кнопку Подключиться и выберите Прочитать. Затем подождите, пока устройство закончит чтение.
Нажмите кнопку Переименовать и, наконец, нажмите кнопку Сохранить. Обрабатывайте и оценивайте сохраненные данные в аналитическом программном обеспечении в соответствии с инструкциями руководства. Вкратце, откройте MB studio и нажмите кнопку Загрузить, чтобы импортировать сохраненные данные.
Отрегулируйте смещение, старт и стоп позиции с помощью автоматических маркеров. При необходимости удалите артефакты. Выберите трехкамерную модель и нажмите кнопку «Подгонка», чтобы получить показания, показывающие зазор FITC-синистрина за считанные минуты, и рассчитать TGFR с помощью этого уравнения.
Как животные с бутафорией, так и животные сепсиса имели сопоставимый вес. После 12 часов сепсиса в группе сепсиса наблюдалось повышение сывороточных уровней С-реактивного белка, маркера сепсиса. Кривые клиренса FITC-синистрина были показаны для фиктивных и септических поросят через 12 часов после операции.
Септические свиньи с нарушением функции почек продемонстрировали увеличенную площадь под кривой. У поросят с сепсисом наблюдалось нарушение клиренса FITC-синистрина, что указывает на острое повреждение почек. Средний период полувыведения FITC-синистрина в группах фиктивного и сепсиса составил 114 и 537 минут соответственно.
Средний СКФ в фиктивной группе был значительно выше, чем в группе сепсиса. Уровень креатинина в сыворотке крови при нуле и 12 часах был аналогичен в фиктивной группе. Однако значительное повышение наблюдалось в уровне креатинина у септических свиней через 12 часов.
Убедитесь, что батарея правильно подключена к поросятам. Если батареи выйдут из строя, устройство не будет работать. Попробуйте ввести FITC-синистрин в один жидкий болюс, чтобы предотвратить множественные пики.
Кроме того, убедитесь, что устройство правильно подключено к поросятам, чтобы предотвратить артефакты движения. С помощью измерения СКФ в режиме реального времени мы можем правильно оценить функцию почек для выявления ОПН на ранней стадии и, возможно, оценить исследуемые терапевтические агенты.
