Esta novedosa técnica de banda aórtica permite la inducción de hipertrofia cardíaca por sobrecarga de presión en ratones con menor varianza y mayor reproducibilidad. La colocación de un anillo de goma con un diámetro fijo alrededor de la aorta induce un aumento constante de la velocidad de flujo en la aorta transversa, generando así hipertrofia cardíaca reproducible. Este procedimiento debe ser realizado por alguien que ya tenga experiencia con técnicas de anestesia y microcirugía en roedores, o que tenga a alguien con experiencia que pueda guiar.
Comience realizando un corte de la junta tórica bajo el microscopio usando tijeras o un bisturí para permitir la colocación alrededor de la aorta. Perfore cada lado del anillo cerca del corte con una aguja conectada con un 8-0 sutura no absorbible, y tire del hilo. Corte y deje de dos a tres centímetros en un lado y dos centímetros en el otro lado para sujetar la junta tórica alrededor de la aorta en el paso final.
Antes de la cirugía, tome la ayuda para la ligadura y tire del extremo del hilo de un lado del anillo a través del orificio de la ayuda para la ligadura. Coloque la ayuda para la ligadura con la junta tórica adjunta a un lado para colocarla. Afeite el pelaje en el lado izquierdo del tórax del ratón anestesiado.
Luego coloque el ratón de nuevo en la cámara llena de isoflurano para una sedación suficiente antes de la intubación. Encienda la almohadilla térmica antes de la cirugía para mantener la temperatura corporal del animal a 37 grados centígrados. Conecte la almohadilla térmica a una sonda rectal para mantener la temperatura corporal del ratón automáticamente.
Estire una banda elástica alrededor de la almohadilla térmica para fijar el mouse con los dientes frontales en la placa. Coloque el ratón anestesiado en la almohadilla térmica en posición supina. Coloque la banda elástica sobre los dientes frontales del animal para extender el cuello sobre la placa.
Enfocar una fuente de luz en la garganta para una buena visibilidad de la abertura de la tráquea para la intubación endotraqueal. Abra la boca suavemente con una mano, colocando una ayuda para la intubación con la otra mano y fórceps pequeños. Mueva suavemente la lengua para despejar la abertura de la tráquea.
Introducir el tubo endotraqueal en la tráquea y por otro lado, continuar sosteniendo la ayuda para la intubación. Conecte la posición del tubo endotraqueal a través de una llave de paso de tres vías a un ventilador para ratones para confirmar la posición correcta del tubo endotraqueal. Controle la ventilación correcta de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Confirme la profundidad anestésica suficiente mediante una revisión del reflejo de pellizco del dedo del pie. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar la sequedad durante la cirugía. Desinfecte el área de la cirugía con una solución desinfectante disponible comercialmente.
Usando tijeras, haga una incisión de piel de 0.5 a un centímetro de largo en el medio de una línea entre el proceso xifoide y la axila izquierda. Use fórceps para separar la capa muscular de las costillas subyacentes y coloque dos retractores de cinco milímetros en la incisión para exponer la caja torácica. Para comenzar la toracotomía izquierda, realice una incisión de uno a dos milímetros en los músculos intercostales entre la segunda y la tercera costilla con tijeras de microresorte.
Abra la cavidad torácica y extienda la incisión con fórceps en ángulo de 45 grados. Coloque tres retractores torácicos en la incisión para abrir la cavidad torácica y mejorar la visualización. Para exponer el arco aórtico, trate de levantar y separar suavemente el timo y el tejido graso del arco con pinzas en ángulo de punta fina de 45 grados.
Exponga el arco aórtico con fórceps en ángulo de 45 grados en una mano. Por otro lado, coloque la junta tórica conectada con la ayuda de ligadura a través de las roscas de un lado unidas anteriormente. Pasar los hilos usando la ayuda de ligadura debajo del arco aórtico desde la caudal hasta el lado craneal de la aorta transversa entre las arterias braquiocefálica y carótida común izquierda.
Tome ambos hilos entre la ayuda de ligadura y el arco aórtico con los fórceps con cuidado. Retire la ayuda de ligadura y coloque suavemente la junta tórica alrededor del arco tirando de los hilos de cada lado. Después de un posicionamiento exitoso, fije la junta tórica con los hilos y un nudo quirúrgico.
Haga un nudo adicional para evitar abrirlo por cada lado. Después de la ligadura de la junta tórica, retire los tres retractores torácicos de la incisión. Si es necesario, elimine el aire residual del tórax llenándolo con una solución salina isotónica tibia al 0,9%.
Para exponer la incisión del tórax para la sutura, tome dos retractores de cinco milímetros nuevamente para sostener la piel de lado. Cierre el tórax con dos o tres suturas 6-0 no absorbibles. Retire los dos retractores y cierre la piel con tres a cinco suturas absorbibles 4-0.
Luego apague el isoflurano y el monitor. Pellizque la salida del ventilador durante dos segundos para volver a inflar los pulmones. Un día después de la cirugía, verifique la estenosis usando ultrasonido midiendo la velocidad máxima del flujo sobre la estenosis.
Para las mediciones, utilice una ecocardiografía con un sistema de ultrasonido y una sonda transductora con una frecuencia de 30 megahercios. Coloque al animal anestesiado en la almohadilla térmica en posición supina y conecte la almohadilla térmica con una sonda rectal para mantener la temperatura corporal a 37 grados centígrados, y controle la frecuencia cardíaca con un ECG utilizando cuatro sensores de pata de ratón. Una banda aórtica de junta tórica realizada con éxito da como resultado un aumento de la velocidad de flujo sobre la estenosis medida por ultrasonido.
Para esta medición, coloque la cabeza del transductor paraesternalmente en el lado derecho del tórax para localizar el arco aórtico mediante imágenes bidimensionales. Use el doppler color para visualizar el flujo sanguíneo en la aorta y mida con el doppler de onda pulsada la velocidad del flujo sanguíneo sobre la estenosis. Visualice las arterias carótidas comunes derecha e izquierda mediante imágenes bidimensionales.
Coloque la cabeza del transductor horizontal en los lados izquierdo y derecho del cuello en un ángulo de 45 grados, y use el doppler de onda pulsada para determinar la velocidad del flujo sanguíneo. La inducción exitosa de la estenosis aórtica se observó por el aumento de la velocidad del flujo sanguíneo sobre la estenosis en la aorta medida por ultrasonido doppler de onda pulsada. Además, la relación de velocidad del flujo sanguíneo entre las arterias carótidas comunes derecha e izquierda se determinó como un marcador funcional de la banda aórtica de la junta tórica.
Dos semanas después de la cirugía, se observó un aumento de la pared posterior del ventrículo izquierdo y diámetros del tabique intraventricular en la diástole. Además, se documentó un empeoramiento progresivo de la función cardíaca midiendo la disminución de la fracción de eyección del ventrículo izquierdo. Al asegurar la junta tórica alrededor del arco aórtico, es importante cerrar el anillo en ambos lados con un nudo para obtener un resultado óptimo.
