Diese neuartige Technik des Aortenbandes ermöglicht die Induktion von Drucküberlastung Herzhypertrophie bei Mäusen mit geringerer Varianz und höherer Reproduzierbarkeit. Das Platzieren eines Gummirings mit festem Durchmesser um die Aorta induziert eine konstant erhöhte Strömungsgeschwindigkeit in der Queraorta und erzeugt so eine reproduzierbare Herzhypertrophie. Dieses Verfahren sollte von jemandem durchgeführt werden, der bereits Erfahrung mit Anästhesie und mikrochirurgischen Techniken bei Nagetieren hat oder jemanden mit Erfahrung hat, der führen kann.
Beginnen Sie mit einem Schnitt des O-Rings unter dem Mikroskop mit einer Schere oder einem Skalpell, um die Platzierung um die Aorta zu ermöglichen. Durchbohren Sie jede Ringseite in der Nähe des Schnitts mit einer Nadel, die mit einem 8-0 verbunden ist Nicht resorbierbare Naht und ziehen Sie den Faden. Schneiden Sie und lassen Sie zwei bis drei Zentimeter auf der einen Seite und zwei Zentimeter auf der anderen Seite, um den O-Ring im letzten Schritt um die Aorta zu befestigen.
Nehmen Sie vor der Operation die Ligaturhilfe und ziehen Sie das Ende des Fadens einer Ringseite durch das Loch der Ligationshilfe. Legen Sie die Ligaturhilfe mit dem angebrachten O-Ring zur Platzierung beiseite. Rasieren Sie das Fell auf der linken Thoraxseite der betäubten Maus.
Setzen Sie die Maus dann wieder in die mit Isofluran gefüllte Kammer ein, um vor der Intubation eine ausreichende Sedierung zu gewährleisten. Schalten Sie das Heizkissen vor der Operation ein, um die Körpertemperatur des Tieres bei 37 Grad Celsius zu halten. Schließen Sie das Heizkissen an eine rektale Sonde an, um die Körpertemperatur der Maus automatisch zu halten.
Spannen Sie ein Gummiband um das Heizkissen, um die Maus mit den Frontzähnen auf der Platte zu fixieren. Legen Sie die betäubte Maus in Rückenlage auf das Heizkissen. Legen Sie das Gummiband über die Vorderzähne des Tieres, um den Hals auf der Platte zu verlängern.
Fokussieren Sie eine Lichtquelle auf den Hals für eine gute Sichtbarkeit der Öffnung der Luftröhre für die endotracheale Intubation. Öffnen Sie den Mund vorsichtig mit einer Hand und positionieren Sie mit der anderen Hand und einer kleinen Pinzette eine Intubationshilfe. Bewegen Sie vorsichtig die Zunge, um die Öffnung der Luftröhre zu reinigen.
Führen Sie andererseits den Endotrachealtubus in die Luftröhre ein und halten Sie die Intubationshilfe weiter. Verbinden Sie die Position des Endotrachealtubus über einen Drei-Wege-Absperrhahn mit einem Beatmungsgerät für Mäuse, um die korrekte Position des Endotrachealtubus zu bestätigen. Überwachen Sie die richtige Belüftung gemäß den Anweisungen des Herstellers.
Bestätigen Sie eine ausreichende Anästhesietiefe durch eine Zehenklemmreflexkontrolle. Tragen Sie Augensalbe auf die Augen auf, um Trockenheit während der Operation zu vermeiden. Desinfizieren Sie den Operationsbereich mit einer handelsüblichen Desinfektionslösung.
Machen Sie mit einer Schere einen 0,5 bis einen Zentimeter langen Hautschnitt in der Mitte einer Linie zwischen dem Xiphoidfortsatz und der linken Achselhöhle. Verwenden Sie eine Pinzette, um die Muskelschicht von den darunter liegenden Rippen zu trennen, und legen Sie zwei Fünf-Millimeter-Retraktoren in den Einschnitt, um den Brustkorb freizulegen. Um die linke Thorakotomie zu beginnen, führen Sie einen ein bis zwei Millimeter großen Schnitt in den Interkostalmuskeln zwischen der zweiten und dritten Rippe mit einer Mikrofederschere durch.
Öffnen Sie die Brusthöhle und spreizen Sie den Einschnitt mit einer um 45 Grad abgewinkelten Pinzette. Platzieren Sie drei Brustretraktoren in den Einschnitt, um die Brusthöhle zu öffnen, um die Visualisierung zu verbessern. Um den Aortenbogen freizulegen, versuchen Sie, den Thymus und das Fettgewebe mit einer feinen 45-Grad-Winkelzange vom Bogen zu heben und vorsichtig zu trennen.
Belichten Sie den Aortenbogen mit einer um 45 Grad abgewinkelten Pinzette in einer Hand. Positionieren Sie andererseits den mit der Ligaturhilfe verbundenen O-Ring über die zuvor angebrachten Gewinde einer Seite. Führen Sie die Fäden mit der Ligaturhilfe unter dem Aortenbogen von der kaudalen zur kranialen Seite der transversalen Aorta zwischen den brachiozephalen und linken gemeinsamen Halsschlagadern.
Nehmen Sie beide Fäden zwischen der Ligaturhilfe und dem Aortenbogen mit der Pinzette vorsichtig ein. Entfernen Sie die Ligaturhilfe und positionieren Sie den O-Ring vorsichtig um den Bogen, indem Sie die Fäden auf jeder Seite ziehen. Nach erfolgreicher Positionierung fixieren Sie den O-Ring mit den Gewinden und einem chirurgischen Knoten.
Machen Sie einen zusätzlichen Knoten, um zu vermeiden, dass er auf jeder Seite geöffnet wird. Nach der Ligatur des O-Rings entfernen Sie die drei Brustretraktoren aus dem Einschnitt. Entfernen Sie bei Bedarf die Restluft aus dem Thorax, indem Sie sie mit warmer 0,9% isotonischer Salzlösung füllen.
Um den Thoraxschnitt für die Naht freizulegen, nehmen Sie erneut zwei Fünf-Millimeter-Retraktoren, um die Haut an der Seite zu halten. Schließen Sie den Thorax mit zwei oder drei 6-0 nicht resorbierbaren Nähten. Entfernen Sie die beiden Retraktoren und schließen Sie die Haut mit drei bis fünf 4-0 resorbierbaren Nähten.
Schalten Sie dann das Isofluran aus und überwachen Sie. Kneifen Sie den Abfluss des Beatmungsgeräts für zwei Sekunden ab, um die Lunge wieder aufzublasen. Überprüfen Sie die Stenose einen Tag nach der Operation mit Ultraschall, indem Sie die maximale Fließgeschwindigkeit über der Stenose messen.
Verwenden Sie für Messungen die Echokardiographie mit einem Ultraschallsystem und einer Schallkopfsonde mit einer Frequenz von 30 Megahertz. Legen Sie das betäubte Tier in Rückenlage auf das Heizkissen und verbinden Sie das Heizkissen mit einer rektalen Sonde, um die Körpertemperatur bei 37 Grad Celsius zu halten, und überwachen Sie die Herzfrequenz mit einem EKG mit vier Mauspfotensensoren. Eine erfolgreich durchgeführte O-Ring-Aortenbandierung führt zu einer erhöhten Strömungsgeschwindigkeit über der Stenose, gemessen durch Ultraschall.
Positionieren Sie für diese Messung den Schallkopf parasternal auf der rechten Thoraxseite, um den Aortenbogen durch zweidimensionale Bildgebung zu lokalisieren. Verwenden Sie den Farbdoppler, um den Blutfluss in der Aorta zu visualisieren, und messen Sie mit dem gepulsten Dopplerblutfluss die Blutflussgeschwindigkeit über die Stenose. Visualisieren Sie die rechten und linken gemeinsamen Halsschlagadern durch zweidimensionale Bildgebung.
Positionieren Sie den Schallkopf horizontal auf der linken und rechten Seite des Halses in einem 45-Grad-Winkel und verwenden Sie den gepulsten Wellendoppler, um die Blutflussgeschwindigkeit zu bestimmen. Die erfolgreiche Induktion der Aortenstenose wurde durch erhöhte Blutflussgeschwindigkeit über der Stenose in der Aorta beobachtet, gemessen durch gepulsten Wellendoppler-Ultraschall. Zusätzlich wurde das Blutflussgeschwindigkeitsverhältnis zwischen den rechten und linken Karotisarterien als funktioneller Marker der O-Ring-Aortenbande bestimmt.
Zwei Wochen nach der Operation wurden erhöhte Durchmesser der linken ventrikulären hinteren Wand und des intraventrikulären Septums in der Diastole beobachtet. Zusätzlich wurde eine fortschreitende Verschlechterung der Herzfunktion durch Messung einer verminderten linksventrikulären Ejektionsfraktion dokumentiert. Bei der Sicherung des O-Rings um den Aortenbogen ist es wichtig, den Ring auf beiden Seiten mit einem Knoten zu schließen, um ein optimales Ergebnis zu erzielen.
