Esta nova técnica de bandagem aórtica permite a indução de hipertrofia cardíaca por sobrecarga de pressão em camundongos com menor variância e maior reprodutibilidade. A colocação de um anel de borracha com diâmetro fixo ao redor da aorta induz um aumento consistente da velocidade de fluxo na aorta transversal, gerando hipertrofia cardíaca reprodutível. Este procedimento deve ser realizado por alguém que já tenha experiência com técnicas de anestesia e microcirurgia em roedores, ou tenha alguém com experiência que possa orientar.
Comece realizando um corte do O-ring sob o microscópio usando uma tesoura ou um bisturi para permitir a colocação ao redor da aorta. Perfure cada lado do anel perto do corte com uma agulha conectada com um 8-0 sutura não absorvível e puxe o fio. Corte e deixe dois a três centímetros de um lado e dois centímetros do outro lado para prender o anel O ao redor da aorta na etapa final.
Antes da cirurgia, tome o auxiliar de ligadura e puxe a extremidade do fio de um lado do anel através do orifício do auxiliar de ligadura. Coloque o auxiliar de ligadura com o O-ring anexado de lado para colocação. Raspe a pele no lado esquerdo do tórax do rato anestesiado.
Em seguida, coloque o rato de volta na câmara cheia de isoflurano para sedação suficiente antes da intubação. Ligue a almofada de aquecimento antes da cirurgia para manter a temperatura corporal do animal a 37 graus Celsius. Conecte a almofada de aquecimento a uma sonda retal para manter a temperatura corporal do mouse automaticamente.
Estique um elástico ao redor da almofada de aquecimento para fixar o mouse com os dentes da frente na placa. Coloque o rato anestesiado na almofada de aquecimento em decúbito dorsal. Coloque o elástico sobre os dentes da frente do animal para estender o pescoço na placa.
Concentre uma fonte de luz na garganta para uma boa visibilidade da abertura da traqueia para a intubação endotraqueal. Abra a boca suavemente com uma mão, posicionando um auxiliar de intubação com a outra mão e pinça pequena. Mova suavemente a língua para limpar a abertura da traqueia.
Introduza o tubo endotraqueal na traqueia e, por outro lado, continue segurando o auxiliar de intubação. Conecte a posição do tubo endotraqueal através de uma torneira de três vias a um ventilador para camundongos para confirmar a posição correta do tubo endotraqueal. Monitore a ventilação correta de acordo com as instruções do fabricante.
Confirme a profundidade anestésica suficiente por uma verificação do reflexo da pinça do dedo do pé. Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento durante a cirurgia. Desinfetar a área da cirurgia usando uma solução desinfetante comercialmente disponível.
Usando uma tesoura, faça uma incisão de pele de 0,5 a um centímetro de comprimento no meio de uma linha entre o processo xifoide e a axila esquerda. Use fórceps para separar a camada muscular das costelas subjacentes e coloque dois afastadores de cinco milímetros na incisão para expor a caixa torácica. Para iniciar a toracotomia esquerda, realize uma incisão de um a dois milímetros nos músculos intercostais entre a segunda e a terceira costela usando uma tesoura de micromola.
Abra a cavidade torácica e espalhe a incisão com pinça angular de 45 graus. Coloque três afastadores torácicos na incisão para abrir a cavidade torácica para melhorar a visualização. Para expor o arco aórtico, tente levantar e separar suavemente o timo e o tecido adiposo do arco com pinças angulares de 45 graus de ponta fina.
Exponha o arco aórtico com pinça angular de 45 graus em uma mão. Por outro lado, posicione o anel O conectado com o auxiliar de ligadura através dos fios de um lado anexados anteriormente. Passar os fios usando o auxiliar de ligadura sob o arco aórtico da caudal para o lado craniano da aorta transversal entre as artérias braquiocefálica e carótida comum esquerda.
Pegue ambos os fios entre o auxiliar de ligadura e o arco aórtico com o fórceps com cuidado. Remova o auxiliar de ligadura e posicione suavemente o O-ring ao redor do arco, puxando os fios de cada lado. Após o posicionamento bem-sucedido, fixe o O-ring com os fios e um nó cirúrgico.
Faça um nó adicional para evitar abri-lo de cada lado. Após a ligadura do anel O, retire os três afastadores torácicos da incisão. Se necessário, elimine o ar residual do tórax, enchendo-o com solução salina isotônica quente a 0,9%.
Para expor a incisão torácica para sutura, tome dois afastadores de cinco milímetros novamente para segurar a pele do lado. Feche o tórax com duas ou três suturas não absorvíveis 6-0. Retire os dois afastadores e feche a pele com três a cinco suturas absorvíveis 4-0.
Em seguida, desligue o isoflurano e monitore. Aperte o fluxo de saída do ventilador por dois segundos para reinflar os pulmões. Um dia após a cirurgia, verifique a estenose usando ultrassom, medindo a velocidade máxima do fluxo sobre a estenose.
Para medições, use ecocardiografia com um sistema de ultrassom e uma sonda transdutora com uma frequência de 30 mega-hertz. Coloque o animal anestesiado na almofada de aquecimento em decúbito dorsal e conecte a almofada de aquecimento com uma sonda retal para manter a temperatura corporal em 37 graus Celsius e monitore a frequência cardíaca com um ECG usando quatro sensores de pata de rato. Uma banda aórtica O-ring realizada com sucesso resulta em um aumento da velocidade de fluxo sobre a estenose, conforme medido por ultrassom.
Para esta medida, posicione a cabeça do transdutor paraesternalmente no lado direito do tórax para localizar o arco aórtico por imagem bidimensional. Use o doppler colorido para visualizar o fluxo sanguíneo na aorta e meça com a velocidade do fluxo sanguíneo do doppler de onda pulsada sobre a estenose. Visualize as artérias carótidas comuns direita e esquerda por imagem bidimensional.
Posicione a cabeça do transdutor horizontal nos lados esquerdo e direito do pescoço em um ângulo de 45 graus e use o doppler de onda pulsada para determinar a velocidade do fluxo sanguíneo. A indução bem-sucedida da estenose aórtica foi observada pelo aumento da velocidade do fluxo sanguíneo sobre a estenose na aorta medida por ultrassonografia com doppler de onda pulsada. Além disso, a razão de velocidade de fluxo sanguíneo entre as artérias carótidas comuns direita e esquerda foi determinada como um marcador funcional de bandagem aórtica do anel O.
Duas semanas após a cirurgia, observou-se aumento da parede posterior do ventrículo esquerdo e dos diâmetros do septo intraventricular na diástole. Além disso, uma piora progressiva da função cardíaca foi documentada pela medição da fração de ejeção do ventrículo esquerdo diminuído. Ao fixar o anel O ao redor do arco aórtico, é importante fechar o anel em ambos os lados com um nó para obter um resultado ideal.
