Этот новый метод полосирования аорты позволяет индуцировать гипертрофию сердца при перегрузке давлением у мышей с меньшей дисперсией и более высокой воспроизводимостью. Размещение резинового кольца с фиксированным диаметром вокруг аорты индуцирует последовательное увеличение скорости потока в поперечной аорте, тем самым вызывая воспроизводимую гипертрофию сердца. Эта процедура должна быть выполнена кем-то, кто уже имеет опыт работы с анестезией и методами микрохирургии у грызунов или имеет кого-то с опытом, который может руководить.
Начните с выполнения одного разреза уплотнительного кольца под микроскопом с помощью ножниц или скальпеля, чтобы обеспечить размещение вокруг аорты. Проткните каждую сторону кольца близко к разрезу иглой, соединенной с 8-0 нерассасывающийся шов, и потяните за нить. Отрежьте и оставьте два-три сантиметра на одной стороне, и два сантиметра на другой стороне, чтобы закрепить уплотнительное кольцо вокруг аорты на заключительном этапе.
Перед операцией возьмите средство для перевязки и потяните конец нити одной кольцевой стороны через отверстие средства для перевязки. Отложите средство для перевязки с прикрепленным уплотнительным кольцом в сторону для размещения. Побрейте мех на левой стороне грудной клетки анестезированной мыши.
Затем поместите мышь обратно в заполненную изофлураном камеру для достаточной седации перед интубацией. Включите грелку перед операцией, чтобы поддерживать температуру тела животного на уровне 37 градусов по Цельсию. Подключите грелку к ректальному зонду, чтобы автоматически поддерживать температуру тела мыши.
Растяните резинку вокруг грелки, чтобы закрепить мышь передними зубьями на пластине. Поместите обезболенную мышь на грелку в лежачем положении. Поместите резинку на передние зубы животного, чтобы вытянуть шею на пластине.
Сфокусируйте источник света на горле для хорошей видимости отверстия трахеи для эндотрахеальной интубации. Осторожно откройте рот одной рукой, другой рукой расположите интубационное средство и небольшими щипцами. Осторожно двигайте языком, чтобы очистить отверстие трахеи.
Введите эндотрахеальную трубку в трахею и, с другой стороны, продолжайте удерживать интубационное средство. Подключите положение эндотрахеальной трубки через трехсторонний запорный кран к вентилятору для мышей, чтобы подтвердить правильное положение эндотрахеальной трубки. Контролируйте правильную вентиляцию в соответствии с инструкциями производителя.
Подтвердите достаточную глубину анестезии с помощью рефлекторной проверки пальца ноги. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы избежать сухости во время операции. Продезинфицируйте область операции, используя коммерчески доступный дезинфицирующий раствор.
С помощью ножниц сделайте разрез кожи длиной от 0,5 до одного сантиметра в середине линии между мечевидным отростком и левой подмышечной впадиной. Используйте щипцы, чтобы отделить мышечный слой от нижележащих ребер, и поместите два пятимиллиметровых ретрактора в разрез, чтобы обнажить грудную клетку. Чтобы начать левую торакотомию, выполните одно-двухмиллиметровый разрез в межреберных мышцах между вторым и третьим ребром с помощью микропружинальных ножниц.
Откройте грудную полость и распределите разрез 45-градусными угловыми щипцами. Поместите три ретрактора грудной клетки в разрез для открытия грудной полости для улучшения визуализации. Чтобы обнажить дугу аорты, попробуйте поднять и осторожно отделить тимус и жировую ткань от дуги с помощью тонких щипцов под углом 45 градусов.
Обнажите дугу аорты с 45-градусными угловыми щипцами в одной руке. С другой стороны, расположите уплотнительное кольцо, связанное с помощью средства перевязки через нити одной стороны, прикрепленные ранее. Проведите нити с помощью средства перевязки под дугой аорты от каудальной к черепной стороне поперечной аорты между брахиоцефальной и левой общей сонной артериями.
Осторожно возьмите обе нити между средством перевязки и дугой аорты щипцами. Снимите средство перевязки и аккуратно расположите уплотнительное кольцо вокруг арки, потянув нити с каждой стороны. После успешного позиционирования закрепите уплотнительное кольцо нитями и хирургическим узлом.
Сделайте дополнительный узел, чтобы не открывать его с каждой стороны. После перевязки уплотнительного кольца из разреза три ретрактора грудной клетки. При необходимости исключить остаточный воздух из грудной клетки, заполнив ее теплым 0,9% изотоническим раствором соли.
Чтобы обнажить разрез грудной клетки для шва, снова возьмите два пятимиллиметровых ретрактора, чтобы держать кожу сбоку. Закройте грудную клетку двумя, или тремя 6-0 нерассасывающимися швами. Удалите два втягивающих средства и закройте кожу тремя-пятью рассасывающимися швами 4-0.
Затем выключите изофлуран и монитор. Отщипните отток вентилятора на две секунды, чтобы снова сдуть легкие. Через день после операции проверьте стеноз с помощью ультразвука, измерив максимальную скорость потока над стенозом.
Для измерений используют эхокардиографию с ультразвуковой системой и датчиком зонда с частотой 30 мегагерц. Поместите обезболенное животное на грелку в лежачем положении и подключите грелку ректальным зондом для поддержания температуры тела на уровне 37 градусов Цельсия, а также контролируйте частоту сердечных сокращений с помощью ЭКГ с помощью четырех датчиков лап мыши. Успешно выполненная полосатость уплотнительного кольца приводит к увеличению скорости потока над стенозом, измеренной ультразвуком.
Для этого измерения расположите головку преобразователя парастернально на правой стороне грудной клетки, чтобы локализовать дугу аорты с помощью двумерной визуализации. Используйте цветной допплер для визуализации кровотока в аорте и измеряйте с помощью импульсной волны допплеровскую скорость кровотока над стенозом. Визуализируйте правые и левые общие сонные артерии с помощью двумерной визуализации.
Расположите головку преобразователя горизонтально на левой и правой сторонах шеи под углом 45 градусов и используйте импульсную волновую допплерографию для определения скорости кровотока. Успешная индукция аортального стеноза наблюдалась по увеличению скорости кровотока над стенозом в аорте, измеренным пульсированным волновым допплеровским ультразвуком. Кроме того, соотношение скоростей кровотока между правой и левой общими сонными артериями определяли как функциональный маркер уплотнительного кольца аортального бандажа.
Через две недели после операции наблюдалось увеличение диаметров задней стенки левого желудочка и внутрижелудочковой перегородки в диастоле. Кроме того, прогрессирующее ухудшение сердечной функции было задокументировано путем измерения снижения фракции выброса левого желудочка. При закреплении уплотнительного кольца вокруг дуги аорты важно замыкать кольцо с обеих сторон узлом, чтобы получить оптимальный результат.
