Establecer tumores como la parte posterior del ojo es un desafío. Este método permite la inducción de tumores de melanoma coroideo reproducibles en ratones, y la obtención de imágenes en vivo del crecimiento tumoral para su evaluación. Este protocolo utiliza imágenes OCT en vivo para evaluar la ubicación de los tumores ya en el momento de la inoculación de células tumorales y para seguir el crecimiento tumoral en animales vivos.
El melanoma uveal es una enfermedad devastadora con una tasa cercana al 50% de metástasis. El desarrollo de modelos experimentales es clave para avanzar en la investigación dirigida a nuevas posibilidades terapéuticas. Una ventaja de este método es que la evaluación inmediata del éxito de la inyección permite llegar a grupos de estudio con tumores homogéneos y seguirlos continuamente mediante imágenes en vivo.
Para examinar la progresión del tumor. Inyectar en los ojos del ratón pequeño requiere práctica. La capacidad de visualizar las células inyectadas le permite evaluar su éxito de inmediato y repetir con más ratones según sea necesario.
Demostrando el procedimiento estará el Dr. Dimitri Gaber del Laboratorio de Investigación de Oftalmología del Centro Médico Kaplan. Para comenzar, aplique 0.4% de anestésico oftálmico tópico, oxibuprocaína a ambos ojos del ratón anestesiado. Luego aplique tópicamente 0.5% de Tropicamida en ambos ojos para dilatar las pupilas, seguido de 1.4% de hidroxietilcelulosa como lubricante para evitar el secado de los ojos.
Observe un ojo del ratón bajo un microscopio operativo. Mantenga los párpados abiertos con fórceps intraoculares estériles. Luego sostenga la limbo-conjuntiva temporal superior y tire hacia una posición infranasal.
Asegure esta posición sosteniendo la limbo-conjuntiva durante todo el procedimiento. Usando una punta de aguja de calibre 30 hacer una pequeña peritomía conjuntival en el área temporal dorsal aproximadamente de uno a dos milímetros posterior al limbo. Retire la cápsula de exceso de tendones de la abertura de la peritomía.
Inserte la punta de la aguja para penetrar en la esclerótica creando una pista en el espacio subcoroideo hasta que aparezca el color marrón de la coroides a través de la materia blanca expuesta de la esclerótica. Cargue las células en una jeringa Hamilton de vidrio estéril de 10 microlitros montada con una aguja roma de calibre 32 torcida en un ángulo de 45 grados. Inserte la aguja de la jeringa cargada aproximadamente dos milímetros en el tracto creado e inyecte dos microlitros de la suspensión celular.
Mantenga la aguja en su lugar después de la inyección durante dos o tres segundos hasta que todo el líquido se haya eliminado. Retire la aguja tirando de ella suavemente para evitar fugas del tracto. Inmediatamente después de la inoculación de células de melanoma, observe el ojo inyectado del animal mediante exploraciones OCT.
Con base en las exploraciones, clasifique el desprendimiento de retina o los patrones de RD de acuerdo con tres categorías de RD local, Fuga en el vítreo o RD extendida. Abra un software de análisis de segmentación de OCT para predecir el tamaño del tumor en función de la altura de la RD. Mida la altura de la DR local en las exploraciones de OCT y clasifíquelas en tres grupos. En la fase postoperatoria, aplicar 0,3% de ofloxacino tópicamente.
La predicción basada en OCT del crecimiento tumoral después de la inyección de células subcoroideas se representa en esta figura. Los ratones exhibieron tres patrones de RD, Focal, Leakage To The Vitreous y Extended RD. Hubo una asociación entre el patrón de DR inmediatamente después de la inyección y la localización de los tumores cinco días después de la inyección. La DR focal se asoció con el crecimiento de células tumorales que se limitó a la coroides.
Sin embargo, la observación de células en el vítreo después de la inyección en animales que mostraban RD focal indicó crecimiento tumoral en la cavidad vítrea y la coroides. cuando se observó RD extendida después de la inyección, los tumores se dispersaron por toda la coroides y el vítreo después de cinco días. El rango de tamaños tumorales inducidos en este modelo se puede dividir en pequeño, mediano y grande.
Aquí se muestran imágenes representativas de la medición de OCT de la altura de RD después de la inyección, y la imagen de fondo de ojo correspondiente, una exploración horizontal de OCT de la altura y anchura del tumor en el quinto día después de la inyección, y su imagen de fondo de ojo correspondiente, y la sección correspondiente de ojo teñido de H&E que demuestra mediciones tumorales comparables. Aquí se presentan las mediciones del volumen tumoral de ratones que presentaron DR pequeña, mediana o grande inmediatamente después de la inyección celular. El ajuste de la fuerza de inyección puede afectar el tamaño y la ubicación del tumor.
Es importante calibrar esto y evaluar el patrón de desprendimiento de retina inducido por OCT después de la inyección. La imagen en vivo de los tumores coroideos es una herramienta experimental importante que permite examinar el efecto de diferentes factores o terapias potenciales sobre la progresión tumoral.
