Установление опухолей в качестве задней части глаза является сложной задачей. Этот метод позволяет индукцию воспроизводимых опухолей меланомы хориоидеи у мышей и визуализацию роста опухоли в реальном времени для оценки. Этот протокол использует ОКТ-визуализацию в реальном времени для оценки местоположения опухолей уже во время инокуляции опухолевых клеток и для отслеживания роста опухоли у живых животных.
Увеальная меланома является разрушительным заболеванием с почти 50-процентным уровнем метастазирования. Разработка экспериментальных моделей является ключом к продвижению исследований, направленных на новые терапевтические возможности. Преимущество этого метода заключается в том, что немедленная оценка успешности инъекции позволяет охватить исследуемые группы с однородными опухолями и непрерывно следить за ними с помощью визуализации в реальном времени.
Изучить опухолевую прогрессию. Инъекция в глаза маленькой мыши требует практики. Возможность визуализировать инъецированные клетки позволяет немедленно оценить свой успех и повторить с большим количеством мышей по мере необходимости.
Продемонстрирует процедуру доктор Димитри Габер из Научно-исследовательской лаборатории офтальмологии Медицинского центра Каплан. Для начала нанесите 0,4% местный офтальмологический анестетик, оксибупрокаин, на оба глаза анестезированной мыши. Затем местно нанесите 0,5% тропикамида на оба глаза для расширения зрачков, а затем 1,4% гидроксиэтилцеллюлозы в качестве смазки, чтобы избежать высыхания глаз.
Понаблюдайте за одним глазом мыши под операционным микроскопом. Держите веки открытыми стерильными внутриглазными щипцами. Затем возьмитесь за верхнюю височную лимбоконъюнктиву и потяните к подносовому положению.
Закрепите это положение, удерживая лимбо-конъюнктиву на протяжении всей процедуры. Используя кончик иглы 30 калибра, сделайте небольшую перитомию конъюнктивы в дорсальной височной области примерно на один-два миллиметра позади лимба. Удалите лишнюю сухожильную капсулу из отверстия перитомии.
Вставьте кончик иглы, чтобы проникнуть в склеру, создавая дорожку в субхориоидальном пространстве до тех пор, пока коричневый цвет сосудистой оболочки не появится через открытое белое вещество склеры. Загрузите клетки в стерильный стеклянный шприц Hamilton объемом 10 микролитров, установленный с тупой иглой 32 калибра, скрученной под углом 45 градусов. Введите иглу загруженного шприца примерно на два миллиметра в созданный тракт и введите два микролитра клеточной суспензии.
Удерживайте иглу на месте после инъекции в течение двух-трех секунд, пока вся жидкость не очистится. Извлеките иглу, осторожно вытащив ее, чтобы избежать утечки из тракта. Сразу после инокуляции клеток меланомы наблюдайте за инъецированным глазом животного с помощью ОКТ-сканирования.
На основе сканирования классифицируйте отслоение сетчатки или паттерны RD в соответствии с тремя категориями: локальный RD, утечка в стекловидное тело или расширенный RD. Откройте программное обеспечение для анализа сегментации ОКТ, чтобы предсказать размер опухоли на основе роста RD. Измерьте высоту локального RD при сканировании OCT и разделите их на три группы. В послеоперационном периоде применяют 0,3% офлоксацина местно.
На этом рисунке показано прогнозирование роста опухоли после инъекции субхориоидальных клеток на основе ОКТ. У мышей наблюдались три паттерна: RD, FoCal, Leakage To The Vitreous и Extended RD. Была обнаружена связь между паттерном РД сразу после инъекции и локализацией опухолей через пять дней после инъекции. Фокальный RD был связан с ростом опухолевых клеток, который был ограничен сосудистой оболочкой.
Однако наблюдение за клетками стекловидного тела после инъекции у животных с фокальным РД указывало на рост опухоли в витреальной полости и сосудистой оболочке. при расширенном РД после инъекции опухоли рассеивались по всей сосудистой оболочке и стекловидному телу через пять дней. Диапазон размеров опухолей, индуцированных в этой модели, можно разделить на маленькие, средние и большие.
Здесь показаны репрезентативные изображения ОКТ-измерения высоты RD после инъекции и соответствующее изображение глазного дна, горизонтальное ОКТ-сканирование высоты и ширины опухоли на пятый день после инъекции, а также соответствующее изображение глазного дна, а также соответствующий окрашенный H&E разрез глаза, демонстрирующий сопоставимые измерения опухоли. Здесь представлены измерения объема опухоли у мышей, у которых был маленький, средний или большой RD сразу после инъекции клеток. Регулировка силы инъекции может повлиять на размер и расположение опухоли.
Важно откалибровать это и оценить характер индуцированной отслойки сетчатки с помощью ОКТ после инъекции. Живая визуализация опухолей хориоидеи является важным экспериментальным инструментом, который позволяет изучить влияние различных факторов или потенциальных методов лечения на прогрессирование опухоли.
