Estabelecer tumores como parte posterior do olho é um desafio. Este método permite a indução de tumores reprodutíveis de melanoma de coroide em camundongos e imagens ao vivo do crescimento tumoral para avaliação. Este protocolo utiliza imagens ao vivo da OCT para avaliar a localização dos tumores já no momento da inoculação de células tumorais e acompanhar o crescimento tumoral em animais vivos.
O melanoma uveal é uma doença devastadora com cerca de 50% de metástase. O desenvolvimento de modelos experimentais é fundamental para o avanço de pesquisas voltadas para novas possibilidades terapêuticas. Uma vantagem deste método é que a avaliação imediata do sucesso da injeção permite alcançar grupos de estudo com tumores homogêneos e segui-los continuamente por imagens ao vivo.
Examinar a progressão do tumor. Injetar nos olhos do pequeno rato requer prática. A capacidade de visualizar as células injetadas permite que você avalie seu sucesso imediatamente e repita com mais camundongos, conforme necessário.
Quem demonstrará o procedimento será o Dr. Dimitri Gaber, do Laboratório de Pesquisa em Oftalmologia do Kaplan Medical Center. Para começar, aplique 0,4% de anestésico oftálmico tópico, Oxybuprocaine em ambos os olhos do camundongo anestesiado. Em seguida, aplicar topicamente 0,5% de Tropicamida em ambos os olhos para dilatar as pupilas, seguido de 1,4% de hidroxietil celulose como lubrificante para evitar o ressecamento dos olhos.
Observe um olho do mouse sob um microscópio cirúrgico. Mantenha as pálpebras abertas com pinça intraocular estéril. Em seguida, segure o limbo-conjuntiva temporal superior e puxe para uma posição infranasal.
Garanta essa posição segurando o limbo-conjuntiva durante todo o procedimento. Com ponta de agulha calibre 30, consegue-se uma pequena peritomia conjuntival na área temporal dorsal, aproximadamente um a dois milímetros posterior ao limbo. Remova o excesso de cápsula tendinosa da abertura da peritomia.
Insira a ponta da agulha para penetrar na esclera criando um rastro no espaço subcoroidal até que a cor marrom da coroide apareça através da substância branca exposta da esclera. Coloque as células em uma seringa Hamilton de vidro estéril de 10 microlitros montada com uma agulha romba de calibre 32 torcida em um ângulo de 45 graus. Insira a agulha da seringa carregada aproximadamente dois milímetros no trato criado e injete dois microlitros da suspensão celular.
Segure a agulha no lugar após a injeção durante dois a três segundos até que todo o líquido tenha eliminado. Retire a agulha puxando-a suavemente para evitar fugas do tracto. Imediatamente após a inoculação das células de melanoma, observar o olho injetado do animal por meio de exames de OCT.
Com base nos exames, classifique os padrões de descolamento de retina ou DR de acordo com três categorias DR local, Vazamento para o vítreo ou DR estendida. Abra um software de análise de segmentação da OCT para prever o tamanho do tumor com base na altura da DR. Meça a altura da DR Local nos exames de OCT e classifique-os em três grupos. Na fase pós-operatória, aplicar 0,3% de Ofloxacina topicamente.
A predição baseada na OCT do crescimento tumoral após injeção de células subcoroidais é mostrada nesta figura. Os camundongos exibiram três padrões de RD, Focal, Leakage To The Vitreous e Extended RD. Houve associação entre o padrão de DR imediatamente após a injeção e a localização dos tumores cinco dias após a injeção. A DR focal foi associada ao crescimento de células tumorais que se limitava à coroide.
No entanto, a observação de células no vítreo após a injeção em animais com DR Focal indicou crescimento tumoral na cavidade vítrea e na coroide. quando a DR estendida foi observada após a injeção, os tumores estavam dispersos por toda a coroide e vítreo após cinco dias. A variedade de tamanhos de tumor induzidos neste modelo pode ser dividida em pequeno, médio e grande.
Aqui são mostradas imagens representativas da medida da OCT da altura da RD após a injeção, e a imagem de fundo de olho correspondente, uma varredura horizontal da OCT da altura e largura do tumor no quinto dia após a injeção, e sua imagem de fundo de olho correspondente, e a seção correspondente do olho corado por H&E demonstrando medidas comparáveis do tumor. Medidas de volume tumoral de camundongos que apresentaram DR pequena, média ou grande imediatamente após a injeção celular são apresentadas aqui. O ajuste da força de injeção pode afetar o tamanho e a localização do tumor.
É importante calibrá-lo e avaliar o padrão de descolamento de retina induzido pela OCT após a injeção. A imagem ao vivo de tumores de coroide é uma importante ferramenta experimental que permite examinar o efeito de diferentes fatores ou potenciais terapias na progressão tumoral.
