ביסוס גידולים כחלק האחורי של העין הוא מאתגר. שיטה זו מאפשרת השראת גידולי מלנומה כורואידית הניתנים לשחזור בעכברים, והדמיה חיה של צמיחת הגידול לצורך הערכה. פרוטוקול זה משתמש בהדמיה חיה OCT כדי להעריך את מיקום הגידולים כבר בזמן חיסון תאי הגידול, ולעקוב אחר צמיחת הגידול בבעלי חיים חיים.
מלנומה של Uveal היא מחלה הרסנית עם שיעור גרורות קרוב ל-50%. פיתוח מודלים ניסיוניים הוא המפתח לקידום מחקר המכוון לאפשרויות טיפוליות חדשות. היתרון של שיטה זו הוא שההערכה המיידית של הצלחת ההזרקה מאפשרת להגיע לקבוצות מחקר עם גידולים הומוגניים ולעקוב אחריהם ברציפות באמצעות הדמיה חיה.
כדי לבחון את התקדמות הגידול. הזרקה לעיניו של העכבר הקטן דורשת תרגול. היכולת לדמיין את התאים המוזרקים מאפשרת לך להעריך את ההצלחה שלך באופן מיידי ולחזור עם עכברים נוספים לפי הצורך.
מי שידגים את ההליך יהיה ד"ר דימיטרי גאבר מהמעבדה לחקר העיניים במרכז הרפואי קפלן. כדי להתחיל, להחיל 0.4% הרדמה אופתלמית אקטואלית, Oxybuprocaine על שתי העיניים של העכבר מורדם. לאחר מכן יש למרוח באופן מקומי 0.5% טרופיקמיד על שתי העיניים להרחבת האישונים, ולאחר מכן 1.4% תאית הידרוקסיאתיל כחומר סיכה למניעת ייבוש העיניים.
התבונן בעין אחת של העכבר תחת מיקרוסקופ הפעלה. החזיקו את העפעפיים פתוחים בעזרת מלקחיים תוך עיניים סטריליות. לאחר מכן החזיקו את לחמית הלימבו הרקתית העליונה ומשכו לכיוון תנוחת אף אינפרא.
אבטח תנוחה זו על ידי החזקת הלימבו-לחמית לאורך כל ההליך. באמצעות קצה מחט של 30 מד ליצור פריטומיה קטנה של הלחמית באזור הרקתי הגבי כמילימטר עד שני מילימטרים אחוריים ללימבוס. הסר את קפסולת הגידים העודפים מפתח הצפק.
הכנס את קצה המחט כדי לחדור את לובן העין וליצור מסילה לתוך החלל הסובכורואידי עד שהצבע החום של הכורואיד מופיע דרך החומר הלבן החשוף של הסקלרה. העמיסו את התאים לתוך מזרק המילטון סטרילי מזכוכית 10 מיקרוליטר המורכב עם מחט קהה 32 מד מעוותת בזווית של 45 מעלות. הכנס את המחט של המזרק הטעון כשני מילימטרים לתוך מערכת שנוצרה, והזריק שני מיקרוליטר של השעיית התא.
החזיקו את המחט במקומה לאחר ההזרקה למשך שתיים עד שלוש שניות עד שכל הנוזלים התפנו. הסר את המחט על ידי שליפתה החוצה בעדינות כדי למנוע דליפה מדרכי הנשימה. מיד לאחר חיסון תאי המלנומה, התבוננו בעין המוזרקת של החיה על ידי סריקות OCT.
בהתבסס על הסריקות, סווגו את ניתוק הרשתית או דפוסי RD לפי שלוש קטגוריות RD מקומי, דליפה לתוך הזגוגית, או RD מורחב. פתח תוכנת ניתוח פילוח OCT כדי לחזות את גודל הגידול בהתבסס על גובה RD. מדוד את הגובה של RD מקומי בסריקות OCT וסווג אותן לשלוש קבוצות. בשלב שלאחר הניתוח, להחיל 0.3% של Ofloxacin באופן מקומי.
החיזוי מבוסס OCT של צמיחת הגידול לאחר הזרקת תאים subchoroidal מתואר באיור זה. העכברים הציגו שלושה דפוסים של RD, מוקד, דליפה לזגוגית ו- RD מורחב. נמצא קשר בין דפוס RD מיד לאחר ההזרקה, לבין לוקליזציה של הגידולים חמישה ימים לאחר ההזרקה. RD מוקד היה קשור לצמיחת תאי הגידול שהייתה מוגבלת לכורואיד.
עם זאת, תצפית על תאים בזגוגית לאחר הזרקה בבעלי חיים המציגים RD מוקדי הצביעה על צמיחת הגידול בחלל הזגוגית ובכורואיד. כאשר נצפתה RD מורחב לאחר ההזרקה, הגידולים התפזרו לאורך הכורואיד והזגוגית לאחר חמישה ימים. ניתן לחלק את טווח גדלי הגידול המושרה במודל זה לקטנים, בינוניים וגדולים.
מוצגות כאן תמונות מייצגות של מדידת OCT של גובה RD לאחר הזרקה, ותמונת הפונדוס המתאימה, סריקת OCT אופקית של גובה הגידול ורוחבו ביום החמישי לאחר ההזרקה, ותמונת הפונדוס המתאימה לו, ואזור העין המוכתם H&E המתאים המדגים מדידות גידול דומות. מדידות נפח הגידול של עכברים שהציגו RD קטן, בינוני או גדול מיד לאחר הזרקת התא מוצגות כאן. התאמת כוח ההזרקה יכולה להשפיע על גודל הגידול ומיקומו.
חשוב לכייל זאת ולהעריך את הדפוס של היפרדות רשתית מושרית על ידי OCT לאחר ההזרקה. הדמיה חיה של גידולים כורואידיים היא כלי ניסיוני חשוב המאפשר לבחון את ההשפעה של גורמים שונים או טיפולים פוטנציאליים על התקדמות הגידול.
