Aplicación de grafeno monocapa a rejillas de criomicroscopía electrónica para la determinación de estructuras de alta resolución

Un desafío común en la preparación de muestras de criomicroscopía electrónica es la localización de partículas en la interfaz aire-agua, lo que hace que las partículas adopten orientaciones preferidas y se desnaturalicen. En cambio, es mejor que las partículas descansen en la superficie de la rejilla, que promueven los soportes de película delgada, como el grafeno. Otro desafío es el requisito de concentraciones de muestra relativamente altas, que también podrían abordarse con grafeno.

Las rejillas recubiertas de grafeno ofrecen numerosas ventajas para la determinación de la estructura crioEM, pero históricamente han sido difíciles de fabricar internamente de forma reproducible, así como un coste prohibitivo para su compra comercial. Este protocolo permite la deposición robusta de grafeno monocapa, lo que reduce la barrera para que los usuarios empleen estas rejillas en su investigación. El grafeno es único debido a las propiedades de su material.

Es una monocapa de carbono y, por lo tanto, presenta un ruido de fondo mínimo. Otros soportes de rejilla crioEM, como una capa delgada de carbono amorfo o escamas de óxido de grafeno, no se pueden aplicar como una sola monocapa y contribuyen con más señal de fondo. Ahora que hemos establecido un protocolo robusto para la aplicación de grafeno a las rejillas crioEM, nos gustaría continuar con la funcionalización de rejillas recubiertas de grafeno con mangos de afinidad para la captura en la red directamente de lisados celulares.

Esto podría aliviar otro cuello de botella en la preparación de muestras crioEM.