Purificación por afinidad de una proteína marcada con 6X His utilizando un sistema de cromatografía líquida rápida de proteínas

En este estudio, nuestro objetivo es purificar la endonucleasa 1 o FEN1 del colgajo, una proteína crucial para la replicación del ADN mediante cromatografía de afinidad. Esto nos permitirá investigar la función de FEN1 en la replicación y reparación del ADN en un entorno in vitro controlado, avanzando en nuestra comprensión de sus funciones y roles biológicos. Se utilizan varios tipos de cromatografía para purificar las proteínas de unión al ADN, siendo la más común la cromatografía de afinidad.

Dentro de la cromatografía de afinidad, la cromatografía de afinidad de metales inmovilizados es una de las herramientas más potentes para purificar proteínas marcadas con His. Dado que la interacción entre el ion marcado con His y el ion metálico, generalmente el níquel o el cobalto es muy fuerte. Dos factores cruciales para el éxito del proceso de purificación de proteínas son el rendimiento y la pureza de las proteínas.

Dependiendo del uso previsto de la proteína, se puede preferir el rendimiento o la pureza sobre el otro. Nuestros hallazgos muestran que la selección de la resina apropiada para la purificación de proteínas marcadas con His podría producir resultados deseables para las aplicaciones posteriores de la proteína.