Purificazione per affinità di una proteina marcata 6X-His-Tagged utilizzando un sistema di cromatografia liquida proteica veloce

In questo studio, miriamo a purificare l'endonucleasi 1 del lembo o FEN1, una proteina cruciale per la replicazione del DNA utilizzando la cromatografia di affinità. Questo ci permetterà di studiare la funzione di FEN1 nella replicazione e riparazione del DNA in un ambiente controllato in vitro, facendo progredire la nostra comprensione delle sue funzioni e dei suoi ruoli biologici. Vari tipi di cromatografia vengono utilizzati per purificare le proteine leganti il DNA, il più comune dei quali è la cromatografia di affinità.

Nell'ambito della cromatografia di affinità, la cromatografia di affinità con metalli immobilizzati è uno degli strumenti più potenti per purificare le proteine marcate con His. Poiché l'interazione tra l'His-taged e lo ione metallico, di solito il nichel o il cobalto sono molto forti. Due fattori cruciali per il successo del processo di purificazione delle proteine sono la resa e la purezza delle proteine.

A seconda dell'uso previsto della proteina, la resa o la purezza potrebbero essere preferite rispetto all'altra. I nostri risultati mostrano che la selezione della resina appropriata per la purificazione delle proteine marcate con His-taged potrebbe produrre risultati desiderabili per le applicazioni a valle della proteina.