Аффинная очистка белка, меченного 6X-His-Tag, с помощью системы жидкостной хроматографии быстрого белка

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

1.2K Views

•

07:19 min

•

April 26th, 2024

DOI :

10.3791/66529-v

April 26th, 2024

•

Madhumita Sridharan¹, Tripthi Battapadi¹, Lata Balakrishnan¹

¹Department of Biology, Indiana University Indianapolis

Транскрипт

В этом исследовании мы стремимся очистить лоскутную эндонуклеазу 1 или FEN1, важнейший белок репликации ДНК, с помощью аффинной хроматографии. Это позволит нам исследовать функцию FEN1 в репликации и репарации ДНК в контролируемой среде in vitro, углубляя наше понимание его функций и биологических ролей. Для очистки ДНК-связывающих белков используются различные виды хроматографии, наиболее распространенным из которых является аффинная хроматография.

В рамках аффинной хроматографии иммобилизованная аффинная хроматография металлов является одним из самых мощных инструментов для очистки белков, меченных His. Так как взаимодействие между меченой His-меткой и ионом металла, обычно никелем или кобальтом, очень сильное. Двумя решающими факторами для успешного процесса очистки белка являются выход белка и чистота белка.

В зависимости от предполагаемого использования белка, либо выход, либо чистота могут быть предпочтительнее другого. Наши результаты показывают, что выбор подходящей смолы для очистки белков, меченных His, может привести к желаемым результатам для последующих применений белка.

Резюме

Смотреть дополнительные видео

FPLC

1 FEN1

Главы в этом видео

0:00

Introduction

1:16

Affinity Column Preparation and Packing for Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC)

2:56

Priming the Sample Loop of the Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) System for the Purification of His‐Tagged FEN1 Protein