Аффинная очистка белка, меченного 6X-His-Tag, с помощью системы жидкостной хроматографии быстрого белка

В этом исследовании мы стремимся очистить лоскутную эндонуклеазу 1 или FEN1, важнейший белок репликации ДНК, с помощью аффинной хроматографии. Это позволит нам исследовать функцию FEN1 в репликации и репарации ДНК в контролируемой среде in vitro, углубляя наше понимание его функций и биологических ролей. Для очистки ДНК-связывающих белков используются различные виды хроматографии, наиболее распространенным из которых является аффинная хроматография.

В рамках аффинной хроматографии иммобилизованная аффинная хроматография металлов является одним из самых мощных инструментов для очистки белков, меченных His. Так как взаимодействие между меченой His-меткой и ионом металла, обычно никелем или кобальтом, очень сильное. Двумя решающими факторами для успешного процесса очистки белка являются выход белка и чистота белка.

В зависимости от предполагаемого использования белка, либо выход, либо чистота могут быть предпочтительнее другого. Наши результаты показывают, что выбор подходящей смолы для очистки белков, меченных His, может привести к желаемым результатам для последующих применений белка.