Hızlı Protein Sıvı Kromatografi Sistemi Kullanılarak 6X His Etiketli Bir Proteinin Afinite Saflaştırılması

Bu çalışmada, afinite kromatografisi kullanılarak çok önemli bir DNA replikasyon proteini olan flep endonükleaz 1 veya FEN1'in saflaştırılması amaçlanmıştır. Bu, FEN1'in DNA replikasyonu ve onarımındaki işlevini kontrollü bir in vitro ortamda araştırmamıza, işlevleri ve biyolojik rolleri hakkındaki anlayışımızı geliştirmemize izin verecektir. DNA bağlayıcı proteinleri saflaştırmak için çeşitli kromatografi türleri kullanılır, en yaygın olanı afinite kromatografisidir.

Afinite kromatografisi içinde, hareketsizleştirilmiş metal afinite kromatografisi, His etiketli proteinleri saflaştırmak için en güçlü araçlardan biridir. His etiketli ve metal iyonu arasındaki etkileşim nedeniyle, genellikle nikel veya kobalt çok güçlüdür. Başarılı protein saflaştırma işlemi için iki önemli faktör, protein verimi ve protein saflığıdır.

Proteinin kullanım amacına bağlı olarak, verim veya saflık diğerine tercih edilebilir. Bulgularımız, His etiketli proteinlerin saflaştırılması için uygun reçinenin seçilmesinin, proteinin aşağı akış uygulamaları için arzu edilen sonuçları verebileceğini göstermektedir.