Protocolo optimizado para rollos suizos intestinales y tinción inmunofluorescente de tejido incluido en parafina

Nuestra investigación se centra en comprender cómo funciona el tracto gastrointestinal y cómo estas funciones se ven afectadas por diferentes estados patológicos. Estamos interesados en conocer la respuesta de diferentes células epiteliales intestinales a diversas afecciones, como infección e inflamación, obesidad y mutaciones genéticas. La importancia de la especificidad de los anticuerpos es cada vez más evidente.

Sin embargo, el impacto de la fijación de tejidos, la preservación y los métodos de tinción estandarizados se subestiman en el campo. La tinción inmunofluorescente consistente y robusta depende en gran medida de la calidad de la preservación, el procesamiento y la orientación del tejido que se produce en los pasos iniciales de la recopilación de datos. Este protocolo proporciona un método simple y efectivo para investigar diversas cuestiones relacionadas con la biología y la fisiología de las células intestinales.

Nuestro laboratorio está utilizando actualmente estos protocolos para mejorar nuestra comprensión de las funciones de los diferentes tipos de células intestinales en el mantenimiento de la homeostasis y la limitación de la inflamación. Este protocolo permite la visualización detallada de todas las regiones del intestino de un ratón en un solo bloque incrustado en parafina. Esto ahorra dinero en parafina y servicios de inclusión de parafina, la cantidad de tiempo necesario para el corte y los reactivos.

También es altamente reproducible utilizando diversos anticuerpos.