Protocollo ottimizzato per Swiss Rolls intestinali e colorazione in immunofluorescenza di tessuto incluso in paraffina

La nostra ricerca si concentra sulla comprensione di come funziona il tratto gastrointestinale e di come queste funzioni siano influenzate da diversi stati patologici. Siamo interessati a conoscere la risposta di diverse cellule epiteliali intestinali a varie condizioni, come infezioni e infiammazioni, obesità e mutazioni genetiche. L'importanza della specificità degli anticorpi sta diventando sempre più evidente.

Tuttavia, l'impatto della fissazione dei tessuti, della conservazione e dei metodi di colorazione standardizzati è sottovalutato sul campo. Una colorazione immunofluorescente coerente e robusta dipende in gran parte dalla qualità della conservazione, dell'elaborazione e dell'orientamento dei tessuti che si verifica nelle fasi iniziali della raccolta dei dati. Questo protocollo fornisce un metodo semplice ed efficace per indagare varie questioni riguardanti la biologia e la fisiologia delle cellule intestinali.

Il nostro laboratorio sta attualmente utilizzando questi protocolli per migliorare la nostra comprensione dei ruoli dei diversi tipi di cellule intestinali nel mantenimento dell'omeostasi e nella limitazione dell'infiammazione. Questo protocollo consente la visualizzazione dettagliata di tutte le regioni dell'intestino di un topo in un singolo blocco incorporato in paraffina. Ciò consente di risparmiare denaro sulla paraffina e sui servizi di inclusione della paraffina, sulla quantità di tempo necessaria per il sezionamento e sui reagenti.

È anche altamente riproducibile utilizzando diversi anticorpi.