Protocolo otimizado para rolos suíços intestinais e coloração imunofluorescente de tecido embebido em parafina

Nossa pesquisa se concentra em entender como o trato gastrointestinal funciona e como essas funções são afetadas por diferentes estados patológicos. Estamos interessados em aprender a resposta de diferentes células epiteliais intestinais a várias condições, como infecção e inflamação, obesidade e mutações genéticas. A importância da especificidade do anticorpo está se tornando cada vez mais aparente.

No entanto, o impacto da fixação de tecidos, preservação e métodos de coloração padronizados são subestimados no campo. A coloração imunofluorescente consistente e robusta depende muito da qualidade da preservação, processamento e orientação do tecido que ocorre nas etapas iniciais da coleta de dados. Este protocolo fornece um método simples e eficaz para investigar várias questões relacionadas à biologia e fisiologia das células intestinais.

Nosso laboratório está atualmente usando esses protocolos para melhorar nossa compreensão dos papéis dos diferentes tipos de células intestinais na manutenção da homeostase e na limitação da inflamação. Este protocolo permite a visualização detalhada de todas as regiões do intestino de um camundongo em um único bloco embebido em parafina. Isso economiza dinheiro em serviços de parafina e incorporação de parafina, a quantidade de tempo necessária para o seccionamento e os reagentes.

Também é altamente reprodutível usando diversos anticorpos.