Demostramos cómo realizar imágenes PET in vivo en ratones utilizando estos moldes que se ajustan al cuerpo y cómo navegar por la plataforma de análisis de datos asociada. Esto nos permite mantener a todos los animales en la misma posición física a lo largo de los puntos de tiempo, y puede acelerar y estandarizar significativamente el análisis de imágenes posteriores mediante la automatización. La obtención de imágenes in vivo presenta múltiples ventajas en comparación con los experimentos tradicionales sin imagen.
Por ejemplo, las imágenes permiten una evaluación sistémica y holística de la distribución de un fármaco y de los efectos farmacológicos en todo el sujeto, lo que permite no solo el seguimiento de la eficacia en el sitio objetivo, sino también la detección de actividades inesperadas fuera del sitio. La obtención de datos cuantitativos y altamente reproducibles es fundamental para el desarrollo de fármacos. Por ejemplo, un estudio de distribución intestinal basado en PET genera una gran cantidad de información valiosa sobre la cinética, la acumulación de tejido y la unión al objetivo de un compuesto.
Sin embargo, hay una falta de procesos automatizados eficientes para analizar esos datos. Aquí mostramos que las imágenes PET CT adquiridas con estos BCAM son altamente uniformes y pueden ser analizadas en lotes por la herramienta de segmentación automatizada basada en la nube, lo que ahorra una gran cantidad de tiempo. Además, podemos demostrar que el análisis automatizado arrojó resultados satisfactorios consistentes con nuestro método manual.
Nuestro siguiente paso es realizar una evaluación más exhaustiva del rendimiento de esta herramienta automatizada. Compararemos de cerca los resultados de ROI generados por el SAS con los generados por analistas humanos con varios niveles de experiencia, y compararemos los resultados de imágenes in vivo con la cuantificación ex vivo de la realidad del terreno. Para comenzar, coloque un molde animal que se adapte al cuerpo, o BCAM, del tamaño apropiado al preclip con la parte superior volteada hacia arriba 90 grados.
Coloque un ratón anestesiado en la base y extienda sus extremidades. A continuación, coloque suavemente un molde de plantilla de inyección tumoral BCAM en el lado dorsal del ratón. Cree con cuidado una marca de referencia circular temporal en la ubicación de recorte deseada con un marcador.
Una vez hecha la marca, retira el molde de la plantilla. Usando las marcas temporales como referencia, levanta la piel con los dedos o pinzas para crear una tienda de campaña. Inserte lentamente la aguja e inyecte la suspensión de células tumorales por vía subcutánea en el lugar deseado.
Deseche la aguja en un recipiente para objetos punzocortantes de riesgo biológico. Extrae cuidadosamente una dosis objetivo de flúor 18 FDG en una jeringa estéril. Coloque la jeringa en la cámara del pocillo del calibrador de dosis y baje el cucharón para medir la dosis radiactiva.
Tome una lectura estable del calibrador de dosis. Registre la fecha y la hora. Antes de la inyección, registre el peso del ratón.
Transfiera el ratón a un sistema de retención adecuado y localice la vena de la cola. A continuación, inyecte la dosis en el ratón consciente y registre el tiempo de inyección. Coloque la jeringa a un lado y limpie el exceso de sangre de la cola con una gasa.
A continuación, retire el ratón del sistema de retención y vuelva a colocarlo en la carcasa adecuada. Ahora vuelva a colocar la jeringa en la cámara del calibrador de dosis y registre las lecturas residuales para el cálculo de la dosis. Registre la fecha y la hora de la lectura de la actividad residual.
60 minutos después de la administración intravenosa de flúor 18 FDG, transfiera al ratón anestesiado a un BCAM del tamaño adecuado en función de su peso corporal. Levanta suavemente al ratón por la nuca. Inserte la cola en la ranura de la cola y envuélvala debajo del BCAM.
A continuación, coloca la cola en la plataforma de la cola y asegúrala con cinta adhesiva. Asegúrese de que el lomo esté recto y cierre suavemente el BCAM. Coloque las cuatro extremidades en las plataformas de patas BCAM y asegúrelas con cinta adhesiva según sea necesario.
A continuación, encaje suavemente el BCAM en la lanzadera de la cama de imágenes insertando primero el extremo frontal. Empuje hacia abajo la parte posterior del BCAM hasta que un clic indique que está asegurado al transbordador G8. Para comenzar, abra el software de adquisición de G8 PET.
Introduzca los detalles del estudio en el software, incluido el peso del ratón, la fecha, la hora, la cantidad de dosis inicial, los detalles de la inyección y las lecturas de la actividad residual. A continuación, inserte la lanzadera de la cama de imágenes con el ratón en la abertura del escáner. Seleccione los parámetros apropiados de PET CT y adquiera datos de imágenes.
Una vez completada la adquisición, retire la lanzadera con el ratón e insértela en la base. Presione la pestaña vertical BCAM para liberarlo de la lanzadera G8. Tire suavemente hacia arriba y retire el BCAM con el ratón.
Presione las dos pestañas de retención para voltear hacia arriba y abrir la parte superior del BCAM. A continuación, retire suavemente el ratón. Para el análisis de imágenes, inicie sesión en app.invivo.
ax y crear un proyecto. A continuación, haga clic en la pestaña roja Cargar en la parte superior derecha de la ventana. Seleccione el sistema de imágenes y el reportero utilizado en el estudio.
A continuación, elija la carpeta con los datos de imagen. Vaya a la pestaña Anotación dentro de la carpeta del proyecto. Haga clic en Anotar para agregar información relevante sobre el escaneo, incluido el nombre del sujeto, el sexo, el tamaño del BCAM, el peso del sujeto, el nombre de la cohorte, el punto de tiempo y el valor de la dosis inyectada.
Para el análisis de datos, haga clic en escaneos para navegar a través de los niveles de proyecto, grupo y materia individual. A continuación, seleccione Analizar. En la parte superior derecha de la ventana de la cinta de opciones de análisis, en Proyecto, seleccione el símbolo más y elija Mapa de probabilidad de órganos u OPM ROI.
El análisis de regresión lineal mostró que el cerebro tenía la correlación más alta entre el análisis OPM automatizado y los métodos manuales, lo que refleja una alta precisión. El riñón derecho y el corazón mostraron una correlación moderada en el análisis OPM en comparación con el análisis manual. El bazo tenía la correlación más baja, probablemente debido a los desafíos en la segmentación manual, lo que dificultaba su distinción de los tejidos blandos cercanos.
