Com certeza demonstramos como realizar imagens PET in vivo em camundongos usando esses moldes em conformidade com o corpo e como navegar na plataforma de análise de dados associada. Isso nos permite manter todos os animais na mesma posição física em todos os pontos de tempo e pode acelerar e padronizar significativamente a análise de imagens downstream por automação. A imagem in vivo apresenta múltiplas vantagens em comparação com os experimentos tradicionais sem imagem.
Por exemplo, a imagem permite a avaliação sistêmica e holística da distribuição de um medicamento e dos efeitos farmacológicos em todo o sujeito, o que permite não apenas o monitoramento da eficácia no local alvo, mas também a detecção de atividades externas inesperadas. A obtenção de dados altamente reprodutíveis e quantitativos é fundamental para o desenvolvimento de medicamentos. Por exemplo, um estudo de distribuição intestinal baseado em PET gera uma enorme quantidade de informações valiosas sobre a cinética de um composto, acúmulo de tecido e ligação ao alvo.
No entanto, há uma falta de processos automatizados eficientes para analisar esses dados. Mostramos aqui que as imagens de PET CT adquiridas com esses BCAMs são altamente uniformes e podem ser analisadas em lotes pela ferramenta de segmentação automatizada baseada em nuvem, o que economiza muito tempo. Além disso, podemos mostrar que a análise automatizada produziu resultados satisfatórios consistentes com nosso método manual.
Nosso próximo passo é realizar uma avaliação mais abrangente do desempenho dessa ferramenta automatizada. Compararemos de perto os resultados de ROI gerados pelo SAS com os gerados por analistas humanos com vários níveis de experiência e compararemos os resultados de imagens in vivo com a quantificação ex vivo da verdade fundamental. Para começar, prenda um molde animal em conformidade com o corpo, ou BCAM, do tamanho apropriado ao pré-clipe com a parte superior virada para cima 90 graus.
Coloque um rato anestesiado na base e estenda seus membros. Em seguida, coloque suavemente um molde de molde de injeção de tumor BCAM no lado dorsal do mouse. Crie cuidadosamente uma marca de referência circular temporária no local de recorte desejado usando um marcador.
Assim que a marca for feita, remova o molde do modelo. Usando as marcas temporárias como referência, levante a pele com os dedos ou fórceps para criar uma tenda. Insira lentamente a agulha e injete a suspensão de células tumorais por via subcutânea no local desejado.
Descarte a agulha em um recipiente para objetos cortantes de risco biológico. Retire cuidadosamente uma dose-alvo de flúor 18 FDG em uma seringa estéril. Coloque a seringa na câmara do poço do calibrador de dose e abaixe a concha para medir a dose radioativa.
Faça uma leitura estável do calibrador de dose. Registre a data e a hora. Antes da injeção, registre o peso do mouse.
Transfira o mouse para um limitador adequado e localize a veia da cauda. Em seguida, injete a dose no camundongo consciente e registre o tempo de injeção. Coloque a seringa de lado e limpe o excesso de sangue da cauda com gaze.
Em seguida, remova o mouse do limitador e coloque-o de volta no alojamento apropriado. Agora coloque a seringa de volta na câmara do calibrador de dose e registre quaisquer leituras residuais para cálculo da dose. Registre a data e a hora da leitura da atividade residual.
60 minutos após a administração intravenosa de flúor 18 FDG, transfira o camundongo anestesiado para um BCAM de tamanho apropriado com base em seu peso corporal. Pegue suavemente o mouse pela nuca. Insira a cauda na ranhura da cauda e envolva-a sob o BCAM.
Em seguida, coloque a cauda na plataforma da cauda e prenda-a com fita adesiva. Certifique-se de que a lombada esteja reta e feche suavemente o BCAM. Posicione todos os quatro membros nas plataformas de pata BCAM e prenda com fita adesiva conforme necessário.
Em seguida, encaixe suavemente o BCAM no suporte da cama de imagem, inserindo primeiro a extremidade frontal. Empurre para baixo a parte de trás do BCAM até que um clique indique que ele está preso ao ônibus espacial G8. Para começar, abra o software de aquisição G8 PET.
Insira os detalhes do estudo no software, incluindo o peso do mouse, data, hora, quantidade da dose inicial, detalhes da injeção e leituras de atividade residual. Em seguida, insira o lance da cama de imagem com o mouse na abertura do scanner. Selecione os parâmetros apropriados do PET CT e adquira os dados de imagem.
Após a conclusão da aquisição, remova a lançadeira com o mouse e insira-a no dock. Pressione a guia vertical BCAM para liberá-lo do ônibus G8. Puxe suavemente e remova o BCAM com o mouse.
Pressione as duas abas de retenção para virar para cima e abrir a parte superior do BCAM. Em seguida, remova o mouse com cuidado. Para análise de imagem, faça login em app.invivo.
axe e crie um projeto. Em seguida, clique na guia vermelha Upload no canto superior direito da janela. Selecione o sistema de imagem e o repórter usados no estudo.
Em seguida, escolha a pasta com os dados de imagem. Navegue até a guia Anotação na pasta do projeto. Clique em Anotar para adicionar informações de varredura relevantes, incluindo nome do sujeito, sexo, tamanho do BCAM, peso do sujeito, nome da coorte, ponto de tempo e valor da dose injetada.
Para análise de dados, clique em digitalizações para navegar pelos níveis de projeto, grupo e assunto individual. Em seguida, selecione Analisar. No canto superior direito da janela da faixa de opções de análise em Projeto, selecione o símbolo de adição e escolha MAP de probabilidade de órgão ou ROI do OPM.
A análise de regressão linear mostrou que o cérebro teve a maior correlação entre a análise automatizada de OPM e os métodos manuais, refletindo alta precisão. O rim e o coração direitos apresentaram correlação moderada na análise OPM em comparação com a análise manual. O baço teve a correlação mais baixa, provavelmente devido a desafios na segmentação manual, dificultando a distinção dos tecidos moles próximos.
