これらの体型型を使用してマウスのin vivo PETイメージングを行う方法と、関連するデータ解析プラットフォームをナビゲートする方法を確実に示します。これにより、すべての動物をどの時点でも同じ物理的位置に保つことができ、自動化により下流の画像解析を大幅に加速し、標準化することができます。In vivoイメージングには、従来の非イメージング実験と比較して複数の利点があります。
例えば、イメージングでは、被験者全体における薬物の分布や薬理学的効果を全身的かつ総合的に評価することができるため、標的部位での有効性のモニタリングだけでなく、予期せぬオフサイト活動の検出も可能になります。再現性の高い定量的なデータを取得することは、医薬品開発にとって非常に重要です。例えば、PETベースの腸管分布研究では、化合物の動態、組織蓄積、標的結合に関する貴重な情報を大量に生成します。
しかし、これらのデータを分析するための効率的な自動化プロセスが不足しています。ここでは、これらのBCAMで取得したPET CT画像が非常に均一であり、クラウドベースの自動セグメンテーションツールでバッチで解析できるため、時間を大幅に節約できることを示しています。さらに、自動分析が手動の方法と一致する満足のいく結果をもたらしたことを示すことができます。
次のステップは、この自動化ツールのパフォーマンスをより包括的に評価することです。SASによって生成されたROI結果と、さまざまな経験レベルの人間のアナリストによって生成されたROI結果を綿密に比較し、in vivoイメージング結果をグラウンドトゥルースのex vivo定量と比較します。まず、上部を90度上にして、適切なサイズの体型(BCAM)をプレクリップに取り付けます。
麻酔をかけたマウスをベースに置き、手足を伸ばします。次に、BCAM腫瘍注射テンプレート型をマウスの背側にそっと置きます。マーカーを使用して、目的の切り欠き位置に一時的な円形参照マークを慎重に作成します。
マークがついたら、テンプレート型を取り外します。一時的なマークを参考にして、指または鉗子で皮膚を持ち上げてテントを作成します。針をゆっくりと挿入し、腫瘍細胞懸濁液を目的の場所に皮下注射します。
針をバイオハザード鋭利物容器に捨てます。フッ素18 FDGの目標用量を滅菌シリンジに慎重に引き上げます。シリンジを線量校正器のウェルチャンバーに入れ、ディッパーを下げて放射性線量を測定します。
線量キャリブレーターから安定した読み取りを行います。日付と時刻を記録します。注入する前に、マウスの体重を記録してください。
マウスを適切な拘束具に移し、尾静脈を見つけます。次に、意識のあるマウスに用量を注入し、注射時間を記録します。注射器を脇に置き、ガーゼを使用して尾から余分な血液を取り除きます。
次に、マウスを拘束装置から取り外し、適切なハウジングに戻します。次に、シリンジを線量キャリブレーターチャンバーに戻し、線量計算のために残りの測定値を記録します。残余活動の読み取りの日時を記録します。
フッ素18 FDGの静脈内投与から60分後、麻酔をかけたマウスを体重に基づいて適切なサイズのBCAMに移します。マウスの首筋を優しくつまみます。テールをテールスロットに挿入し、BCAMの下に巻き付けます。
次に、テールをテールプラットフォームに置き、テープで固定します。背骨がまっすぐであることを確認し、BCAMをそっと閉じます。4本の手足すべてをBCAMの足プラットフォームに配置し、必要に応じてテープで固定します。
次に、最初にフロントエンドを挿入して、BCAMをイメージングベッドシャトルにそっとはめ込みます。カチッという音がしてBCAMがG8シャトルに固定されていることを示すまで、BCAMの背面を押し下げます。まず、G8 PET取得ソフトウェアを開きます。
マウスの体重、日付、時刻、初期用量、注射の詳細、残存活性の測定値など、研究の詳細をソフトウェアに入力します。次に、マウス付きのイメージングベッドシャトルをスキャナーの開口部に挿入します。適切なPET CTパラメータを選択し、画像データを取得します。
取得が完了したら、マウスでシャトルを取り外し、ドックに挿入します。BCAM垂直タブを押して、G8シャトルから外します。マウスでBCAMをそっと引き上げて取り外します。
2つの保持タブを押して跳ね上げ、BCAMの上部を開きます。次に、マウスをそっと取り外します。画像解析を行うには、app.invivoにログインしてください。
ax を作成し、プロジェクトを作成します。次に、ウィンドウの右上にある赤い[アップロード]タブをクリックします。試験で使用するイメージングシステムとレポーターを選択します。
次に、イメージングデータのあるフォルダを選択します。プロジェクトフォルダ内の「Annotation」タブに移動します。[注釈]をクリックして、被験者名、性別、BCAMサイズ、被験者の体重、コホート名、時点、注射された用量値などの関連するスキャン情報を追加します。
データ分析を行うには、スキャンをクリックして、プロジェクト、グループ、および個々のサブジェクトレベルをナビゲートします。次に、分析 を選択します。解析リボン ウィンドウの右上にある [プロジェクト] で、プラス記号を選択し、[Organ Probability MAP] または [OPM ROI] を選択します。
線形回帰分析では、自動OPM分析と手動分析との間には脳の相関が最も高く、高い精度を反映していることが示されました。右腎臓と心臓は、手動分析と比較してOPM分析で中程度の相関を示しました。脾臓の相関が最も低かったのは、おそらく手作業によるセグメンテーションの課題が原因で、近くの軟組織と区別するのが困難だったためである。
