Este estudio se centra en mejorar las técnicas de muestreo de leche en la investigación de la lactancia, particularmente en ratones. Presentamos un método que supera desafíos como la pérdida de muestras, el volumen limitado y los procesos intensivos en mano de obra, ofreciendo una solución simplificada para la recolección de leche de roedores y una herramienta valiosa para los investigadores en el campo. Uno de los mayores desafíos de realizar investigaciones en ratones es su pequeño tamaño, especialmente cuando se trata de muestrear biofluidos como la leche.
Es difícil obtener un volumen suficiente sin agrupar las muestras o hacer que dos personas las recojan manualmente, lo que hace que el proceso sea menos práctico en muchos casos. Nuestro protocolo simplifica la recolección de leche al permitir que una persona recoja suficiente volumen en menos de 10 minutos utilizando herramientas de laboratorio fácilmente disponibles. A diferencia de otros métodos, minimiza la pérdida de muestras con succión continua, tirando de la leche directamente a los tubos de recolección, ahorrando tiempo y preservando el volumen para el análisis.
Para comenzar, conecte un extremo del tubo de PVC de 5/32 pulgadas de diámetro interior a la bomba de vacío y asegure el accesorio con cinta adhesiva. Con un conector recto de púas, conecte el otro extremo del tubo de PVC de 5/32 pulgadas de diámetro interior al tubo de PVC de 1/8 de pulgada de diámetro interior. A continuación, use un conector para conectar el otro extremo del tubo de PVC de 1/8 de pulgada de diámetro interior a una aguja hipodérmica de calibre 18.
Con unas tijeras, corte el extremo de la punta de una pipeta P200, aproximadamente 0,2 centímetros, para crear una abertura más grande. Inserte la punta de pipeta P200 modificada a través de la abertura del tapón del tabique de modo que la punta apunte hacia arriba y fije el tapón del tabique a un tubo colector estéril. Con la aguja hipodérmica de calibre 18, perfore el tapón del tabique.
Ahora, encienda la bomba de vacío para verificar la presión de succión colocando un dedo enguantado sobre la abertura de la punta de la pipeta El día del ordeño, separe a la madre de sus crías para permitir la acumulación de leche en las glándulas. Mantén a los cachorros calientes en un nido. Después de anestesiar la madre, apriete firmemente un pie de la madre para evaluar la percepción de la sensación y el dolor del animal.
Luego, aplique ungüento oftálmico veterinario en los ojos de la madre para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia. Coloque el protector anestesiado en su espalda sobre una superficie sólida de trabajo. Limpie suavemente el área mamaria de la presa con una toallita estéril con alcohol.
Administrar una o dos unidades de oxitocina por vía intraperitoneal entre el cuarto y el quinto par de pezones en el lado de la cavidad peritoneal que no haya recibido ninguna inyección. Frote suavemente el área del cuello de la presa con la mano no dominante. Luego, exprima el tejido mamario desde la base hasta la punta del pezón hasta que se vea una gota de leche.
Encienda el dispositivo de vacío presionando el botón de encendido. Para comenzar el ordeño, aplique suavemente la punta de la pipeta P200 invertida a un pezón y utilice un suave movimiento de tracción para extraer la leche. Ordeñar todos los pezones hasta que se recoja un volumen suficiente de leche.
Después, regrese la madre anestesiada a la jaula y asegúrese de que se mantenga caliente durante el período de recuperación anestésica. Se pueden recoger cómodamente de 0,1 a 0,5 mililitros de leche de cada madre en menos de 10 minutos. La concentración de grasa láctea aumentó significativamente de 174,4 gramos por litro en el segundo día posterior al parto a 224,4 gramos por litro el día 10 posterior al parto.
Las concentraciones de lactosa y proteína total no mostraron diferencias significativas entre el segundo día y el 10 después del parto. La abundancia relativa de alfa-S1-caseína y proteína ácida de suero fue mayor en la leche del día 10 después del parto en comparación con la leche del día dos después del parto, mientras que la beta-caseína fue más abundante en la leche del día dos después del parto que en la leche del día 10 después del parto. Las intensidades de las bandas de proteínas en el gel de electroforesis confirmaron visualmente las diferencias en las abundancias relativas de las proteínas individuales de la leche.
