Cette étude se concentre sur l’amélioration des techniques d’échantillonnage du lait dans la recherche sur la lactation, en particulier chez la souris. Nous présentons une méthode qui surmonte des défis tels que la perte d’échantillons, le volume limité et les processus à forte intensité de main-d’œuvre, offrant une solution rationalisée pour la collecte du lait de rongeur et un outil précieux pour les chercheurs dans le domaine. L’un des plus grands défis de la recherche sur les souris est leur petite taille, en particulier lorsqu’il s’agit d’échantillonner des biofluides tels que le lait.
Il est difficile d’obtenir un volume suffisant sans regrouper les échantillons ou faire appel à deux personnes pour les collecter manuellement, ce qui rend le processus moins pratique dans de nombreux cas. Notre protocole simplifie la collecte du lait en permettant à une seule personne de recueillir un volume suffisant en moins de 10 minutes à l’aide d’outils de laboratoire facilement disponibles. Contrairement à d’autres méthodes, il minimise les pertes d’échantillons grâce à une aspiration continue, en aspirant le lait directement dans les tubes de collecte, ce qui permet de gagner du temps et de préserver le volume pour l’analyse.
Pour commencer, fixez une extrémité du tube en PVC de 5/32 de pouce de diamètre intérieur à la pompe à vide et fixez la fixation avec du ruban adhésif. À l’aide d’un connecteur droit barbelé, connectez l’autre extrémité du tube en PVC de 5/32 de pouce de diamètre intérieur au tube en PVC de 1/8 de pouce de diamètre intérieur. Ensuite, utilisez un connecteur pour fixer l’autre extrémité du tube en PVC de 1/8 de pouce de diamètre intérieur à une aiguille hypodermique de calibre 18.
À l’aide de ciseaux, coupez l’extrémité d’une pointe de pipette P200, d’environ 0,2 centimètre, pour créer une plus grande ouverture. Insérez l’embout de pipette P200 modifié à travers l’ouverture du bouchon de septum de sorte que l’embout pointe vers le haut, et fixez le bouchon de septum à un tube collecteur stérile. À l’aide de l’aiguille hypodermique de calibre 18, percez le bouchon du septum.
Maintenant, allumez la pompe à vide pour vérifier la pression d’aspiration en plaçant un doigt ganté sur l’ouverture de l’extrémité de la pipette Le jour de la traite, séparez la mère de ses petits pour permettre l’accumulation de lait dans les glandes. Gardez les chiots au chaud dans un nid. Après avoir anesthésié la mère, pressez fermement un pied de la digue pour évaluer la perception de la sensation et de la douleur de l’animal.
Ensuite, appliquez une pommade ophtalmique vétérinaire sur les yeux du barrage pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. Placez la digue anesthésiée sur son dos sur une surface de travail solide. Nettoyez doucement la zone mammaire de la digue avec une lingette de préparation à l’alcool stérile.
Administrer une à deux unités d’ocytocine par voie intrapéritonéale entre la quatrième et la cinquième paire de trayons du côté de la cavité péritonéale qui n’a reçu aucune injection. Frottez doucement la zone du cou de la mère avec la main non dominante. Ensuite, pressez le tissu mammaire de la base à la pointe du trayon jusqu’à ce qu’un cordon de lait soit visible.
Allumez l’appareil à vide en appuyant sur le bouton d’alimentation. Pour commencer la traite, appliquez délicatement la pointe de la pipette P200 inversée sur une tétine et tirez doucement pour extraire le lait. Traire tous les trayons jusqu’à ce qu’un volume suffisant de lait soit recueilli.
Ensuite, remettez la digue anesthésiée dans la cage et assurez-vous qu’elle est maintenue au chaud pendant la période de récupération de l’anesthésie. 0,1 à 0,5 millilitre de lait peut être recueilli confortablement de chaque barrage en moins de 10 minutes. La concentration en matières grasses du lait a considérablement augmenté, passant de 174,4 grammes par litre le deuxième jour après l’accouchement à 224,4 grammes par litre le 10e jour après l’accouchement.
Les concentrations de lactose et de protéines totales n’ont pas montré de différences significatives entre le deuxième jour après l’accouchement et le 10e jour après l’accouchement. L’abondance relative de l’alpha-caséine S1 et des protéines acides de lactosérum était plus élevée dans le lait post-accouchement du 10e jour que dans le lait post-accouchement du deuxième jour, tandis que la bêta-caséine était plus abondante dans le lait post-accouchement du deuxième jour que dans le lait post-accouchement du 10e jour. L’intensité des bandes protéiques sur le gel d’électrophorèse a confirmé visuellement les différences dans les abondances relatives des protéines de lait individuelles.
