Bu çalışma, özellikle farelerde laktasyon araştırmalarında süt örnekleme tekniklerinin geliştirilmesine odaklanmaktadır. Numune kaybı, sınırlı hacim ve emek yoğun süreçler gibi zorlukların üstesinden gelen, kemirgen sütü toplama için kolaylaştırılmış bir çözüm ve bu alandaki araştırmacılar için değerli bir araç sunan bir yöntem sunuyoruz. Farelerde araştırma yapmanın en büyük zorluklarından biri, özellikle süt gibi biyosıvıların örneklenmesi söz konusu olduğunda, küçük boyutlarıdır.
Numuneleri bir araya getirmeden veya iki kişinin manuel olarak toplamasını sağlamadan yeterli hacim elde etmek zordur, bu da çoğu durumda işlemi daha az pratik hale getirir. Protokolümüz, bir kişinin hazır laboratuvar araçlarını kullanarak 10 dakikadan kısa sürede yeterli hacmi toplamasına izin vererek süt toplamayı basitleştirir. Diğer yöntemlerden farklı olarak, sürekli emme, sütü doğrudan toplama tüplerine çekme, zamandan tasarruf sağlama ve analiz için hacmi koruma ile numune kaybını en aza indirir.
Başlamak için, 5/32 inç iç çaplı PVC borunun bir ucunu vakum pompasına takın ve eki bantla sabitleyin. Dikenli düz bir konektör kullanarak, 5/32 inç iç çaplı PVC borunun diğer ucunu 1/8 inç iç çaplı PVC boruya bağlayın. Ardından, 1/8 inç iç çaplı PVC borunun diğer ucunu 18 gauge hipodermik iğneye takmak için bir konektör kullanın.
Daha büyük bir açıklık oluşturmak için makas kullanarak P200 pipet ucunun ucunu yaklaşık 0,2 santimetre kesin. Modifiye edilmiş P200 pipet ucunu, uç yukarı bakacak şekilde septum durdurucunun açıklığından geçirin ve septum durdurucuyu steril bir toplama tüpüne takın. 18 gauge hipodermik iğneyi kullanarak septum durdurucuyu delin.
Şimdi, pipet ucu açıklığının üzerine eldivenli bir parmak koyarak emme basıncını kontrol etmek için vakum pompasını açın Sağım gününde, bezlerde süt birikmesine izin vermek için barajı yavrularından ayırın. Yavruları bir yuvada sıcak tutun. Barajı uyuşturduktan sonra, hayvanın duyu ve acı algısını değerlendirmek için barajın bir ayağını sıkıca sıkın.
Ardından, anestezi altındayken kuruluğu önlemek için barajın gözlerine veteriner oftalmik merhem sürün. Anestezi uygulanmış barajı sırtına sağlam bir çalışma yüzeyine yerleştirin. Barajın meme bölgesini steril bir alkol hazırlık mendili ile nazikçe temizleyin.
Periton boşluğunun herhangi bir enjeksiyon almamış tarafındaki dördüncü ve beşinci emzik çifti arasına intraperitoneal olarak bir ila iki ünite oksitosin uygulayın. Baskın olmayan elinizle barajın boyun bölgesini nazikçe fırçalayın. Ardından, bir boncuk süt görünene kadar meme dokusunu tabandan emziğin ucuna kadar sıkın.
Güç düğmesine basarak vakum cihazını açın. Sağıma başlamak için, ters çevrilmiş P200 pipet ucunu bir meme ucuna nazikçe uygulayın ve sütü çekmek için hafif bir çekme hareketi kullanın. Yeterli miktarda süt toplanana kadar tüm emzikleri sağın.
Daha sonra, anestezi uygulanmış barajı kafese geri koyun ve anestezik iyileşme süresi boyunca sıcak tutulduğundan emin olun. Her barajdan 10 dakikadan kısa sürede 0,1 ila 0,5 mililitre süt rahatça toplanabilir. Süt yağı konsantrasyonu, teslimat sonrası ikinci günde litre başına 174,4 gramdan, teslimat sonrası 10. günde litre başına 224,4 grama önemli ölçüde artmıştır.
Laktoz ve toplam protein konsantrasyonları, doğum sonrası ikinci gün ile doğum sonrası 10. gün arasında anlamlı farklılıklar göstermedi. Alfa-S1-kazein ve peynir altı suyu asidik proteininin nispi bolluğu, doğum sonrası 10. gün sütünde, doğum sonrası ikinci gün sütüne kıyasla daha yüksekken, beta-kazein doğum sonrası ikinci gün sütünde, doğum sonrası 10. gün sütüne göre daha bol miktarda bulunur. Elektroforez jeli üzerindeki protein bandı yoğunlukları, tek tek süt proteinlerinin nispi bolluklarındaki farklılıkları görsel olarak doğruladı.
