Diese Studie konzentriert sich auf die Verbesserung der Milchprobenahmetechniken in der Laktationsforschung, insbesondere bei Mäusen. Wir stellen eine Methode vor, die Herausforderungen wie Probenverlust, begrenztes Volumen und arbeitsintensive Prozesse überwindet und eine optimierte Lösung für die Milchgewinnung von Nagetieren und ein wertvolles Werkzeug für Forscher im Feld bietet. Eine der größten Herausforderungen bei der Durchführung von Forschungen an Mäusen ist ihre geringe Größe, insbesondere wenn es um die Probenahme von Bioflüssigkeiten wie Milch geht.
Es ist schwierig, ein ausreichendes Volumen zu erhalten, ohne Proben zu bündeln oder von zwei Personen manuell entnehmen zu müssen, was das Verfahren in vielen Fällen weniger praktikabel macht. Unser Protokoll vereinfacht die Milchentnahme, indem es einer Person ermöglicht, mit leicht verfügbaren Laborwerkzeugen in weniger als 10 Minuten ein ausreichendes Volumen zu sammeln. Im Gegensatz zu anderen Methoden minimiert es den Probenverlust durch kontinuierliches Saugen, indem die Milch direkt in die Sammelröhrchen gezogen wird, was Zeit spart und das Volumen für die Analyse schont.
Befestigen Sie zunächst ein Ende des PVC-Schlauchs mit einem Innendurchmesser von 5/32 Zoll an der Vakuumpumpe und befestigen Sie die Befestigung mit Klebeband. Verbinden Sie mit einem geraden Stecker mit Widerhaken das andere Ende des PVC-Schlauchs mit einem Innendurchmesser von 5/32 Zoll mit dem PVC-Schlauch mit einem Innendurchmesser von 1/8 Zoll. Verwenden Sie als Nächstes einen Verbinder, um das andere Ende des PVC-Schlauchs mit einem Innendurchmesser von 1/8 Zoll an eine 18-Gauge-Injektionsnadel zu befestigen.
Schneiden Sie mit einer Schere das Ende einer P200-Pipettenspitze etwa 0,2 Zentimeter ab, um eine größere Öffnung zu erhalten. Führen Sie die modifizierte Pipettenspitze P200 so durch die Öffnung des Septumverschlusses, dass die Spitze nach oben zeigt, und befestigen Sie den Septumstopfen an einem sterilen Auffangröhrchen. Mit der 18-Gauge-Injektionsnadel den Septumstopfen durchstechen.
Schalten Sie nun die Vakuumpumpe ein, um den Saugdruck zu überprüfen, indem Sie einen behandschuhten Finger über die Öffnung der Pipettenspitze legen. Trennen Sie am Melktag die Hündin von ihren Welpen, damit sich die Milch in den Drüsen ansammeln kann. Halten Sie die Welpen in einem Nest warm. Nach der Betäubung des Muttertiers drücken Sie einen Fuß des Muttertiers fest zusammen, um die Wahrnehmung von Empfindungen und Schmerzen durch das Tier zu beurteilen.
Tragen Sie dann veterinärmedizinische Augensalbe auf die Augen des Muttertiers auf, um Trockenheit während der Narkose zu verhindern. Legen Sie die betäubte Mutterdame auf den Rücken auf eine feste Arbeitsfläche. Reinigen Sie den Brustbereich des Muttertiers vorsichtig mit einem sterilen Alkohol-Vorbereitungstuch.
Verabreichen Sie ein bis zwei Einheiten Oxytocin intraperitoneal zwischen dem vierten und fünften Zitzenpaar auf der Seite der Bauchhöhle, die keine Injektion erhalten hat. Den Halsbereich der Hündin vorsichtig mit der nicht dominanten Hand abdrücken. Drücken Sie dann das Brustgewebe von der Basis bis zur Spitze des Saugers, bis eine Milchperle sichtbar ist.
Schalten Sie das Staubsaugergerät ein, indem Sie den Netzschalter drücken. Um mit dem Melken zu beginnen, legen Sie die umgekehrte Pipettenspitze P200 vorsichtig auf einen Sauger und ziehen Sie die Milch mit einer sanften Zugbewegung heraus. Melken Sie alle Zitzen, bis eine ausreichende Menge Milch aufgefangen ist.
Bringen Sie anschließend die betäubte Hündin wieder in den Käfig zurück und stellen Sie sicher, dass sie während der narkosetischen Erholungsphase warm gehalten wird. 0,1 bis 0,5 Milliliter Milch können bequem in weniger als 10 Minuten aus jedem Muttertier aufgefangen werden. Die Milchfettkonzentration stieg deutlich von 174,4 Gramm pro Liter am zweiten Tag nach der Lieferung auf 224,4 Gramm pro Liter am 10. Tag nach der Lieferung.
Die Laktose- und Gesamtproteinkonzentrationen zeigten keine signifikanten Unterschiede zwischen dem zweiten Tag nach der Entbindung und dem 10. Tag nach der Geburt. Die relative Häufigkeit von Alpha-S1-Kasein und saurem Molkenprotein war in Milch nach dem 10. Entbindungstag höher als in der Milch nach dem zweiten Entbindungstag, während Beta-Kasein in der Milch nach dem zweiten Entbindungstag häufiger vorkam als in der Milch nach dem 10. Entbindungstag. Die Intensitäten der Proteinbanden auf dem Elektrophoresegel bestätigten visuell Unterschiede in den relativen Häufigkeiten einzelner Milchproteine.
