Questo studio si concentra sul miglioramento delle tecniche di campionamento del latte nella ricerca sull'allattamento, in particolare nei topi. Presentiamo un metodo che supera sfide come la perdita di campioni, il volume limitato e i processi ad alta intensità di manodopera, offrendo una soluzione semplificata per la raccolta del latte di roditore e uno strumento prezioso per i ricercatori del settore. Una delle maggiori sfide nel condurre ricerche sui topi è la loro piccola dimensione, soprattutto quando si tratta di campionare biofluidi come il latte.
È difficile ottenere un volume sufficiente senza raggruppare i campioni o avere due persone che li raccolgono manualmente, il che rende il processo meno pratico in molti casi. Il nostro protocollo semplifica la raccolta del latte consentendo a una persona di raccogliere un volume sufficiente in meno di 10 minuti utilizzando strumenti di laboratorio prontamente disponibili. A differenza di altri metodi, riduce al minimo la perdita di campione con l'aspirazione continua, aspirando il latte direttamente nelle provette di raccolta, risparmiando tempo e preservando il volume per l'analisi.
Per iniziare, collegare un'estremità del tubo in PVC con diametro interno di 5/32 di pollice alla pompa del vuoto e fissare l'attacco con del nastro adesivo. Utilizzando un connettore diritto spinato, collegare l'altra estremità del tubo in PVC con diametro interno di 5/32 di pollice al tubo in PVC con diametro interno di 1/8 di pollice. Quindi, utilizzare un connettore per collegare l'altra estremità del tubo in PVC con diametro interno di 1/8 di pollice a un ago ipodermico calibro 18.
Usando le forbici, tagliare l'estremità di un puntale per pipetta P200, di circa 0,2 centimetri, per creare un'apertura più ampia. Inserire il puntale della pipetta P200 modificato attraverso l'apertura del tappo del setto in modo che il puntale sia rivolto verso l'alto e collegare il tappo del setto a una provetta di raccolta sterile. Utilizzando l'ago ipodermico calibro 18, forare il tappo del setto.
Ora, accendi la pompa del vuoto per controllare la pressione di aspirazione posizionando un dito guantato sull'apertura della punta della pipetta Il giorno della mungitura, separa la madre dai suoi cuccioli per consentire l'accumulo di latte nelle ghiandole. Tieni i cuccioli al caldo in un nido. Dopo aver anestetizzato la diga, stringi saldamente un piede della diga per valutare la percezione della sensazione e del dolore dell'animale.
Quindi, applicare un unguento oftalmico veterinario sugli occhi della madre per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Posizionare la madre anestetizzata sulla schiena su una superficie di lavoro solida. Pulire delicatamente l'area mammaria della diga con una salvietta sterile imbevuta di alcol.
Somministrare da una a due unità di ossitocina per via intraperitoneale tra il quarto e il quinto paio di capezzoli sul lato della cavità peritoneale che non ha ricevuto alcuna iniezione. Strofinare delicatamente la zona del collo della diga con la mano non dominante. Quindi, spremere il tessuto mammario dalla base alla punta della tettarella fino a quando non è visibile una goccia di latte.
Accendere il dispositivo di aspirazione premendo il pulsante di accensione. Per iniziare la mungitura, applicare delicatamente la punta della pipetta P200 rovesciata su una tettarella e utilizzare un leggero movimento di trazione per estrarre il latte. Mungere tutti i capezzoli fino a quando non viene raccolto un volume sufficiente di latte.
Successivamente, rimettere la madre anestetizzata nella gabbia e assicurarsi che sia tenuta al caldo durante il periodo di recupero dell'anestesia. Da 0,1 a 0,5 millilitri di latte possono essere raccolti comodamente da ogni diga in meno di 10 minuti. La concentrazione di grasso del latte è aumentata significativamente da 174,4 grammi per litro il secondo giorno dopo la consegna a 224,4 grammi per litro il giorno 10 dopo la consegna.
Le concentrazioni di lattosio e proteine totali non hanno mostrato differenze significative tra il secondo giorno post-consegna e il giorno 10 post-consegna. L'abbondanza relativa di alfa-S1-caseina e proteine acide del siero di latte era più alta nel latte post-parto del giorno 10 rispetto al latte post-parto del secondo giorno, mentre la beta-caseina era più abbondante nel latte post-parto del secondo giorno rispetto al latte post-parto del giorno 10. Le intensità delle bande proteiche sul gel per elettroforesi hanno confermato visivamente le differenze nelle abbondanze relative delle singole proteine del latte.
