Après avoir implanté la plaque de tête et le bouchon, fixez l’animal sur un tapis roulant rotatif avec sa plaque de tête. Placez le tapis roulant sous le microscope à deux photons et ajustez la hauteur dans une position appropriée. Placez un cône en aluminium noir entre l’objectif et la plaque de tête pour éviter la contamination lumineuse du moniteur pour la stimulation visuelle.
Pour effectuer une imagerie à deux photons, ajustez la puissance du laser sur le plan de l’échantillon entre 20 et 80 milliwatts. Scannez un champ de vision de 600 x 600 micromètres à 4,8 hertz avec une résolution spatiale de 2,4 micromètres par pixel et une activité neuronale d’image jusqu’à 350 micromètres de profondeur. À l’aide d’un encodeur rotatif, enregistrez la locomotion de la souris sur le tapis roulant.
Utilisez un appareil photo avec un objectif de 50 millimètres pour enregistrer la taille et la position de sa pupille. Enfin, synchronisez ces enregistrements et les acquisitions d’images avec la stimulation visuelle en enregistrant les déclencheurs envoyés par l’ordinateur de stimulation. Les réponses calciques des neurones SC d’une souris de type sauvage et la projection de l’écart-type de la fluorescence à travers les images sont présentées.
