Commencez par ajouter 200 microlitres d’inoculum bactérien dans chaque puits d’une plaque stérile à 96 puits préparée pour l’analyse microscopique. Incuber la plaque à 25 degrés Celsius pendant 24 heures avant de retirer le surnageant à l’aide de la pipette. Ensuite, ajoutez soigneusement 300 microlitres d’eau déminéralisée stérilisée par filtre dans chaque puits.
Retirez à nouveau le surnageant à l’aide d’une pipette. Dans un autre tube, préparez un mélange dilué de SYTO 9 et d’iodure de propidium et d’eau déminéralisée stérilisée par filtre jusqu’aux concentrations finales souhaitées. Ajoutez ensuite 200 microlitres du mélange dans chaque puits et incubez l’assiette pendant 20 à 30 minutes à température ambiante dans un environnement sombre.
La microscopie confocale à balayage laser a révélé que la formation de biofilm variait considérablement en fonction des souches. Une quantité substantielle de biofilm a été trouvée chez Acinetobacter junii, Acinetobacter baumannii et Acinetobacter ursingii avec des morphologies de biofilm distinctes.
