Préparez le gradient chimiotactique en ajoutant 160 microlitres de chimioattractants dans la chambre inférieure d’un analyseur de cellules en temps réel basé sur l’impédance, ou plaque RTCA. Pour les témoins négatifs et les blancs, ajoutez 160 microlitres de solution saline équilibrée ou HBSS de Hanks avec du calcium et du magnésium. Fixez la chambre supérieure et ajoutez 25 microlitres de HBSS avec du calcium et du magnésium.
Incuber à température ambiante pendant au moins une heure pour former le gradient chimiotactique. Ensuite, mélangez délicatement et transférez 60 microlitres de polynutrophiles activés préalablement préparés dans la chambre supérieure. Ajoutez ensuite 60 microlitres d’HBSS avec du calcium et du magnésium à l’ébauche.
Placez la plaque RTCA dans l’analyseur et programmez son logiciel pour mesurer l’indice de la cellule toutes les 60 secondes pendant deux heures. Ajustez la courbe avec les données obtenues. La migration cellulaire en temps réel a montré un effet chimiotactique de 100 nanomolaires fMLP sur les neutrophiles.
