Le soutien des National Institutes of Health (accorde GM092804, DE019938) et de l&#39;Hôpital Shriners Burns.

1. Microfluidique fabrication de périphériques <ol><li> En utilisant des techniques de photolithographie standard fabriquer le moule maître plaquette dans une salle blanche de classe 1000. Motif du premier 3-um-mince couche de résine photosensible négative à base d&#39;époxy pour définir les voies de migration selon les instructions du fabricant. Motif de la deuxième couche de 50 um d&#39;épaisseur pour définir les cellules de chargement et de chimiokines chambres. </li><li> Utilisez la plaquette motifs de jeter polydiméthylsiloxane appareils (PDMS). Mélanger vigoureusement PDMS (20 g) avec un initiateur (2 g) pendant 5 minutes en utilisant une fourchette en plastique dans un grand plateau de pesée en plastique. </li><li> Versez délicatement PDMS sur moule. </li><li> Dégazer le moule en plaçant PDMS avec PDMS coulé dans un dessiccateur sous vide pendant 1 heure. </li><li> Cuire au four et guérir dispositifs microfluidiques PDMS pendant au moins 3 heures dans un four réglé à 65 ° C. </li><li> Percez les WBLCs centrales utilisant un perforateur avec un diamètre de 1,5 mm de pointe. </li><li> Punch out dispositifs en forme de beignet entiers en utilisant une ponctuaelle avec un diamètre de 5,0 mm de pointe. </li><li> Retirer les particules de dispositifs de beignet avec du ruban adhésif. </li><li> Rincer une plaque de 12 puits avec de l&#39;eau déminéralisée et sécher avec de l&#39;azote. Placer la plaque dans le four à 60 ° C pendant 5 min. </li><li> plasma d&#39;oxygène traiter la plaque de 12 puits à deux reprises; une fois seul pour 35 secondes, puis de nouveau avec les dispositifs de beignet pour un autre 35 secondes. </li><li> Placez délicatement dispositifs dans les puits de la plaque à l&#39;aide de pinces. </li><li> Cuire au four avec plaque périphériques liés sur une plaque chauffante réglée à 80 ° C pendant 10 min. </li></ol> 2. Dosage microfluidique Préparation <ol><li> Premiers dispositifs microfluidiques immédiatement après le traitement par plasma d&#39;oxygène, lorsque le dispositif est hydrophile et les effets capillaires peut favoriser l&#39;amorçage des petits canaux dans le dispositif. </li><li> Créer solution chimioattractive en mélangeant 5 pi fMLP [solution stock 10 uM] avec 5 pi fibronectine [solution mère à 1 mg / ml] et 490 ul de HBSS. </li><li> Lentement pipette &amp; #160; solution chemoattractant dans WBLC, en utilisant une pointe de chargement de gel (figure 1A). Une pipette 20 ul supplémentaires de l&#39;agent chimio-attractif autour de l&#39;extérieur du dispositif. </li><li> Placer la plaque dans un dessiccateur pendant 15 min. Par application d&#39;un vide à l&#39;appareil, la solution est instillée dans les chaînes latérales de l&#39;appareil et l&#39;air déplacé diffuse à travers les PDMS. </li><li> Retirer la plaque du dessiccateur et confirmer mouillage du canal de l&#39;appareil sous le microscope. Regardez comme bulle devient plus petit que solution chimioattractive pénètre dans la chambre. Aucune bulle ne doit être présent dans le dispositif après traitement sous vide. </li><li> Laver le WBLC et à l&#39;extérieur de l&#39;appareil à fond pour éliminer la solution de chemoattractant excès. Cette étape génère un gradient de chemoattractant de chacune des chambres chimiotactiques focaux (FCC) au centre de l&#39;appareil. <ol><li> Remplir une seringue de 1 ml avec du PBS, ajouter une pointe d&#39;aiguille émoussée 30 G à la seringue. Doucement, insérer la pointe de l&#39;aiguille de la seringue dansau centre du trou de beignet. Poussez doucement 100 pi de PBS dans le trou de sorte qu&#39;une goutte de formes PBS sur le dessus de l&#39;appareil. </li><li> la plaque d&#39;inclinaison et la pipette 1 ml de PBS autour de dispositif de sorte que le liquide se rassemble au fond du puits. Aspirer le liquide de processus et de répétition pour un total de 3x en utilisant une solution tampon frais (utilisation des médias au lieu de tampon si les neutrophiles séparés seront chargés dans les médias) 9. </li></ol></li><li> Remplir chaque puits avec les médias jusqu&#39;à ce que le dessus de l&#39;appareil sont submergées par liquide. Laissez les dispositifs assis pendant 15 minutes pour permettre gradient de se stabiliser. Les résultats expérimentaux et théoriques données de simulations par éléments finis montrent que les gradients de ces dispositifs sont stables jusqu&#39;à 24 heures pour les petites molécules (par exemple, fMLP) et jusqu&#39;à plusieurs jours pour un plus grand poids moléculaire (par exemple, IL8). </li><li> En utilisant des pointes gel de chargement, la pipette lentement 2 pl de sang (ou neutrophiles isolés) dans chaque ensemble de loa sangding chambre (WBLC) (figure 1A). </li></ol> 3. Préparation de l&#39;échantillon Les neutrophiles humains De sang capillaire <ol><li> Prélever le sang capillaire de piqûre au doigt de volontaires sains, qui est sur aucun des immunosuppresseurs. Tous les échantillons de patients ont été obtenus avec le consentement éclairé, et selon les procédures approuvées par le MGH et Shriners Institutional Review Boards. <ol><li> Pour la collecte de sang au bout du doigt, se laver les mains avec de l&#39;eau et du savon et séchez la peau. Préparer une solution stock anti-coagulant/stain en ajoutant 1 ml de HBSS + 0,2% HSA et 10 pi de Hoechst tache (32,4 M) à l&#39;héparine tube de collecte de sang (1,65 USP/50 ul de sang). Piquer le doigt avec une lancette de sécurité SurgiLance (profondeur de 2,2 mm, 22 G), essuyer la première goutte de sang et de recueillir 50 pi de sang dans tube Eppendorf contenant le stock d&#39;anti-coagulant et solution fluorescente tache Hoechst (10 pi) et doucement mélanger. </li></ol></li&gt; <li> Incuber le sang et Hoechst tache pendant 10 min pour permettre la coloration fluorescente noyau. Exécutez échantillon dans 1 heure de la collecte de sang. </li></ol> Les neutrophiles humaines à partir de sang veineux <ol start="3"><li> Tracer 10 ml de sang périphérique, veineuse dans des tubes contenant de l&#39;héparine USP 33. </li><li> Ajouter 50 ul de sang veineux aux médias et Hoechst tache comme décrit précédemment. Incuber le sang et Hoechst tache pendant 10 min pour permettre la coloration fluorescente noyau. Exécutez échantillon dans 1 heure de la collecte de sang. </li></ol> Neutrophiles Séparation De sang total - Contrôle positif <ol start="5"><li> Pour séparer les neutrophiles, en utilisant des techniques stériles pour isoler des neutrophiles à partir de la 10 ml veineux échantillon de sang entier en utilisant Hetastarch (6% p / v) à gradient de densité, suivie par une sélection kit d&#39;isolation de bille magnétique négatif suivant le protocole du fabricant. </li><li> Remis en suspension la fraction aliquote finale de neutrophiles à une concentration de 4.000 cellules / ul dans du HBSS 1X + 0,2% d&#39;albumine de sérum humain. Maintenir les cellules à 37 ° C jusqu&#39;au moment de lancer l&#39;expérience. </li></ol> 4. Microscopie et analyse d&#39;images pour les mesures chimiotaxie des neutrophiles <ol><li> Régler la température de biochambre à 37 ° C, humidité de 80%, et de CO 2 à 5%. </li><li> Lancer immédiatement d&#39;utiliser l&#39;imagerie imagerie time-lapse sur un microscope (grossissement 10X ou ultérieure). </li></ol> 5. Analyse statistique <ol><li> Suivi manuel au moins 50 neutrophiles dans chaque échantillon. </li><li> Compter les cellules qui entrent dans le FCC au cours du temps (figure 2). </li><li> Calculer les vitesses de neutrophiles dans le canal entre WBLC et FCC en utilisant ImageJ (NIH) (Figure 2). </li><li> Quantifier la directionnalité des neutrophiles en comptant le nombre de cellules qui passent à la bifurcation et en calculant le rapport entre le nombre de cellules qui se transforment vers le FCC et les cellules qui sortent èmee dispositif. Les cellules qui ne sont pas directionnel ne suivent pas le gradient chimiotactique et, par conséquent, en nombre égal migrent vers le FCC et le canal de sortie (Figure 2). </li></ol>

<ol>
	<li>Hansson, G. K., Robertson, A. K., Soderberg-Naucler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+atherosclerosis.">Inflammation and atherosclerosis.</a> Annual review of pathology. 1, 297-329 (2006).</li><li>Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neutrophil+in+vascular+inflammation.">The neutrophil in vascular inflammation.</a> Nature medicine. 17, 1381-1390 (2011).</li><li>Butler, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+injury+reduces+neutrophil+directional+migration+speed+in+microfluidic+devices.">Burn injury reduces neutrophil directional migration speed in microfluidic devices.</a> PloS one. 5, (2010).</li><li>Lavrentieva, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+markers+in+patients+with+severe+burn+injury.+What+is+the+best+indicator+of+sepsis.">Inflammatory markers in patients with severe burn injury. What is the best indicator of sepsis.</a> Burns : journal of the International Society for Burn Injuries. 33, 189-194 (2007).</li><li>De Filippo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cell+and+macrophage+chemokines+CXCL1/CXCL2+control+the+early+stage+of+neutrophil+recruitment+during+tissue+inflammation.">Mast cell and macrophage chemokines CXCL1/CXCL2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation.</a> Blood. 121, 4930-4937 (2013).</li><li>Mankovich, A. R., Lee, C. Y., Heinrich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+serum+heat+treatment+on+chemotaxis+and+phagocytosis+by+human+neutrophils.">Differential effects of serum heat treatment on chemotaxis and phagocytosis by human neutrophils.</a> PloS one. 8, (2013).</li><li>Palabrica, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+accumulation+promoting+fibrin+deposition+is+mediated+in+vivo+by+P-selectin+on+adherent+platelets.">Leukocyte accumulation promoting fibrin deposition is mediated in vivo by P-selectin on adherent platelets.</a> Nature. 359, 848-851 (1992).</li><li>Sackmann, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+kit-on-a-lid:+a+versatile+platform+for+neutrophil+chemotaxis+assays.">Microfluidic kit-on-a-lid: a versatile platform for neutrophil chemotaxis assays.</a> Blood. 120, (2012).</li><li>Jones, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+chambers+for+monitoring+leukocyte+trafficking+and+humanized+nano-proresolving+medicines+interactions.">Microfluidic chambers for monitoring leukocyte trafficking and humanized nano-proresolving medicines interactions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 20560-20565 (2012).</li><li>Nauseef, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+neutrophils+from+venous+blood.">Isolation of human neutrophils from venous blood.</a> Methods Mol Biol. 412, 15-20 (2007).</li><li>Lyons, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+of+human+leucocyte+subsets:+the+advantages+of+positive+selection+and+rapid+purification.">Microarray analysis of human leucocyte subsets: the advantages of positive selection and rapid purification.</a> BMC genomics. 8, (2007).</li><li>Hasenberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+immunomagnetic+negative+enrichment+of+neutrophil+granulocytes+from+murine+bone+marrow+for+functional+studies+in+vitro+and+in+vivo.">Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo.</a> PloS one. 6, (2011).</li><li>Agrawal, N., Toner, M., Irimia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+migration+assay+from+a+drop+of+blood.">Neutrophil migration assay from a drop of blood.</a> Lab on a chip. 8, 2054-2061 (2008).</li><li>Hoang, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+neutrophil+speed+and+directionality+during+chemotaxis,+directly+from+a+droplet+of+whole+blood.">Measuring neutrophil speed and directionality during chemotaxis, directly from a droplet of whole blood.</a> Technology. , 1-9 (2013).</li><li>Kurihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolvin+D2+restores+neutrophil+directionality+and+improves+survival+after+burns.">Resolvin D2 restores neutrophil directionality and improves survival after burns.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. , (2013).</li><li>Buffone, V., Meakins, J. L., Christou, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function+in+surgical+patients.+Relationship+to+adequate+bacterial+defenses.">Neutrophil function in surgical patients. Relationship to adequate bacterial defenses.</a> Arch Surg. 119, 39-43 (1984).</li><li>Malawista, S. E., de Boisfleury Chevance, A., van Damme, J., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+inhibition+of+chemotaxis+in+human+plasma.">Tonic inhibition of chemotaxis in human plasma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 17949-17954 (2008).</li></ol>

Il n&#39;existe aucun conflit d&#39;intérêt à divulguer.

Dans ce travail, nous avons développé une plate-forme microfluidique pour mesurer la chimiotaxie des neutrophiles à partir d&#39;une goutte de sang (2 pi). La filtration sur puce mécanique des globules rouges à partir de la migration des neutrophiles activement contourne le besoin de méthodes lourdes de séparation de cellules telles que les gradients de densité 10, 11 sélection positive, la sélection négative ou 12, qui sont susceptibles d&#39;introduire des artefacts en activant les neu...

<html> trafic de neutrophiles joue un rôle déterminant dans l&#39;évolution et la résolution de nombreuses affections inflammatoires, y compris l&#39;athérosclérose 1, infection bactérienne ou une septicémie 2, et 3 de brûlures. Pour leur importante contribution à des conditions de santé et de maladie, le nombre de neutrophiles est partie de l&#39;analyse de sang norme souvent considéré dans les laboratoires cliniques et de recherche. Toutefois, en dépit d&#39;être l&#39;un des tests les plus répandus, la valeur de la numération des neutrophiles dans le diagnostic de l&#39;infection et de septicémie a été souvent interrogé 4. Par exemple, une étude de neutrophiles chez les patients atteints de brûlures a révélé que le nombre de neutrophiles et la fonction de la migration des neutrophiles ne concordent pas; ce qui signifie que nombre de neutrophiles seul n&#39;est pas un indicateur précis de l&#39;état immunitaire 3. Bien que plus difficile à mesurer, la compétence fonctionnelle des neutrophiles a été proposée comme plus précieuse dans un large éventail de conditions. t &quot;&gt; Surtout, la plupart des défauts de neutrophiles sont transitoires et ne sont pas déclenché par des anomalies génétiques permanents, une distinction qui a été largement négligé dans la clinique jusqu&#39;à récemment. Dans le cadre de brûlure, la migration des neutrophiles pourrait être surveillée au cours de le traitement d&#39;un patient comme un indicateur de l&#39;état inflammatoire ou une infection 3. tests traditionnels de migration actuellement utilisés dans le laboratoire (chambre de Boyden, chambre Dunn, micropipette essai) ne peut pas être traduite dans un cadre clinique, car ils nécessitent de grandes quantités de sang et encombrant temps Des techniques d&#39;isolation des neutrophiles (tableau 1). Ces dosages peuvent également pas être utilisés pour surveiller des changements transitoires de la chimiotaxie des neutrophiles chez les petits animaux de laboratoire, tels que les souris, parce que le volume de sang nécessaire pour l&#39;isolement des neutrophiles permet un seul échantillon, et souvent même exige la mise en commun d&#39; le sang de plusieurs animaux pour un seul essai. Par exemple, une étude portant sur mconditions ultiple et des traitements sur plusieurs points dans le temps pourraient exiger des milliers de souris en utilisant des tests de chimiotactisme actuelles. Cela limite la recherche biologique de base qui peut être fait pour comprendre la dynamique complexe de la fonction immunitaire dans le cadre de blessure, une infection ou brûler souvent étudiée dans les modèles murins 5. Pour répondre à la nécessité d&#39;un dosage fonctionnel des neutrophiles qui est rapide et robuste, tout en nécessitant un minimum de volume de sang, nous avons développé un dispositif microfluidique qui mesure directement la chimiotaxie des neutrophiles à partir d&#39;une petite gouttelette de sang total. Il est connu que de nombreux facteurs dans le sang total, le sérum, y compris les plaquettes 6 et 7, affectent la fonction des neutrophiles. Il est donc avantageux que l&#39;ensemble de dosage microfluidique de sang réduit au minimum le traitement des échantillons pour maintenir le micro-environnement in vivo de la neutrophiles lors de la mesure des variations de la chimiotaxie avec un essai in vitro 8. Cette approcheréduit le temps de collecte de sang pour des tests de migration des neutrophiles provenant heures en utilisant des techniques classiques, à quelques minutes (tableau 1). L&#39;ensemble de la plate-forme de micro-fluidique de sang produit un gradient chimiotactique linéaire stable pour la durée de l&#39;expérience, n&#39;a pas de parties mobiles, et ne nécessite pas une source de pression externe (par exemple de la pompe à seringue). La caractéristique clé de la conception de l&#39;ensemble du dispositif de microfluidique sanguin est l&#39;incorporation d&#39;un globule rouge (RBC) de peigne de filtration qui filtre mécaniquement les globules rouges de pénétrer dans le canal de migration du dispositif. Les virages à droite de ce peigne de filtration empêchent la nécessité pour la filtration d&#39;exclusion de taille, qui serait susceptible d&#39;être bouché par les globules rouges et donc bloquent le gradient chimiotactique d&#39;atteindre les neutrophiles migrent activement à la Banque mondiale. L&#39;incorporation de l&#39;ensemble du dispositif de microfluidique de sang dans une plaque à 12 ou 24 puits facilite le criblage de multiples médiateurs de la chimiotaxie des neutrophiles si humaine ou murinemultanément.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:179px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:191px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Device Fabrication</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">SU8&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Microchem</td>
			<td style="width:179px;">Y131273</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:191px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:179px;">Sylgard 184 1.1 lb. Kit</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Standard glass slides</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">125495</td>
			<td style="width:191px;">1 X 3 inches</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Glass-bottom plate</td>
			<td style="width:191px;">MatTek</td>
			<td style="width:179px;">P12G-1.5-14-F</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Harris Uni-Core, Tip Diameter 5.0mm</td>
			<td style="width:191px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:179px;">15081</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Harris Uni-Core, Tip Diameter 1.5 mm</td>
			<td style="width:191px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:179px;">15072</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Microfluidic Assay Preparation and Analysis</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Gel-loading pipet tip</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">02-707-139</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Syringe</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientfic</td>
			<td style="width:179px;">309602</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Blunt tip needle, 30g &#189; in.</td>
			<td style="width:191px;">Brico Medical Supply</td>
			<td style="width:179px;">BN3005</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Vacutainer, Heparin</td>
			<td style="width:191px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">HBSS&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Human serum albumin</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">A5843-5G</td>
			<td style="width:191px;">0.2% final concentration in HBSS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">F0895-1MG</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">fMLP</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">F3506-10MG</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">SurgiLance safety lancet, 2.2mm depth, 22 gauge</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;">SLN240</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Hoescht stain</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:179px;">H3570</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Positive Control&#160;</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">HetaSep</td>
			<td style="width:191px;">STEMCELL Technologies Inc.</td>
			<td style="width:179px;">7906</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit</td>
			<td style="width:191px;">STEMCELL Technologies Inc.</td>
			<td style="width:179px;">19257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Equipment</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Plasma Asher</td>
			<td style="width:191px;">March Instruments</td>
			<td style="width:179px;">P-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Lindberg/Blue M Oven</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:179px;">13-258-30C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Stainless Steel Precision Tweezers</td>
			<td style="width:191px;">Techni Tool</td>
			<td style="width:179px;">758TW458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Bel-Art Scienceware Chemical-Resistant Vacuum Desiccator</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">08-594-15A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Dataplate Digital Hot Plate</td>
			<td style="width:191px;">Alpha Multiservices</td>
			<td style="width:179px;">PMC 720&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Nikon TiE inverted microscope</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">MEA53100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">CFI Plan Fluor DL 10x na 15.2wd Objective</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">MRH20101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Lumen 200 with 2 Meter Light Guide for Nikon</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">500-L200NI2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:211px;">DAPI/Hoechst/AMCA Narrow Band 32mm Exciters - 25mm Emitters</td>
			<td style="width:191px;">Chroma - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">31013v2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Retiga R 2000 cooled CCD Camera 1600x1200 pixels</td>
			<td style="width:191px;">Qimaging - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td>RET-2000R-F-M-12-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microfluidic platform for measuring neutrophil chemotaxis from unprocessed whole blood

Les neutrophiles jouent un rôle essentiel dans la protection contre les infections et leur nombre dans le sang sont souvent mesurés à la clinique. Le nombre de neutrophiles plus élevés dans le sang sont généralement un indicateur des infections en cours, tandis que faible numération des neutrophiles sont un signe d&#39;alerte pour des risques plus élevés pour les infections. Pour accomplir leurs fonctions, les neutrophiles doivent également être en mesure de se déplacer efficacement dans le sang où ils passent la plupart de leur vie, dans les tissus, où les infections se produisent. Par conséquent, tous les défauts de la capacité des neutrophiles de migrer peuvent augmenter les risques d&#39;infections, même lorsque les neutrophiles sont présents en nombre suffisant dans le sang. Toutefois, la mesure de la capacité de migration des neutrophiles dans la clinique est une tâche difficile, qui prend du temps, nécessite volume important de sang, et les connaissances d&#39;experts. Pour répondre à ces limitations, nous avons conçu un solide tests microfluidiques pour la migration des neutrophiles, qui nécessite une seule goutte de sang non traité, circumévents la nécessité d&#39;une séparation des neutrophiles, et est facile à quantifier sur un simple microscope. Dans ce dosage, les neutrophiles migrent directement à partir de la goutte de sang, à travers de petits canaux, vers la source de chimio-attractif. Pour éviter que le flux granulaire de globules rouges par la même voie, nous avons mis filtres mécaniques avec des virages à angle droit qui bloquent sélectivement l&#39;avance de globules rouges. Nous avons validé le test en comparant la migration des neutrophiles de gouttelettes de sang prélevés de piqûre au doigt et le sang veineux. Nous avons également comparé les sang total (WB) sources de la migration des neutrophiles à partir d&#39;échantillons de neutrophiles purifiés et trouvé une vitesse constante et la directionnalité entre les trois sources. Cette plate-forme microfluidique permettra l&#39;étude de la migration des neutrophiles humain dans la clinique et le contexte de la recherche pour faire avancer notre compréhension des fonctions des neutrophiles dans la santé et la maladie.

Le sang total (WB) essai de chimiotaxie des neutrophiles a été validé par la mesure de l&#39;accumulation des neutrophiles vers un gradient fMLP (Film S1). Les résultats confirment que les globules rouges sont piégés par le peigne de filtration alors que les neutrophiles (bleus) sont capables de migrer activement sur ​​sang total (Figure 3A et Movie S1). Le gradient linéaire stable chimiotactique (vert), formé par l&#39;ensemble du dispositif de microfluidiq...

Watch this Scientific Journal Video about Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood at JoVE.com

Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

Ce protocole détaille un test destiné à mesurer la chimiotaxie des neutrophiles humaine d&#39;une gouttelette de sang total avec une reproductibilité robuste. Cette approche évite la nécessité d&#39;une séparation des neutrophiles et ne nécessite que quelques minutes de test de temps de préparation. La puce microfluidique permet la mesure répétée de la chimiotaxie des neutrophiles au fil du temps chez les nourrissons ou les petits mammifères, où le volume de l&#39;échantillon est limité.

Plate-forme microfluidique pour mesurer la chimiotaxie des neutrophiles du sang entier non transformé

Neutrophils play an essential role in protection against infections and their numbers in the blood are frequently measured in the clinic. Higher ...

microfluidic-platform-for-measuring-neutrophil-chemotaxis-from

Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.2K vues.  Massachusetts General Hospital.  Ce protocole détaille un test destiné à mesurer la chimiotaxie des neutrophiles humaine d'une gouttelette de sang total avec une reproductibilité robuste. Cette approche évite la nécessité d'une séparation des neutrophiles et ne nécessite que quelques minutes de test de temps de préparation. La puce microfluidique permet la mesure répétée de la chimiotaxie des neutrophiles au fil du temps chez les nourrissons ou les petits mammifères, où le volume ...

Vidéo: Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and high-fidelity measurements of large systems. Microfluidics promises to fulfill many of these requirements, such as performing high-throughput screening experiments on-chip, encompassing biochemical, biophysical, and cell-based assays1. Since the early days of microfluidics devices, this field has drastically evolved, leading to the development of microfluidic large-scale integration2,3. This technology allows for the integration of thousands of micromechanical valves on a single device with a postage-sized footprint (Figure 1). We have developed a high-throughput microfluidic platform for generating in vitro expression of protein arrays (Figure 2) named PING (Protein Interaction Network Generator). These arrays can serve as a template for many experiments such as protein-protein 4, protein-RNA5 or protein-DNA6 interactions.
The device consist of thousands of reaction chambers, which are individually programmed using a microarrayer. Aligning of these printed microarrays to microfluidics devices programs each chamber with a single spot eliminating potential contamination or cross-reactivity Moreover, generating microarrays using standard microarray spotting techniques is also very modular, allowing for the arraying of proteins7, DNA8, small molecules, and even colloidal suspensions. The potential impact of microfluidics on biological sciences is significant. A number of microfluidics based assays have already provided novel insights into the structure and function of biological systems, and the field of microfluidics will continue to impact biology.

We present a microfluidic approach for the expression of protein arrays. The device consists of thousands of reaction chambers controlled by micro-mechanical valves. The microfluidic device is mated to a microarray-printed gene library. These genes are then transcribed and translated on-chip, resulting in a protein array ready for experimental use.

À haut débit Générateur expression des protéines utilisant une plate-forme microfluidique

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Recherche

Bio-ingénierie

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This technology has shown potential in addressing previously challenging applications; including, delivery to primary immune cells, cell reprogramming, carbon nanotube, and quantum dot delivery. This vector-free microfluidic platform relies on mechanical disruption of the cell membrane to facilitate cytosolic delivery of the target material. Herein, we describe the detailed method of use for these microfluidic devices including, device assembly, cell preparation, and system operation. This delivery approach requires a brief optimization of device type and operating conditions for previously unreported applications. The provided instructions are generalizable to most cell types and delivery materials as this system does not require specialized buffers or chemical modification/conjugation steps. This work also provides recommendations on how to improve device performance and trouble-shoot potential issues related to clogging, low delivery efficiencies, and cell viability.

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This protocol provides detailed steps on how to use the system for a broad range of applications.

Presser cellule comme, microfluidique Delivery Platform intracellulaire robuste

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need for new solutions for substance testing. Many drugs that have been removed from the market due to drug-induced liver injury released their toxic potential only after several doses of chronic testing in humans. However, a controlled microenvironment is pivotal for long-term multiple dosing experiments,&#160;as even minor alterations in extracellular conditions may greatly influence the cell physiology. We focused within our research program on the generation of a microengineered bioreactor, which can be dynamically perfused by an on-chip pump and combines at least two culture spaces for multi-organ applications. This circulatory system mimics the in vivo conditions of primary cell cultures better and assures a steadier,&#160;more quantifiable extracellular relay of signals to the cells. 
For demonstration purposes, human liver equivalents, generated by aggregating differentiated HepaRG cells with human hepatic stellate cells in hanging drop plates, were cocultured with human skin punch biopsies for up to 28 days inside the microbioreactor. The use of cell culture inserts enables the skin to be cultured at an air-liquid interface, allowing topical substance exposure. The microbioreactor system is capable of supporting these cocultures at near physiologic fluid flow and volume-to-liquid ratios, ensuring stable and organotypic culture conditions. The possibility of long-term cultures enables the repeated exposure to substances. Furthermore, a vascularization of the microfluidic channel circuit using human dermal microvascular endothelial cells yields a physiologically more relevant vascular model.

Here, we present a protocol to coculture primary cells, tissue models and punch biopsies in a microfluidic multi-organ chip for up to 28 days. Human dermal microvascular endothelial cells, liver aggregates and skin biopsies were successfully combined in a common media circulation.

Le Multi-Chip organes - Une plate-forme microfluidique à long terme Coculture multi-tissus

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Controlled Microfluidic Environment for Dynamic Investigation of Red Blood Cell Aggregation

Blood, as a non-Newtonian biofluid, represents the focus of numerous studies in the hemorheology field. Blood constituents include red blood cells, white blood cells and platelets that are suspended in blood plasma. Due to the abundance of the RBCs (40% to 45% of the blood volume), their behavior dictates the rheological behavior of blood especially in the microcirculation. At very low shear rates, RBCs are seen to assemble and form entities called aggregates, which causes the non-Newtonian behavior of blood. It is important to understand the conditions of the aggregates formation to comprehend the blood rheology in microcirculation. The protocol described here details the experimental procedure to determine quantitatively the RBC aggregates in microcirculation under constant shear rate, based on image processing. For this purpose, RBC-suspensions are tested and analyzed in 120 x 60 &#181;m poly-dimethyl-siloxane (PDMS) microchannels. The RBC-suspensions are entrained using a second fluid in order to obtain a linear velocity profile within the blood layer and thus achieve a wide range of constant shear rates. The shear rate is determined using a micro Particle Image Velocimetry (&#181;PIV) system, while RBC aggregates are visualized using a high speed camera. The videos captured of the RBC aggregates are analyzed using image processing techniques in order to determine the aggregate sizes based on the images intensities.

The protocol described details an experimental procedure to quantify Red Blood Cell (RBC) aggregates under a controlled and constant shear rate, based on image processing techniques. The goal of this protocol is to relate RBC aggregate sizes to the corresponding shear rate in a controlled microfluidic environment.

Environnement microfluidique contrôlée pour Dynamic Investigation of Blood Red Cell Agrégation

Blood, as a non-Newtonian biofluid, represents the focus of numerous studies in the hemorheology field. Blood constituents include red blood cells, white ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet high-throughput, method to perform single-cell culture experiments. Here, we report a microfluidic chip-based strategy for high-efficiency single-cell isolation (~77%) and demonstrate its capability of performing long-term single-cell culture (up to 7 d) and cellular heterogeneity analysis using clonogenic assay. These applications were demonstrated with KT98 mouse neural stem cells, and A549 and MDA-MB-435 human cancer cells. High single-cell isolation efficiency and long-term culture capability are achieved by using different sizes of microwells on the top and bottom of the microfluidic channel. The small microwell array is designed for precisely isolating single-cells, and the large microwell array is used for single-cell clonal culture in the microfluidic chip. This microfluidic platform constitutes an attractive approach for single-cell culture applications, due to its flexibility of adjustable cell culture spaces for different culture strategies, without decreasing isolation efficiency.

Here, we present a protocol for isolating and culturing single cells with a microfluidic platform, which utilizes a new microwell design concept to allow for high-efficiency single cell isolation and long-term clonal culture.

Une plate-forme microfluidique pour l&#39;isolement à haut débit unique cellule et Culture

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Fully Automated Centrifugal Microfluidic Device for Ultrasensitive Protein Detection from Whole Blood

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a promising method to detect small amount of proteins in biological samples. The devices providing a platform for reduced sample volume and assay time as well as full automation are required for potential use in point-of-care-diagnostics. Recently, we have demonstrated ultrasensitive detection of serum proteins, C-reactive protein (CRP) and cardiac troponin I (cTnI), utilizing a lab-on-a-disc composed of TiO2 nanofibrous (NF) mats. It showed a large dynamic range with femto molar (fM) detection sensitivity, from a small volume of whole blood in 30 min. The device consists of several components for blood separation, metering, mixing, and washing that are automated for improved sensitivity from low sample volumes. Here, in the video demonstration, we show the experimental protocols and know-how for the fabrication of NFs as well as the disc, their integration and the operation in the following order: processes for preparing TiO2 NF mat; transfer-printing of TiO2 NF mat onto the disc; surface modification for immune-reactions, disc assembly and operation; on-disc detection and representative results for immunoassay. Use of this device enables multiplexed analysis with minimal consumption of samples and reagents. Given the advantages, the device should find use in a wide variety of applications, and prove beneficial in facilitating the analysis of low abundant proteins.

This protocol demonstrates how to achieve femto molar detection sensitivity of proteins in 10 &#181;L of whole blood within 30 min. This can be achieved by using electrospun nanofibrous mats integrated in a lab-on-a-disc, which offers high surface area as well as effective mixing and washing for enhanced signal-to-noise ratio.

Entièrement automatisé centrifuge microfluidique Dispositif pour Ultrasensitive Protein Détection de sang total

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a promising method to detect small amount of proteins in biological samples. The devices providing a platform ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to spatially fractionate the sample based on a biological property of interest. For the resultant spatial distribution to be used as the assay readout, microfluidic devices are often subjected to microscopic analysis requiring complex instrumentation with higher cost and reduced portability. To address this limitation, we have developed an integrated electronic sensing technology for multiplexed detection of particles at different locations on a microfluidic chip. Our technology, called Microfluidic CODES, combines Resistive Pulse Sensing with Code Division Multiple Access to compress 2D spatial information into a 1D electrical signal. In this paper, we present a practical demonstration of the Microfluidic CODES technology to detect and size cultured cancer cells distributed over multiple microfluidic channels. As validated by the high-speed microscopy, our technology can accurately analyze dense cell populations all electronically without the need for an external instrument. As such, the Microfluidic CODES can potentially enable low-cost integrated lab-on-a-chip devices that are well suited for the point-of-care testing of biological samples.

We demonstrate a microfluidic platform with an integrated surface electrode network that combines resistive pulse sensing (RPS) with code division multiple access (CDMA), to multiplex detection and sizing of particles in multiple microfluidic channels.

Plate-forme microfluidique avec multiplexée Détection électronique pour le suivi spatial des particules

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by their natural environment, root hair morphology and function are difficult to study and often excluded from plant research. In recent years, microfluidic platforms have offered a way to visualize root systems at high resolution without disturbing the roots during transfer to an imaging system. The microfluidic platform presented here builds on previous plant-on-a-chip research by incorporating a two-layer device to confine the Arabidopsis thaliana main root to the same optical plane as the root hairs. This design enables the quantification of root hairs on a cellular and organelle level and also prevents z-axis drifting during the addition of experimental treatments. We describe how to store the devices in a contained and hydrated environment, without the need for fluidic pumps, while maintaining a gnotobiotic environment for the seedling. After the optical imaging experiment, the device may be disassembled and used as a substrate for atomic force or scanning electron microscopy while keeping fine root structures intact.

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

This article demonstrates how to culture Arabidopsis thaliana seedlings in a two-layer microfluidic platform that confines the main root and root hairs to a single optical plane. This platform can be used for real-time optical imaging of fine root morphology as well as for high-resolution imaging by other means.

La morphologie de poils absorbants d’Arabidopsis semis dans une bicouche Microfluidic plateforme d’imagerie

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by ...

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

In the last decade, microfluidic techniques have been applied to study small animals, including the nematode Caenorhabditis elegans, and have proved useful as a convenient live imaging platform providing capabilities for precise control of experimental conditions in real time. In this article, we demonstrate live imaging of individual worms employing WormSpa, a previously-published custom microfluidic device. In the device, multiple worms are individually confined to separate chambers, allowing multiplexed longitudinal surveillance of various biological processes. To illustrate the capability, we performed proof-of-principle experiments in which worms were infected in the device with pathogenic bacteria, and the dynamics of expression of immune response genes and egg laying were monitored continuously in individual animals. The simple design and operation of this device make it suitable for users with no previous experience with microfluidic-based experiments. We propose that this approach will be useful for many researchers interested in longitudinal observations of biological processes under well-defined conditions.

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

In this article, we demonstrate live imaging of individual worms employing a custom microfluidic device. In the device, multiple worms are individually confined to separate chambers, allowing multiplexed longitudinal surveillance of various biological processes.

Une plate-forme microfluidique d’imagerie longitudinales chez Caenorhabditis elegans

In the last decade, microfluidic techniques have been applied to study small animals, including the nematode Caenorhabditis elegans, and have proved ...

An Ultrahigh-throughput Microfluidic Platform for Single-cell Genome Sequencing

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of cellular heterogeneity in biological systems. However, single-cell sequencing of large populations has been hampered by limitations in processing genomes for sequencing. In this paper, we describe a method for single-cell genome sequencing (SiC-seq) which uses droplet microfluidics to isolate, amplify, and barcode the genomes of single cells. Cell encapsulation in microgels allows the compartmentalized purification and tagmentation of DNA, while a microfluidic merger efficiently pairs each genome with a unique single-cell oligonucleotide barcode, allowing &gt;50,000 single cells to be sequenced per run. The sequencing data is demultiplexed by barcode, generating groups of reads originating from single cells. As a high-throughput and low-bias method of single-cell sequencing, SiC-seq will enable a broader range of genomic studies targeted at diverse cell populations.

Single-cell sequencing reveals genotypic heterogeneity in biological systems, but current technologies lack the throughput necessary for the deep profiling of community composition and function. Here, we describe a microfluidic workflow for sequencing &gt;50,000 single-cell genomes from diverse cell populations.

Une plate-forme de Microfluidic ultra haute capacité pour le séquençage du génome de cellules individuelles

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of ...