labeling and staining rat brain pericytes for fluorescent imaging

Visualisation de la contractilité des péricytes cérébraux après l’hémorragie sous-arachnoïdienne

Brain pericytes, distinguished by their slender protuberances and protruding cell bodies, encircle the microcirculation1,2. While cerebral blood flow augmentation is predominantly driven by capillary dilation, smaller arteries exhibit slower rates of dilation3. Pericyte contractility exerts influence over capillary diameter and pericyte morphology, impacting vascular dynamics4. Contraction of brain pericytes leads to capillary constriction, and in pathological scenarios, excessive contraction may impede erythrocyte flow5. Various factors, including norepinephrine released from the locus coeruleus, can induce brain pericyte contraction within capillaries6. With a regulatory role in cerebral blood flow, pericytes exhibit 20-HETE synthesis, serving as an oxygen sensor during hyperoxia7. Oxidative-nitrative stress-triggered contraction of brain pericytes detrimentally affects capillaries5. Despite both in vivo and ex vivo investigations into brain pericyte contraction8, limited knowledge persists regarding the imaging of viable and non-viable brain pericytes within brain slices.
Crucially, post-tissue fixation imaging of brain pericytes compromises their vitality and subsequent contractility assessment. Moreover, in scenarios such as neurological disorders (e.g., subarachnoid hemorrhage - SAH), transgenic labeling of brain pericytes fails to differentiate between viable and non-viable pericytes, as confirmed by our preliminary SAH-induced brain pericyte death study9. 
To surmount these challenges, we employed TO-PRO-3 to label live pericytes, while deceased ones were stained with propidium iodide (PI). We used high-resolution confocal imaging technologies to visualize viable and non-viable brain pericytes in brain slices while preserving slice activity during imaging. This article aims to present a reproducible method for imaging viable and non-viable brain pericytes in brain slices, serving as a valuable tool to probe the impact of brain pericytes on cerebral microcirculation post SAH.

Pleins feux sur l’auteur : Imagerie des péricytes post-hémorragie sous-arachnoïdienne chez les rongeurs 

Imagerie des péricytes cérébraux vitaux et non vitaux dans des coupes de cerveau après une hémorragie sous-arachnoïdienne

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Labeling and Staining Rat Brain Pericytes for Fluorescent Imaging  

Marquage et coloration des péricytes cérébraux de rat pour l’imagerie fluorescente

Pour marquer les péricytes, ajoutez le colorant fluorescent TO-PRO-3 au liquide céphalo-rachidien artificiel ou ACSF. Maintenant, incubez le cerveau de rat fraîchement tranché dans l’ACSF chargé de colorant pendant 20 minutes dans un environnement sombre à température ambiante. Ensuite, transférez la crépine en nylon avec les tranches de cerveau dans une chambre de rinçage à plaque à six puits.Laissez reposer les tranches de cerveau dans la chambre pendant 10 minutes. Pour marquer les péricytes non vitaux, incuber les tranches de cerveau marquées TO-PRO-3 dans de l’isolectine B4 conjuguée à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes dans l’obscurité. Après incubation, rincez les tranches de cerveau dans du liquide céphalo-rachidien artificiel pendant 15 minutes.Ensuite, placez les tranches de cerveau dans de l’ACSF gazé avec 5% de dioxyde de carbone et 95% d’oxygène. À cela, ajoutez de l’iodure de propidium à une concentration de 37 micromolaires à 37 degrés Celsius. Pour arrêter l’absorption du colorant et minimiser l’étiquetage de fond, rincez les préparations pendant 15 minutes dans ACSF.Dans des conditions physiologiques normales, les péricytes cérébraux ne subissent pas de mort cellulaire. Des péricytes viables qui n’ont pas été colorés à l’iodure de propidium ont été détectés. Les modèles d’HSA devraient vitaliser les péricytes au sein de la microvascularisation.Des péricytes non vitaux ont également été détectés. Les péricytes non vitaux marqués à l’iodure de propidium sont restés attachés à l’ensemble de la microvascularisation.

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111 vues. Pour marquer les péricytes, ajoutez le colorant fluorescent TO-PRO-3 au liquide céphalo-rachidien artificiel ou ACSF. Maintenant, incubez le cerveau de rat fraîchement tranché dans l’ACSF chargé de colorant pendant 20 minutes dans un environnement sombre à température ambiante. Ensuite, transférez la crépine en nylon avec les tranches de cerveau dans une chambre de rinçage à plaque à six puits.Laissez reposer les tranches de cerveau dans la chambre pendant 10 minutes. Pou...

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Imaging Vital and Non-vital Brain Pericytes in Brain Slices following Subarachnoid Hemorrhage

Pericytes are crucial mural cells situated within cerebral microcirculation, pivotal in actively modulating cerebral blood flow via contractility adjustments. Conventionally, their contractility is gauged by observing morphological shifts and nearby capillary diameter changes under specific circumstances. Yet, post-tissue fixation, evaluating vitality and ensuing pericyte contractility of imaged brain pericytes becomes compromised. Similarly, genetically labeling brain pericytes falls short in distinguishing between viable and non-viable pericytes, particularly in neurologic conditions like subarachnoid hemorrhage (SAH), where our preliminary investigation validates brain pericyte demise. A reliable protocol has been devised to surmount these constraints, enabling simultaneous fluorescent tagging of both functional and non-functional brain pericytes in brain sections. This labeling method allows high-resolution confocal microscope visualization, concurrently marking the brain slice microvasculature. This innovative protocol offers a means to appraise brain pericyte contractility, its impact on capillary diameter, and pericyte structure. Investigating brain pericyte contractility within the SAH context yields insightful comprehension of its effects on cerebral microcirculation.

The preliminary inquiry confirms that subarachnoid hemorrhage (SAH) causes brain pericyte demise. Evaluating pericyte contractility post-SAH requires differentiation between viable and non-viable brain pericytes. Hence, a procedure has been developed to label viable and non-viable brain pericytes concurrently in brain sections, facilitating observation using a high-resolution confocal microscope.