Expression et purification à haut débit de vecteurs de solutés humains pour des études structurales et biochimiques

Les transporteurs de solutés, ou SLC, sont responsables de l’absorption des nutriments et sont impliqués dans les maladies humaines. Cependant, il existe peu de médicaments ciblant les SLC parce qu’ils sont peu étudiés. Nous avons développé des approches efficaces pour cloner, exprimer et purifier les SLC.

Notre flux de travail produit des protéines pures, ce qui permet des études biochimiques et structurelles, et fournit finalement des informations pour les campagnes de découverte de médicaments. Avec les nombreux rôles dans les processus biologiques, les maladies et l’administration de médicaments, les SLC ont de plus en plus attiré l’attention et sont devenus des cibles thérapeutiques attrayantes. Les projets privés et publics de l’IMI ReSOLUTE ont généré des ressources et des données en libre accès pour permettre de nouvelles découvertes dans les domaines de la fonction, de la physiologie, de la pathologie et du ciblage thérapeutique des CSL.

Traditionnellement, les SLC étaient difficiles à étudier car ce sont des protéines membranaires intégrales avec divers substrats et divers mécanismes de transport. Récemment, Cryo-EM, le système d’expression de BacMam et de nouveaux réactifs de solubilisation ont conduit à un changement radical dans leur caractérisation. Des échantillons de protéines pures sont nécessaires pour les études biochimiques et structurales.

Chez l’homme, les porteurs de soluté ont souvent un faible rendement lorsqu’ils sont surexprimés et instables lorsqu’ils sont purifiés. Par conséquent, dans le passé, chaque cible nécessitait des années pour développer des structures individuelles afin de produire l’échantillon de protéine pour des applications en aval. Notre méthode est optimisée pour l’étude parallèle et rentable de plusieurs cibles ou constructions d’une seule cible.

Par conséquent, il équilibre soigneusement la flexibilité expérimentale, le coût, le temps et les ressources de laboratoire. De plus, nous offrons un accès libre à tous nos protocoles et ressources dans cet article et sur le portail Web ReSOLUTE.