Préparation de milieux conditionnés à base de cellules méningées humaines (HMC) et collecte de liquide céphalo-rachidien pour la culture de cellules tumorales circulantes

Pour commencer, pré-enduire un flacon T175 de Poly-L-Lysine. Placez le flacon dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant une heure. Utilisez maintenant une pipette sérologique stérile pour aspirer la solution de lysine.

Pipette 30 millilitres de milieu de culture complet de méninges contenant des cellules méningées humaines dans le flacon. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius sous une supplémentation en dioxyde de carbone de 5 %. Lorsque les cellules atteignent une confluence d’environ 75 % à 80 %, prélever et conserver le milieu de culture HMC dans un tube conique de 50 millilitres.

Ajoutez ensuite un milieu de culture de méninges complet dans le tube dans un rapport de un à un. Enfin, pipetez les facteurs de croissance dans le tube pour créer le milieu conditionné HMC. Pour traiter le liquide céphalo-rachidien, placez-le d’abord dans un tube conique de 15 millilitres sur de la glace pour le refroidir.

Centrifuger le fluide dans une centrifugeuse prérefroidie à 257 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Pipetez le surnageant sans déranger la pastille cellulaire et faites-en des aliquotes dans différents tubes. Ajoutez maintenant un millilitre de PBS à la pastille cellulaire pour la remettre en suspension.

Centrifugez les cellules à 1 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Aspirez le surnageant PBS tout en laissant environ 50 microlitres de celui-ci au fond du tube. Effectuez un comptage des cellules avec la suspension cellulaire avant de cultiver les cellules.

Plusieurs facteurs de croissance ont été régulés à la hausse dans les milieux cultivés avec des cellules méningées humaines.