Pour commencer, placez les instruments chirurgicaux autoclavés sur la table d’opération. Rasez l’abdomen du rat anesthésié et placez le rat en position couchée sur la planche chirurgicale. Nettoyez l’abdomen avec de la povidone iodée suivie de 70% d’éthanol.
Placez une pommade ophtalmique sous les yeux du rat pour éviter la sécheresse. Fixez le rat en place sur la planche chirurgicale. Démarrez le logiciel d’acquisition de données et commencez l’enregistrement.
Allumez le ventilateur à quatre millilitres par kilogramme et assurez-vous que la pression expiratoire finale positive est d’environ deux centimètres d’eau. À l’aide de ciseaux, effectuez une laparotomie médiane de l’apophyse xiphoïde à la symphyse pubienne. Ensuite, à l’aide d’un instrument contondant, effectuez une rotation viscérale médiale-latérale et visualisez la veine cave inférieure infrahépatique.
Injectez de l’héparine dans la veine cave inférieure avec une aiguille de calibre 20. À l’aide d’une paire de ciseaux, coupez la peau de l’encoche sternale juste en dessous de l’angle de la mandibule et commencez à disséquer vers la trachée. Ensuite, disséquez brutalement les muscles de la sangle nécessaires pour exposer la trachée.
Faites une incision transversale sur la trachée antérieure entre les anneaux cartilagineux, en veillant à ne pas couper la partie postérieure de la trachée. Placez une suture en soie 5-0 autour de la trachée. Insérez le tube endotrachéal dans les anneaux cartilagineux et fixez-le avec la suture en soie 5-0.
Connectez la sonde endotrachéale au ventilateur et assurez-vous d’une bonne élévation de la poitrine. À l’aide de ciseaux, effectuez une sternotomie médiane et pénétrez dans la cavité thoracique. Placez des écarteurs de paroi thoracique pour exposer le cœur et les poumons, en évitant toute manipulation involontaire des poumons.
Avec la combinaison d’une dissection nette et émoussée, retirez le thymus du médiastin antérieur. Identifiez l’artère pulmonaire et placez une suture en soie 5-0 autour d’elle pour préparer la canulation. Faites une incision de deux à trois millimètres dans la voie d’éjection ventriculaire droite à l’aide de ciseaux pour placer la canule artérielle dans l’artère pulmonaire et fixez-la avec la suture 5-0.
Après avoir euthanasié le rat, connectez rapidement le liquide de préservation des poumons désaéré à la canule artérielle pour rincer les poumons par gravité. Connectez la canule artérielle au circuit EVLP. Allumez la pompe à rouleau et laissez une petite quantité de perfusat s’écouler dans le poumon et sortir du ventricule gauche dans la cavité thoracique.
Une fois que le perfusat commence à s’écouler de l’oreillette gauche, éteignez la pompe à rouleau. Ensuite, placez une petite pince dans le ventricule gauche et étirez doucement l’anneau de la valve mitrale. Placez une cravate en soie 5-0 autour du cœur et attachez-la sans serrer.
Insérez la canule de l’oreillette gauche dans le ventricule gauche et avancez la canule jusqu’à ce qu’elle soit visible à l’intérieur de l’oreillette. Fixez l’oreillette gauche avec la suture pré-nouée 5-0. Identifiez l’œsophage et clampez-le avec un hémostat le plus près possible du diaphragme.
Ensuite, coupez l’œsophage sous l’hémostat. En utilisant la colonne vertébrale comme guide, coupez toutes les attaches ligamentaires reliant le bloc cœur-poumon aux structures environnantes avec des ciseaux. Ensuite, disséquez la trachée du cou et coupez la trachée au-dessus du tube endotrachéal pour libérer le bloc cœur-poumon.
Déplacez le bloc cœur-poumon vers la gaine thoracique dans le circuit EVLP et fixez la canule de l’oreillette gauche au circuit. Allumez la pompe à rouleaux et connectez le moniteur de ventilation. Vérifiez le piège à bulles pour vous assurer qu’aucune embolie gazeuse n’est introduite dans le système.
Modifiez lentement les paramètres de ventilation et de perfusion aux niveaux expérimentaux souhaités pendant les 15 premières minutes. De plus, augmentez le débit de perfusion au débit et à la pression souhaités. À des moments désignés, vérifiez les niveaux de gaz perfusatif et les tests de la fonction respiratoire.
Tous les perfusats testés ont montré une légère diminution de la pression partielle d’oxygène dans l’oreillette gauche, le perfusate à base de globules rouges diminuant significativement au bout d’une heure. Pendant les heures qui ont suivi, le polyhHB et les perfusats témoins ont présenté une pression partielle d’oxygène stable dans l’oreillette gauche. La pression partielle delta de l’oxygène a diminué de manière significative au bout d’une heure dans le groupe perfusats de globules rouges, tandis qu’elle est restée stable dans le groupe des perfusats polyhHB et témoins avec une tendance non significative.
La pression partielle de dioxyde de carbone dans l’oreillette gauche était significativement plus faible dans le perfusat de globule rouge et de contrôle par rapport au polyhHB après la première heure, et cette tendance se poursuit au cours des heures suivantes. La pression partielle delta du dioxyde de carbone a été considérablement augmentée dans le perfusat de globules rouges après une heure et est ensuite restée stable dans le perfusat polyhHB et le perfusat témoin. Les données physiologiques pulmonaires en temps réel démontrent que le perfusat de globules rouges augmentait considérablement la résistance vasculaire pulmonaire au cours de la première heure.
Bien que les perfusats polyhHB et témoins aient maintenu une résistance vasculaire pulmonaire faible et stable au cours de la période, le changement du poids pulmonaire a été significatif dans le perfusat de globules rouges au départ, avec une augmentation continue de tous les perfusats, légèrement plus dans le polyhHB. L’observance a diminué de façon significative dans le perfusat de globules rouges au cours de la première heure, tandis qu’elle a diminué de façon non significative dans d’autres perfusats. PolyhHB avait le taux d’observance le plus élevé après quatre heures.
