Ce travail de recherche a été soutenue financièrement par des subventions fournies par Innovatief Actieprogramma Groningen (IAG-3), Jan De Cock Kornelis Stichting et Tekke Huizingafonds, le tout dans les Pays-Bas. Nous sommes reconnaissants à tous les coordinateurs de transplantation néerlandais pour identifier les potentiels jeté foies et obtention du consentement éclairé.

Ce protocole a été approuvé par la commission médicale éthique (Medisch Ethische Toetsingscommissie) de l&#39;Université Medical Center Groningen, aux Pays-Bas. 1. Préparation du liquide de perfusion Remarque: Le volume total du fluide de perfusion préparée pour perfusion normothermique Machine selon ce protocole est 2233 ml et l&#39;osmolarité ciblée du fluide de perfusion est 302 mOsmol / l. <ol><li> A partir des composants du fluide de perfusion décrit dans le tableau 1, maintenir les humains concentré de globules rouges, du plasma frais congelé et séparé de l&#39;albumine humaine. Mélanger le reste des composants de façon stérile et conserver la solution dans un sac stérile pour le transport de la salle d&#39;opération (OR). Pour ce faire, dans un environnement stérile (idéalement une installation de Bonne Pratiques de Fabrication) ou dans une hotte à flux laminaire dans une chambre de culture. </li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Composants </td><td fo:width="2in" style="width:80px"> Quantité </td></tr><tr><td> Globule rouge paniers (hématocrite 60%) </td><td style="text-align:right"> 840 ml </td></tr><tr><td> Le plasma frais congelé </td><td style="text-align:right"> 930 ml </td></tr><tr><td> L&#39;albumine humaine 200 g / L (Albuman, Sanquin) </td><td style="text-align:right"> 100 ml </td></tr><tr><td> Nutrition parentérale modifié (Clinimix N17G35E, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7,35 ml </td></tr><tr><td> Les multivitamines pour perfusion (Cernevit, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7 pi </td></tr><tr><td> Oligo-éléments concentré pour perfusion (Nutritrace, B. Braun Melsungen AG) </td><td style="text-align:right"> 7,35 ml </td></tr><tr><td> Metronidazol pour l&#39;administration iv (5 mg / ml) (Flagyl, Sanofi-Aventis) </td><td style="text-align:right">40 ml </td></tr><tr><td> Céfazoline 1,000 mg flacon 5 ml poudre pour l&#39;administration iv (Servazolin, Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 2 ml </td></tr><tr><td> L&#39;insuline à action rapide (100 UI / ml) (Actrapid®, Novo Nordisk) </td><td style="text-align:right"> 20 ml </td></tr><tr><td> glubionate de calcium, solution intraveineuse de 10%, 137,5 mg / ml (Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 40 ml </td></tr><tr><td> H 2 O stérile </td><td style="text-align:right"> 51,3 ml </td></tr><tr><td> Une solution de NaCl à 0,9% </td><td style="text-align:right"> 160 ml </td></tr><tr><td> Bicarbonate de sodium 8,4% de solution </td><td style="text-align:right"> 31 ml </td></tr><tr><td> Héparine 5000 IE / ml pour l&#39;administration iv </td><td style="text-align:right"> 4 ml </td></tr><tr><td> Total </td><td style="text-align:right"> 2233 ml </td></tr></tbody></table> Tableau 1: Components de la perfusion de fluides 16. <ol start="2"><li> Transfert des globules rouges (840 ml) humain emballé, du plasma frais congelé (930 ml), albumine humaine 200 g / L (100 ml) et la solution préparée à l&#39;étape 1.1 de l&#39;OU à être administrés à l&#39;appareil de perfusion. </li></ol> 2. amorçage du dispositif de perfusion <ol><li> Ajouter les composants du fluide de perfusion, y compris les humains concentré de globules rouges, du plasma frais congelé, albumine humaine et la solution préparée à l&#39;étape 1.1 de la machine par l&#39;intermédiaire du connecteur au-dessus des oxygénateurs et supprimer toutes les bulles d&#39;air de la tubulure. </li><li> Allumez la pompe veineuse et suivez les instructions du fabricant sur l&#39;écran. Puis tourner sur la pompe artérielle et de suivre les instructions du fabricant sur l&#39;écran. </li><li> Null mètres de pression contre la pression atmosphérique en suivant les instructions à l&#39;écran. Cela garantit que la pression mesurée au cours des perfusion est la pression réelle au niveau de la veine porte et l&#39;artère hépatique. </li><li> Démarrer le carbogène d&#39;oxygénation en utilisant (95% O 2 + 5% CO 2) à un débit de 4 l / min. Le flux d&#39;air sera réparti entre les deux oxygénateurs (2 L / min par oxygénateur) et cela devrait se traduire par une pO 2 de l&#39;ordre de 60 kPa (ou 450 mmHg) dans le liquide de perfusion. Pour plus perfusions, il est conseillé d&#39;utiliser des sources d&#39;oxygène et de dioxyde de carbone distincts. Cela permet de petits ajustements dans le rapport O 2 / CO 2, qui peuvent être utilisés pour ajuster le pH et le pCO 2 du fluide de perfusion. </li><li> Prélever un échantillon de perfusion pour la mesure des gaz du sang 15-20 min après que le dispositif a été amorcée et contrôler le pH et d&#39;électrolytes en conséquence. NOTE: Assurez-vous de jeter environ 3 ml de liquide de perfusion avant de prendre les échantillons, que ce fluide est dans le tube périphérique et ne représente pas le liquide de perfusion dans le système. Ajouter 8,4% de bicarbonate de sodium sOlution pour pouvoir tampon, visant un pH physiologique (7,35-7,45). Par exemple, ajouter 25-35 ml d&#39;une solution de bicarbonate de sodium à 8,4% et de vérifier les niveaux de pH et de bicarbonate dans le liquide de perfusion en prélevant des échantillons pour la mesure des gaz du sang à intervalles réguliers. </li></ol> 3. Approvisionnement et préparation des foies de donneurs Remarque: Procurer l&#39;organe en utilisant la technique standard de refroidissement in situ et rincer avec un liquide de conservation par le froid (0-4 ° C) de 19. Pour faciliter la canulation de l&#39;artère, laisser un segment de l&#39;aorte supratruncal fixée à l&#39;artère hépatique (figure 2A). <ol><li> Rincer les voies biliaires avec le fluide de conservation (par exemple, University of Wisconsin solution). Ligaturer le canal cystique avec un fil de suture chirurgical. </li><li> Emballer et stocker l&#39;organe dans un sac de donneur d&#39;organes norme stérile et la boîte avec de la glace pilée pour transport subséquent vers le centre MP. </li><li> Débutla procédure de table de retour dès l&#39;arrivée du foie d&#39;un donneur dans la salle d&#39;opération. <ol><li> Prélever un échantillon d&#39;au moins 10 ml de liquide de conservation pour les tests microbiologiques. </li><li> Retirer les attaches du diaphragme à la surface nue du foie ainsi que tout muscle cardiaque restante de la manchette supérieure de la veine cave avec des ciseaux chirurgicaux. </li><li> Disséquer l&#39;artère et la veine porte en utilisant des ciseaux à disséquer et ligaturer les branches latérales en utilisant des sutures ou hémoclips chirurgicales. </li><li> Fermer l&#39;extrémité distale du segment d&#39;aorte supratruncal en utilisant un fil de suture non absorbable monofilament (par exemple, 3-0 Prolène). Insérez la canule artérielle dans l&#39;extrémité proximale de l&#39;aorte supratruncal et sécuriser avec des sutures (figure 2A). Utilisez la canule fourni dans le paquet jetable, tel que fourni par le fabricant du dispositif de perfusion. </li><li> Insérez la canule veineuse dans la veine porte et le fixer avec des sutures. Utilisez la canule fournie dans les dispospackage mesure. La veine hépatique reste uncannulated. </li><li> Rincer la voie biliaire avec la solution de conservation. Insérer un cathéter de silicium dans le canal biliaire et le fixer avec des sutures. NOTE: Ne pas insérer le cathéter trop profondément dans le canal biliaire, car cela pourrait causer des blessures à l&#39;épithélium des voies biliaires. </li><li> Rincer le foie avec une solution de NaCl à 0,9% par la canule de la veine porte comme suit: <ol><li> Si la greffe a été conservé à l&#39;Université de Wisconsin solution que la solution de conservation, débusquer le foie avec 2.000 ml de (C 0-4 °) une solution de NaCl 0,9% froid suivi par 500 ml de chaud (37 ° C) de 0,9% de NaCl solution. </li><li> Si la greffe a été conservé dans une solution d&#39;histidine-tryptophane-Ketoglutarate que la solution de conservation, débusquer le foie avec 1000 ml de (C 0-4 °) une solution de NaCl 0,9% froid suivi par 500 ml de chaud (37 ° C) 0,9 solution de NaCl%. Le but de la chasse d&#39;eau tiède est d&#39;éviter une baisse significative de la température de lafluide de perfusion. </li><li> Effectuer immédiatement la chasse d&#39;eau chaude avant de connecter le foie pour le dispositif de perfusion. NOTE: Toujours garder la durée entre bouffée de chaleur et le début du NMP moins de 1-2 min. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Caractéristiques des donateurs (n = 12) </td><td> Nombre (%) ou médian (IQR) </td></tr><tr><td> Âge (ans) </td><td> 61 (50-64) </td></tr><tr><td> Genre masculin) </td><td> 8 (67%) </td></tr><tr><td> Type de donateur DCD, Maastricht Type III DBD </td><td> 10 (83%) 2 (17%) </td></tr><tr><td> indice de masse corporelle (IMC) </td><td> 27 (25-35) </td></tr><tr><td> Motif de rejet DCD + âge&gt; 60 ans DCD + IMC élevé DCD + diverses raisons * Stéatose sévère </td><td> 5 (41%) 3 (25%) 2 (17%) <br<html> /&gt; 2 (17%) </td></tr><tr><td> solution de préservation Solution UW Solution HTK </td><td> 6 (50%) 6 (50%) </td></tr><tr><td> Donateur temps d&#39;ischémie chaude dans DCD (min) </td><td> 14 (17-20) </td></tr><tr><td> Temps d&#39;ischémie froide (min) </td><td> 389 (458-585) </td></tr><tr><td> indice de risque des bailleurs de fonds (DRI) </td><td> 2,35 (2,01 à 2,54) </td></tr></tbody></table> Tableau 2: caractéristiques donateurs * antécédents du donneur de l&#39;abus de drogues par voie intraveineuse pour une greffe et donateurs prolongée SO 2 &lt;30% après le retrait du soutien de la vie pour une autre greffe.. Abréviations: DCD, don après le décès de la circulation; DBD, don après la mort cérébrale; UW, Université du Wisconsin; HTK, histidine-tryptophane-cétoglutarate <html> g2.jpg &quot;/&gt; Figure 2: (A) Photos d&#39;une greffe de donneur humain qui a été préparé sur la table de retour et (B - D) a ensuite été perfusé normothermically. (A) La canule artérielle est inséré dans l&#39;aorte surpratruncal et la canule veineuse est insérée dans la veine porte. Le canal biliaire est canulée avec un cathéter biliaire de silicium. (B) Le foie est positionné dans la chambre d&#39;organe avec sa face antérieure tournée vers le bas et les canules sont reliées aux tubulures du dispositif de perfusion. (C) 30 min après le début de la perfusion normothermique la machine. (D) 6 heures après le début de la machine normothermique perfusion. Pendant le fonctionnement de la chambre d&#39;organes est recouverte par un couvercle transparent pour maintenir un environnement stérile humide pour le foie (non représentée sur ces images).&quot;&gt; S&#39;il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. 4. Normothermique machine Perfusion <ol><li> Positionner le foie dans la chambre de l&#39;organe avec la face antérieure tournée vers le bas. Connecter immédiatement le foie au dispositif de perfusion de liaison amorcée par la canule de la veine au tube portail d&#39;entrée du dispositif de perfusion et la canule artérielle dans le tube artériel d&#39;entrée du dispositif. </li><li> Lancer la perfusion des deux côtés portail et artérielle en suivant les instructions du fabricant sur l&#39;écran. Régler la pression artérielle moyenne à 70 mmHg et la pression veineuse portale moyenne à 11 mmHg. </li><li> Prélever des échantillons de fluide de perfusion toutes les 30 minutes pour une analyse immédiate des paramètres des gaz du sang (pO 2, pCO 2, SO 2, HCO 2 - et pH) et les paramètres biochimiques (glucose, le calcium, le lactate, de potassium et de sodium) à l&#39;aide d&#39;un analyseur des gaz du sang conventionnel . Soyez sûr de jeter environ 3 ml de perfusionfluide avant de prendre des échantillons, que ce fluide se trouve dans le tube périphérique et ne représente pas le liquide de perfusion dans le système. <ol><li> Pour prendre ces échantillons aspirer le liquide de perfusion en utilisant une seringue de 1 ml par les connecteurs d&#39;échantillonnage qui font partie de l&#39;ensemble de tubes jetables du dispositif de perfusion. Pour chaque échantillon, utiliser une nouvelle seringue et immédiatement enlever les bulles d&#39;air de la seringue lors de l&#39;aspiration de liquide de perfusion. Ensuite, insérez la seringue dans l&#39;analyseur des gaz du sang et de suivre les instructions du fabricant fournies dans le manuel de l&#39;analyseur. </li></ol></li><li> Recueillir le plasma du liquide de perfusion, congeler et conserver à -80 ° C pour la détermination de la phosphatase alcaline (AlkP), la gamma-glutamyl transférase (gamma-GT), l&#39;alanine aminotransférase (ALT), de l&#39;urée et de la bilirubine totale. Récupérer le plasma après 5 min de centrifugation du liquide de perfusion à 1500 x g et 4 ° C. </li></ol>

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Les auteurs de ce manuscrit ont pas de conflit d&#39;intérêt à divulguer.

Cette vidéo fournit une étape par étape pour protocole de la machine normothermique perfusion de foies de donneurs humains en utilisant un dispositif qui permet contrôlée double pression de perfusion dans l&#39;artère et la veine porte hépatique. En suivant ce protocole, les défaillances techniques de la machine de perfusion n&#39;a pas eu lieu et tous les greffes étaient bien perfusé et bien oxygénée. Les foies perfuses ex situ ont hémodynamique étaient stables et métaboliquement actif, tel que ...

La méthode actuelle de préservation d&#39;organe dans la transplantation du foie est à débusquer avec et le stockage ultérieur des foies de donneurs dans le froid (0-4 ° C) liquide de conservation (tels que l&#39;Université du Wisconsin solution ou une solution d&#39;histidine-tryptophane-Ketoglutarate). Cette méthode est appelée stockage à froid statique (SCS). Bien que le taux métabolique de foies à 0-4 ° C est très faible, il existe toujours une demande pour / min / g de tissu hépatique 0,27 pmol d&#39;oxygène, qui ne peut être assurée pendant SCS 1. La méthode classique de SCS, par conséquent, entraîne un certain degré de blessure (supplémentaire) de foies de donneurs. Bien que ce montant de blessure de conservation est pas un problème dans le foie des donateurs de bonne qualité, il peut devenir un facteur critique et la limitation dans le foie sous-optimales qui ont déjà subi un certain degré de blessure chez le donneur. Pour cette raison, les foies avec une qualité optimale ou critères dits prolongée donateurs (DPE) foies sont souvent rejetées pour la transplantation comme o des risquesf échec de la greffe précoce est considéré comme trop élevé. Les taux élevés de la fonction du greffon retardée, non-fonction primaire, et de sténoses biliaires non anastomotiques (NAS) ont été décrits chez les receveurs de foies de don après le décès circulatoire (DCD), les donateurs âgés ou les bénéficiaires de greffes stéatosiques 2. NAS sont une cause majeure de morbidité et de mortalité après transplantation hépatique. NAS peut se produire dans les deux conduits biliaires extra donateurs et intra-hépatiques et peut être accompagnée de boue biliaire intracanalaire et la formation de fonte 3,4. Bien que l&#39;étiologie de NAS est considérée comme multifactorielle, une lésion d&#39;ischémie / reperfusion des voies biliaires cours de la conservation du greffon et de la transplantation a été identifié comme un important mécanisme sous-jacent de 2,5. Transplantation d&#39;un greffon DCD a été identifié comme l&#39;un des plus importants facteurs de risque pour le développement de NAS. La combinaison d&#39;une période d&#39;ischémie chaude chez un donneur DCD, ischémie froide pendant la conservation d&#39;organes, et la reperfusion ultérieureblessures chez le receveur est pensé pour être responsable de lésions irréversibles des voies biliaires, qui, en combinaison avec une capacité de régénération pauvre des voies biliaires, entraîne des cicatrices fibreuses et le rétrécissement des voies biliaires après transplantation hépatique 2,5. NAS ont été rapportés chez 30% des patients recevant un foie DCD 6-8. Il est devenu clair que la méthode actuelle de SCS des greffes de foie pour la transplantation est insuffisante pour les foies de DPE preinjured telles que celles provenant de donneurs DCD. Les méthodes alternatives sont nécessaires pour accroître et optimiser l&#39;utilisation des foies de DPE pour la transplantation. perfusion de la machine (MP) est une méthode de conservation d&#39;organes qui peuvent fournir une meilleure préservation de donneurs d&#39;organes, par rapport à SCS. MP pourrait être particulièrement pertinent pour la préservation des greffons de DPE. Un avantage important de MP est la possibilité de fournir de l&#39;oxygène pour la greffe au cours de la période de conservation. MP peut être réalisé à différentes températures,qui ont été classés comme hypothermique (0-10 ° C), subnormothermic (10-36 ° C) et normothermique (36-37 ° C) député (NMP). En fonction de la température utilisée pour le MP, le type de liquide de perfusion doit être ajusté et avec l&#39;augmentation de température de plus de l&#39;oxygène doit être fourni. La première application clinique de MP dans la transplantation de foie humain a été basée sur la perfusion d&#39;hypothermie sans oxygénation active de la 9,10 de fluide de perfusion. Dans les modèles animaux, député oxygénée hypothermique (0-10 ° C) a été montré pour avoir des effets protecteurs contre les lésions d&#39;ischémie / reperfusion du foie greffe 11 et de fournir une meilleure préservation du plexus vasculaire péribiliaire des voies biliaires 12. Subnormothermic MP oxygénée à 20 ° C ou 30 ° C a également été étudié dans des modèles animaux et a été montré précédemment pour fournir la récupération de la fonction du greffon de foie DCD, par rapport à 13,14 SCS. La faisabilité de subnormothermic MP oxygéné des foies humains était recremment rapporté dans une série de sept foies de donneurs humains jetés 15. NMP (37 ° C) permet l&#39;évaluation de la viabilité du greffon et la fonctionnalité avant la transplantation 16,17. En outre, MP permet de réchauffement graduel de la greffe du foie avant la transplantation, ce qui a été démontré pour faciliter la récupération et la réanimation de la greffe 18. Le dispositif de perfusion utilisé dans le protocole actuel pour perfusion hépatique appareil permet perfusion double (par l&#39;intermédiaire de la veine porte et l&#39;artère hépatique) au moyen de deux pompes centrifuges, qui fournissent un flux continu de portail et un flux pulsatile artérielle. Le système est commandé par la pression, ce qui permet l&#39;auto-régulation de l&#39;écoulement à travers le foie, en fonction de la résistance intrahépatique. Deux creux oxygénateurs à membrane à fibres permettent l&#39;oxygénation de la greffe du foie, ainsi que pour l&#39;élimination de CO 2. La température peut être réglée sur la base du type d&#39;utilisation envisagé MP (de temperat minimum<html> ure de 10 ° C). Débit, la pression et la température sont affichées sur le dispositif en temps réel, permettant un contrôle continu du processus de perfusion. Un nouvel ensemble jetable stérile de tubes, réservoir et oxygénateurs est disponible pour la perfusion de chaque greffon (Figure 1). Le but de cet article de la vidéo est de prévoir une étape par étape du protocole ex situ pour machine à normothermique perfusion de foies de donneurs humains en utilisant cet appareil de perfusion de foie de conception nouvelle. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/52688/52688fig1.jpg" /> Figure 1: (A) Un dessin schématique, (B) une photo de la machine de perfusion, (C) une vue rapprochée de l&#39;oxygénateur, et (D) de la pompe centrifuge utilisée pour perfusion normothermique de foies de donneurs humains.obtenir = &quot;_ blank&quot;&gt; S&#39;il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liver Assist</td>
			<td>Organ Assist</td>
			<td>OA.Li.Li.140</td>
			<td>Perfusion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liver Assist disposable package</td>
			<td>Organ Assist</td>
			<td>OA.Li.DP.540</td>
			<td>Disposable set and cannulas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meredith No.8</td>
			<td>Vygon Nederlands B.V.</td>
			<td>1362082</td>
			<td>Bile duct cannula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human albumin 200g/l / ALBUMAN</td>
			<td>Sanquin</td>
			<td>15522598</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified parenteral nutrition</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>N14G30E</td>
			<td>7.35 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multivitamins for infusion / CERNEVIT</td>
			<td>Baxter International Inc.</td>
			<td>9800927</td>
			<td>7 ul</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentrated trace elements for infusion / NUTRITRACE</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>14811332</td>
			<td>7.35 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole 5mg/ml</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>98181882</td>
			<td>40 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazoline / SERVAZOLIN</td>
			<td>Sandoz B.V.</td>
			<td>15611337</td>
			<td>2 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin&#160;</td>
			<td>various vendors</td>
			<td></td>
			<td>20 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium glubionate, intravenous solution 10%, 137.5 mg/mL</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td>97038695</td>
			<td>40 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile H2O</td>
			<td>Fresenius Kabi Nederland B.V.</td>
			<td>98084453</td>
			<td>51.3 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl 0.9%</td>
			<td>Baxter Nederland B.V.</td>
			<td>15262510</td>
			<td>160 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 5000 IE/ml for i.v. administration</td>
			<td>LEO Pharma B.V.</td>
			<td>98026178</td>
			<td>4 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate 8,4%</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>97973874</td>
			<td>The amount depends on the pH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Packed red blood cell (in SAGM)</td>
			<td>Blood bank (Sanquin)</td>
			<td>N0012000</td>
			<td>750 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fresh frozen plasma</td>
			<td>Blood bank (Sanquin)</td>
			<td>N04030A0/N04030B0</td>
			<td>900 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex situ normothermic machine perfusion of donor livers

Contrairement à la conservation à froid statique conventionnelle (0-4 ° C), ex situ machine à perfusion peut fournir une meilleure préservation des foies de donneurs. Perfusion continue d&#39;organes offre la possibilité d&#39;améliorer la qualité des organes et permet ex situ évaluation de la viabilité des foies de donneurs avant la transplantation. Cet article vidéo fournit une étape de protocole d&#39;étape pour ex situ de perfusion de la machine normothermique (37 ° C) de foies de donneurs humains en utilisant un dispositif qui fournit une pression et une température contrôlée irrigation sanguine pulsatoire de l&#39;artère hépatique et la perfusion en continu de la veine porte. Le fluide de perfusion est oxygéné par deux creux oxygénateurs à membrane de fibres et la température peut être réglée entre 10 ° C et 37 ° C. Au cours de la perfusion, l&#39;activité métabolique du foie, ainsi que le degré de lésion peut être évaluée par l&#39;analyse biochimique des échantillons prélevés dans le liquide de perfusion. Machine de perfusion est un outil très prometteurà augmenter le nombre de foies qui sont appropriés pour la transplantation.

12 foies humains qui ont été refusé pour la transplantation pour des raisons diverses ont été utilisés après avoir obtenu le consentement éclairé pour la recherche de familles de donneurs. Caractéristiques des donateurs sont décrits dans le Tableau 2. Les foies de donneurs humains ont été perfusés normothermically pendant 6 heures en utilisant le protocole décrit dans le présent document. La qualité des greffes de foie ont été évalués par la surveillance de l&#39;homogénéité macr...

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Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Nous présentons ici un protocole décrivant ex situ oxygénée machine à perfusion de greffes de foie donateurs. Cet article contient une étape par étape protocole de se procurer et de préparer la greffe du foie pour la machine perfusion, préparer le liquide de perfusion, amorcer la machine à perfusion et d&#39;effectuer oxygénée normothermique machine à perfusion de la greffe de foie.

Ex Situ Normothermique machine perfusion de foies de donneurs

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

ex-situ-normothermic-machine-perfusion-of-donor-livers

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

11.1K vues.  University of Groningen, University Medical Center Groningen.  Nous présentons ici un protocole décrivant ex situ oxygénée machine à perfusion de greffes de foie donateurs. Cet article contient une étape par étape protocole de se procurer et de préparer la greffe du foie pour la machine perfusion, préparer le liquide de perfusion, amorcer la machine à perfusion et d'effectuer oxygénée normothermique machine à perfusion de la greffe de foie. 

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Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normothermique<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion pour la préservation du rein Greffes avant la transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Recherche

Médecine

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Un petit modèle Animal de Perfusion hépatique normothermique Ex Vivo

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation time and increases the risk of adverse post-transplantation outcomes. Moreover, the static nature of CS does not allow for organ evaluation or intervention during the preservation interval. Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP) is a novel method for preservation of the donated heart that minimizes cold ischemia by providing oxygenated, nutrient-rich perfusate to the heart. ESHP has been shown to be non-inferior to CS in the preservation of standard-criteria donor hearts and has also facilitated the clinical transplantation of the hearts donated after the circulatory determination of death. Currently, the only available clinical ESHP device perfuses the heart in an unloaded, non-working state, limiting assessments of myocardial performance. Conversely, ESHP in working mode provides the opportunity for comprehensive evaluation of cardiac performance by assessment of functional and metabolic parameters under physiologic conditions. Moreover, earlier experimental studies have suggested that ESHP in working mode may result in improved functional preservation. Here, we describe the protocol for ex situ perfusion of the heart in a large mammal (porcine) model, which is reproducible for different animal models and heart sizes. The software program in this ESHP apparatus allows for real-time and automated control of the pump speed to maintain desired aortic and left atrial pressure and evaluates a variety of functional and electrophysiological parameters with minimal need for supervision/manipulation.

Normothermic ex situ heart perfusion (ESHP), preserves the heart in a beating, semi-physiologic state. When performed in a working mode, ESHP provides the opportunity to perform sophisticated assessments of donor heart function and organ viability. Here, we describe our method for myocardial performance evaluation during ESHP.

Normothermique Ex Situ coeur Perfusion en Mode de travail : évaluation de la fonction cardiaque et le métabolisme

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ quality exacerbated by excessive geographic transportation distance and stringent donor organ acceptance criteria pose limitations to current LTx efforts. Ex situ lung perfusion (ESLP) is an innovative technology that has shown promise in attenuating these limitations. The physiologic ventilation and perfusion of the lungs outside of the inflammatory milieu of the donor body affords ESLP several advantages over traditional cold static preservation (CSP). There is evidence that negative pressure ventilation (NPV) ESLP is superior to positive pressure ventilation (PPV) ESLP, with PPV inducing more significant ventilator-induced lung injury, pro-inflammatory cytokine production, pulmonary edema, and bullae formation. The NPV advantage is perhaps due to the homogenous distribution of intrathoracic pressure across the entire lung surface. The clinical safety and feasibility of a custom NPV-ESLP device have been demonstrated in a recent clinical trial involving extender criteria donor (ECD) human lungs. Herein, the use of this custom device is described in a juvenile porcine model of normothermic NPV-ESLP over a 12 h duration, paying particular attention to management techniques. Pre-surgical preparation, including ESLP software initialization, priming, and de-airing of the ESLP circuit, and the addition of anti-thrombotic, anti-microbial, and anti-inflammatory agents, is specified. The intraoperative techniques of central line insertion, lung biopsy, exsanguination, blood collection, cardiectomy, and pneumonectomy are described. Furthermore, particular focus is paid to anesthetic considerations, with anesthesia induction, maintenance, and dynamic modifications outlined. The protocol also specifies the custom device's initialization, maintenance, and termination of perfusion and ventilation. Dynamic organ management techniques, including alterations in ventilation and metabolic parameters to optimize organ function, are thoroughly described. Finally, the physiological and metabolic assessment of lung function is characterized and depicted in the representative results.

Normothermic Negative Pressure Ventilation Ex Situ Lung Perfusion: Evaluation of Lung Function and Metabolism

This paper describes a porcine model of negative pressure ventilation ex situ lung perfusion, including procurement, attachment, and management on the custom-made platform. Focus is made on anesthetic and surgical techniques, as well as troubleshooting.

Perfusion pulmonaire ex situ de la ventilation à pression négative normamère : évaluation de la fonction pulmonaire et du métabolisme

Lung transplantation (LTx) remains the standard of care for end-stage lung disease. A shortage of suitable donor organs and concerns over donor organ ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

Perfusion pancréatique ex vivo normamère pour la conservation des allogreffes de pancréas avant transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Lung Rapid Recovery Procurement Combined with Abdominal Normothermic Regional Perfusion in Controlled Donation after Circulatory Death

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years confirm that the outcomes after lung transplantation from cDCD are similar to those from brain death donors; however, the utilization of lungs from asystole donors remains low. Several reasons may be involved: different legal frameworks among countries and centers with different premortem interventions, inadequate lung donor care before procurement, or even poor experience with cDCD procedures and protocols.
Initially, the rapid recovery technique was commonly employed for the procurement of thoracic and abdominal organs in cDCD, but, in the last decade, abdominal normothermic regional perfusion (ANRP) with extracorporeal membrane oxygenation devices has become a useful method to restore blood flow to abdominal organs, allowing their quality improvement and their functional assessment prior to transplantation. This makes the donation procedure more complex and generates doubts about injury to the grafts due to dual temperature.
The aim of this article is to describe a protocol based on a single center experience with Maastricht III donors combining lung cooling rapid recovery in the thorax and abdominal normothermic regional perfusion. Tips and tricks focused on premortem interventions and lung procurement procedure techniques are explained. This may help to minimize the reluctance among professionals to use this combined technique and encourage other donor centers to use it, despite the increased complexity of the procedure.

The protocol combines a lung cooling rapid recovery technique with abdominal normothermic regional perfusion for abdominal graft procurement in controlled asystole donors, which is a safe and useful method to expand the donor pool.

Obtention d’un rétablissement rapide des poumons combinée à une perfusion régionale normamique abdominale dans le cadre d’un don contrôlé après une mort circulatoire

Controlled donation after circulatory death (cDCD) has contributed to increasing donor numbers all over the world. Experiences published in the last years ...

Functional Assessment of the Donor Heart During Ex Situ Perfusion: Insights from Pressure-Volume Loops and Surface Echocardiography

Heart transplantation remains the gold standard treatment for advanced heart failure. However, the current critical organ shortage has resulted in the allocation of a growing number of donor hearts with extended criteria. These marginal grafts are associated with a high risk of primary graft failure and may benefit from ex situ perfusion before transplant. This technology allows for extended organ preservation using warm oxygenated blood perfusion with continuous metabolic monitoring. The only NESP device currently available for clinical practice perfuses the organ in an unloaded non-working state, which does not allow for functional assessment of the beating heart. We therefore developed an original platform of NESP in working mode conditions with adjustment of left ventricular preload and afterload. This protocol was applied in porcine hearts. Ex situ functional assessment of the heart was achieved with intracardiac conductance catheterization and surface echocardiography. Along with a description of the experimental protocol, we herein report the main results, as well as pearls and pitfalls associated with the acquisition of pressure-volume loops and myocardial power during NESP. Correlations between hemodynamic findings and ultrasound variables are of major interest, especially for further rehabilitation of donor hearts before transplantation. This protocol aims to improve the assessment of donor hearts to both increase the donor pool and reduce the incidence of primary graft failure.

Functional Assessment of the Donor Heart During Ex Situ Perfusion: Insights from Pressure-Volume Loops and Surface Echocardiography

A reliable noninvasive approach for functional assessment of the donor heart during normothermic ex situ heart perfusion (NESP) is lacking. We herein describe a protocol for ex situ assessment of myocardial performance using the epicardial echocardiography and conductance catheter method.

Évaluation fonctionnelle du cœur du donneur pendant la perfusion ex situ : aperçu des boucles pression-volume et de l’échocardiographie de surface

Heart transplantation remains the gold standard treatment for advanced heart failure. However, the current critical organ shortage has resulted in the ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

Modèle de rat de transplantation cardiaque hétérotopique perfusée ex situ normamère

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

<meta charset="utf8"></head><body>Avancement de la transplantation pulmonaire avec perfusion à base de polyhHb dans des modèles EVLP de rat

Exploring Alternative Perfusion Solutions Using Next-Generation Polymerized Hemoglobin-Based Oxygen Carriers in a Model of Rat Ex Vivo Lung Perfusion

Lung transplantation is hampered by the lack of suitable donors. Previously, donors that were thought to be marginal or inadequate were discarded. However, new and exciting technology, such as ex vivo lung perfusion (EVLP), offers lung transplant providers extended assessment for marginal donor allografts. This dynamic assessment platform has led to an increase in lung transplantation and has allowed providers to use donors that were previously discarded, thus expanding the donor pool. Current perfusion techniques use cellular or acellular perfusates, and both have distinct advantages and disadvantages. Perfusion composition is critical to maintaining a homeostatic environment, providing adequate metabolic support, decreasing inflammation and cellular death, and ultimately improving organ function. Perfusion solutions must contain sufficient protein concentration to maintain appropriate oncotic pressure. However, current perfusion solutions often lead to fluid extravasation through the pulmonary endothelium, resulting in inadvertent pulmonary edema and damage. Thus, it is necessary to develop novel perfusion solutions that prevent excessive damage while maintaining proper cellular homeostasis. Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat EVLP. The goal of this study is to provide the lung transplant community with key information in designing and developing novel perfusion solutions, as well as the proper protocols to test them in clinically relevant translational transplant models.

<meta charset="utf8"></head><body>Pleins feux sur l’auteur : Utilisation de l’hémoglobine humaine polymérisée de nouvelle génération pour améliorer l’évaluation et la préservation des poumons du do

Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat ex vivo lung perfusion.

Exploration de solutions de perfusion alternatives à l’aide de transporteurs d’oxygène polymérisés à base d’hémoglobine de nouvelle génération dans un modèle de perfusion pulmonaire ex vivo chez le rat