Pour commencer, obtenez des organoïdes gastriques humains en croissance active avec des diamètres compris entre 200 et 700 micromètres. Décongelez l’aliquote de la matrice extracellulaire, ou ECM, sur de la glace pendant au moins 45 minutes. Et préchauffer les plaques de culture cellulaire à 37 degrés Celsius dans un incubateur à 5 % de dioxyde de carbone.
Après avoir retiré le milieu des puits de la plaque de culture, pipetez du PBS glacé sur chaque gouttelette ECM. Et grattez le gel avec la pointe de pipette P-1000. Prélever le PBS avec les fragments ECM contenant des organoïdes dans un tube conique de 15 millilitres.
Centrifugez le tube à 200G à quatre degrés Celsius pendant cinq minutes. Après avoir aspiré le surnageant, ajoutez 350 microlitres de trypsine-EDTA à 0,25 % dans chaque tube et mélangez délicatement. Incuber les tubes dans un bain-marie, tempéré à 37 degrés Celsius pendant deux à cinq minutes.
Ajoutez 600 microlitres de DMEM glacé, complété par de la pénicilline et de la streptomycine dans chaque tube, et pipetez vigoureusement de haut en bas 40 fois. Centrifugez le tube comme illustré et remettez en suspension la palette cellulaire dans une ECM liquide glacée. Pour chaque échantillon, disposez une plaque de 40 microlitres de MEC liquide contenant des fragments d’organoïdes en une fine ligne horizontale le long du diamètre d’une parabole à fond de verre de 35 millimètres.
Après 15 à 30 minutes d’incubation, ajoutez soigneusement deux millilitres de milieu d’expansion organoïde à la plaque le long du bord du plat sans perturber le gel polymérisé.
