Essai de réassemblage de la luciférase fractionnée pour mesurer les contacts du réticulum endoplasmique et des mitochondries dans des cellules vivantes

Dans mon laboratoire, nous étudions la communication interorganique qui prend une forme de contact membranaire et leurs rôles dans le maintien de la santé cellulaire, ainsi que dans la pathogenèse de la maladie. Nous nous intéressons particulièrement aux contacts membranaires entre les mitochondries et le réticulum endoplasmique et essayons de comprendre comment elles sont régulées et comment leur dérégulation peut conduire à la neurodégénérescence. Bien que nous sachions que les contacts des mitochondries du RE sont importants pour la santé des cellules et que leur dérégulation est associée à de nombreuses maladies, nous ne savons pas grand-chose sur la façon dont leur niveau est régulé.

La première étape pour résoudre ce problème est d’établir un protocole simple et fiable pour mesurer le niveau de contacts des mitochondries du RE dans les cellules. Notre test de luciférase fractionnée offre un moyen plus facile et plus rapide de quantifier les contacts des mitochondries du RE dans les cellules vivantes par rapport à la plupart des tests. Nous tirons parti de deux moitiés divisées de la renilla luciférase, l’une ciblant le RE et l’autre les mitochondries.

Ils ne peuvent être réassemblés que là où les membranes du RE et des mitochondries sont en contact étroit, ce qui permet d’obtenir une luciférase reconstituée avec une activité enzymatique complète. Cette méthode est simple, adaptée aux criblages à haut débit et facilement accessible pour de nombreux laboratoires. Nous espérons qu’il fera progresser le domaine des maladies neurodégénératives en identifiant les modulateurs moléculaires et génétiques des contacts des mitochondries du RE qui peuvent être développés en agents thérapeutiques.

Nos résultats ont ouvert la voie à d’importantes questions telles que la façon dont différents médicaments ou combinaisons de médicaments affectent les contacts des mitochondries du RE, et quels sont les acteurs moléculaires importants derrière ces contacts. À partir de ces questions, nous pouvons mieux comprendre le mécanisme des contacts des mitochondries du RE et trouver des moyens de lutter contre les maladies connexes.