Positionnez la souris anesthésiée dans un cadre stéréotaxique. Identifiez bregma et lambda, en veillant à ce qu’il n’y ait pas plus de 100 micromètres de différence de hauteur entre les deux points de repère. Trouvez et marquez les coordonnées calculées sur le crâne avec un crayon stérile.
Autour des coordonnées, créez un contour de la fenêtre de craniotomie de deux millimètres sur deux millimètres. Après avoir vérifié la profondeur de l’anesthésie, utilisez une perceuse à grande vitesse pour créer une fenêtre de craniotomie de deux millimètres sur deux millimètres. Appliquez 0,5 à 1 millilitre de solution saline normale pour éviter que la surface du cerveau ne se dessèche.
Retirez la dure-mère à l’aide d’une aiguille de seringue et d’une pince fine. Ensuite, utilisez une perceuse à grande vitesse pour créer un trou de bavure séparé pour l’électrode de référence des sondes en silicium, généralement à un ou deux millimètres de la fenêtre crânienne. Appliquez 0,2 millilitre d’adhésif silicone à faible toxicité sur le crâne pour sceller complètement la craniotomie.
À l’aide de la plaque de tête et des vis, fixez la tête de la souris à la plate-forme d’enregistrement d’électrophysiologie. Ensuite, reduisez la tige de la sonde en silicium d’un colorant fluorescent afin que la trajectoire de la sonde puisse être reconstruite après l’expérience. Après cela, montez la sonde sur le manipulateur et réglez l’angle souhaité.
Pour abaisser la sonde d’enregistrement à la surface du cerveau au centre de la fenêtre crânienne, insérez manuellement la sonde à une profondeur d’environ 300 micromètres. Une fois insérée à cette profondeur, abaissez lentement la sonde automatiquement à 200 micromètres par minute à la profondeur ciblée pour minimiser les dommages aux tissus. Enfin, appliquez de l’huile minérale sur la surface du cerveau à l’intérieur de la fenêtre de craniotomie pour éviter le dessèchement.
Enregistrez ensuite les données de la sonde en silicium et de l’ECOG à 30 kilohertz à l’aide d’un contrôleur d’enregistrement Intan. La plupart des neurones enregistrés ont diminué leur décharge pendant l’anesthésie au sévoflurane. La décharge de VLPAG a significativement diminué entre le départ et le sévoflurane.
Cette diminution était constante dans tous les neurones VLPAG.
