Posicione o mouse anestesiado em uma estrutura estereotáxica. Identifique bregma e lambda, garantindo uma diferença de altura não superior a 100 micrômetros entre os dois pontos de referência. Encontre e marque as coordenadas calculadas no crânio com um lápis estéril.
Ao redor das coordenadas, crie um contorno da janela de craniotomia de dois milímetros por dois milímetros. Depois de verificar a profundidade da anestesia, use uma broca de alta velocidade para criar uma janela de craniotomia de dois milímetros por dois milímetros. Aplique 0,5 a 1 mililitro de solução salina normal para evitar que a superfície do cérebro seque.
Remova a dura-máter usando uma agulha de seringa e uma pinça fina. Em seguida, use uma broca de alta velocidade para criar um orifício de rebarba separado para o eletrodo de referência das sondas de silício, geralmente de um a dois milímetros da janela craniana. Aplique 0,2 mililitros de adesivo de silicone de baixa toxicidade no crânio para selar completamente a craniotomia.
Usando a placa de cabeça e os parafusos, fixe a cabeça do mouse no equipamento de gravação de eletrofisiologia. Em seguida, cubra a haste da sonda de silício com corante fluorescente para que a trajetória da sonda possa ser reconstruída após o experimento. Depois disso, monte a sonda no manipulador e defina o ângulo desejado.
Para abaixar a sonda de gravação até a superfície do cérebro no centro da janela craniana, insira manualmente a sonda a uma profundidade de aproximadamente 300 micrômetros. Uma vez inserida nessa profundidade, abaixe lentamente a sonda automaticamente para 200 micrômetros por minuto até a profundidade desejada para minimizar os danos aos tecidos. Finalmente, aplique óleo mineral na superfície do cérebro dentro da janela de craniotomia para evitar o ressecamento.
Em seguida, registre os dados da sonda de silício e do ECOG a 30 kilohertz usando um controlador de gravação Intan. A maioria dos neurônios registrados diminuiu seu disparo durante a anestesia com sevoflurano. O disparo de VLPAG diminuiu significativamente desde o início até durante o sevoflurano.
Essa diminuição foi consistente em todos os neurônios VLPAG.
