Stratégies d’imagerie et de montage par microscopie à feuillet de lumière pour les embryons précoces de poisson-zèbre

Malgré les asymétries internes le long de l’axe gauche-droite, dans la plupart des organismes supérieurs, les structures externes telles que le squelette et les muscles se développent de manière symétrique. À l’aide d’embryons de poisson-zèbre, nous combinons l’imagerie en direct à haute résolution, l’analyse quantitative et la modélisation théorique pour étudier les principes d’établissement de la symétrie. Le domaine dépend fortement de diverses techniques de microscopie pour l’imagerie des embryons en développement avec une haute résolution spatio-temporelle, suivie d’une analyse quantitative des images acquises.

Les différentes formes de microscopie offrent des avantages uniques. Cependant, ces derniers temps, la microscopie à feuillet de lumière et la microscopie à super-résolution en direct ont considérablement fait progresser notre vision des processus dynamiques dans le développement embryonnaire. La microscopie confocale et multiphotonique traditionnelle conduit souvent au photoblanchiment et à la phototoxicité, en plus d’un champ de vision limité lors de l’imagerie d’embryons vivants.

Un microscope à feuillet de lumière multivues résout ces problèmes, permettant des temps d’observation et une rotation des échantillons plus longs. Cependant, des défis subsistent dans la préparation et le montage des échantillons pour l’imagerie à l’aide de cette technique. L’une des principales limites d’une séance d’imagerie réussie est le montage et l’orientation appropriés de l’échantillon.

Nous décrivons ici les stratégies de montage d’embryons précoces de poisson-zèbre pour l’imagerie dans un microscope à feuillet de lumière multivue, ainsi que la procédure générale d’acquisition et de reconstruction d’images multivues.