<p class="jove_content"&gt; Ce travail a été soutenu par le NIH et l&#39;octroi P20RR018766 une subvention de la ABMRF / Fondation pour la recherche sur l&#39;alcool.</p

<ol>
	<li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+system:+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, 94-94 (2010).</li><li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+biology+and+the+microcirculation:+past,+present+and+future.">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li><li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. 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Physiol. 297, 726-726 (2009).</li><li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+movements,+distribution,+and+functions+in+smooth+muscle.">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li><li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity:+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus.">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li><li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II:+modulated+by+G+proteins,+kinases,+and+myosin+phosphatase.">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li><li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication.">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li><li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism.">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li><li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle.">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li><li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaking+through+Ca2++stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization.">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li><li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2++concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation.">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li><li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent.">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li></ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Une nouvelle combinaison de méthodes a été employée pour étudier intrinsèques de pompage des vaisseaux lymphatiques. La capacité de mesurer simultanément les variations de [Ca 2 +] i et de diamètre dans les vaisseaux lymphatiques de pompage permettra à des études sur les contributions relatives de Ca 2 +-dépendante et Ca 2 +-sensibilisant les voies de signalisation dans le mécanisme global régissant le cycle lymphatique contractiles. ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1. Ringer stock 5x </td></tr><tr><td Chimique </td><td> Société </td><td> Nombre de catalogue </td><td> Montant </td></tr><tr><td> Chlorure de sodium </td><td> EMD </td><td> SX0420-3 </td><td> 35 g </td></tr><tr><td> Chlorure de Potassium </td><td> JT Baker </td><td> 3040 </td><td> 1,75 g </td></tr><tr><td> Chlorure de calcium </td><td> Sigma </td><td> C-3881 </td><td> 1,47 g </td></tr><tr><td> Sulfate de magnésium </td><td> Sigma </td><td> M-9397 </td><td> 1,44 g </td></tr><tr><td> Stérile eau filtrée </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Porter à 1 L </td></tr><tr><td> Filtre stérile dans des flacons à l&#39;autoclave et les magasins à 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. Tampon MOPS </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Chimique </td><td> Société </td&gt; <td> Nombre de catalogue </td><td> Montant </td></tr><tr><td> MOPS </td><td> Sigma </td><td> M3183 </td><td> 125,6 g </td></tr><tr><td> Stérile eau filtrée </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Porter à 1 L </td></tr><tr><td> Filtre stérile dans des flacons à l&#39;autoclave et les magasins à 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. L&#39;albumine du sérum physiologique (APSS) </td></tr><tr><td> Chimique </td><td> Société </td><td> Nombre de catalogue </td><td> Montant </td></tr><tr><td> Ringer stock (5x) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 ml </td></tr><tr><td> Tampon MOPS </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 ml </td></tr><tr><td> Phosphate de sodium </td><td> Sigma </td><td> S-9638 </td><td> 0,168 g </td></tr><tr><td> Pyruvate de Sodium </td><td> Sigma </td><td> P5280 </td><td> 0,22 g </td></tr><tr><td> EDTA de sodium salt </td><td> Sigma </td><td> ED2SS </td><td> 0,0074 g </td></tr><tr><td> Le glucose </td><td> Sigma </td><td> G7528 </td><td> 0,901 g </td></tr><tr><td> L&#39;albumine, bovine </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 g </td></tr><tr><td> Stérile eau filtrée </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Porter à 1 L </td></tr><tr><td> Ajuster le pH à 7,4 à 37 ° C, puis filtre stérile dans des flacons à l&#39;autoclave et conserver à 4 ° C. </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Réactifs spécifiques utilisés. Stockez tous à 4 ° C.

measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics

Les vaisseaux lymphatiques constituent un système de transport multifonctionnel qui maintient l&#39;homéostasie des fluides, offre des lipides dans la circulation centrale, et agit comme un système de surveillance pour les antigènes potentiellement dangereux, l&#39;optimisation de l&#39;immunité des muqueuses et des réponses immunitaires adaptatives 1. La lymphe est formé à partir du liquide interstitiel qui pénètre aveugle clos lymphatiques initiaux, puis est transporté contre un gradient de pression dans les grandes lymphatiques collecte. Chaque lymphatique collecte est constitué d&#39;une série de segments appelés lymphangions, séparées par des valves bicuspides qui empêchent le reflux. Chaque lymphangion possède un cycle de contraction qui propulse lymphatiques contre un gradient de pression vers la circulation centrale 2. Ce schéma est analogue phasique contractiles au cycle cardiaque, avec la tension systolique et diastolique phases, et avec une fréquence inférieure 4 de contraction. En outre, les muscles lisses lymphatique génère ton et affiche une constriction myogénique et la dilatation in réponse aux augmentations et des diminutions de la pression luminale, respectivement 5. Un hybride des mécanismes moléculaires qui favorisent à la fois la contractilité phasique et tonique du système lymphatique sont ainsi proposées. Contraction du muscle lisse est généralement réglementé par le Ca 2 + cytosolique de concentration ([Ca 2 +] i), plus la sensibilité au Ca 2 +, des éléments contractiles en réponse aux changements dans l&#39;environnement entourant la cellule 6. [Ca 2 +] i est déterminée par la combinaison du mouvement de Ca 2 + à travers la membrane plasmique ligand ou la tension fermée canaux Ca 2 + et de la libération et l&#39;absorption de Ca 2 + dans les magasins internes. Cytosolique de Ca 2 + se lie à la calmoduline et active les enzymes telles que la chaîne légère de myosine (MLC) kinase (MLCK), qui à son tour phosphoryle MLC menant à l&#39;actine-myosine médiée contraction de 8. Cependant, la sensibilité de cette voie à Ca <sup&gt; 2 + peut être réglementée par la phosphatase MLC (MLCP) 9. L&#39;activité est réglementée par MLCP Rho kinase (ROCK) et la protéine myosine inhibiteur de phosphatase IPC-17. Ici, nous présentons une méthode pour évaluer les changements de [Ca 2 +] i au cours du temps dans des régions isolées, les lymphatiques perfusé afin d&#39;étudier Ca 2 +-dépendante et Ca 2 +-sensibilisant les mécanismes de la contraction musculaire lisse lymphatique. L&#39;utilisation isolée lymphatiques mésentériques du rat collecte que nous avons étudié l&#39;étirement induit des changements de [Ca 2 +] i et de l&#39;activité contractile. Le modèle lymphatique isolé offre l&#39;avantage de pression, débit, et la composition chimique de la solution de bain peut être étroitement contrôlées. [Ca 2 +] i est déterminé par le chargement des lymphatiques avec les ratiométrique, Ca 2 + contraignant colorant Fura-2. Ces études fourniront une nouvelle approche au problème plus large de l&#39;étude des différents mécanismes moléculaires qui régulent phasiquecontractions toniques contre la constriction des muscles lisses lymphatique.

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Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Nous introduisons une approche pour évaluer la cytosolique de Ca<sup&gt; 2 +</supConcentration&gt; dans les vaisseaux lymphatiques isolés pour étudier Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Ca-dépendante et<sup&gt; 2 +</sup&gt; Sensibilisant les mécanismes de la contraction musculaire lisse lymphatique.

Mesure de cytosolique de Ca 2 + En isolé lymphatique contractiles

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

13.5K vues.  Louisiana State University Health Sciences Center. Nous introduisons une approche pour évaluer la cytosolique de Ca 2 + dans les vaisseaux lymphatiques isolés pour étudier Ca 2 + Ca-dépendante et 2 + Sensibilisant les mécanismes de la contraction musculaire lisse lymphatique.