<p class="jove_content"&gt; Diese Arbeit wurde vom NIH P20RR018766 und einen Zuschuss von der ABMRF / Foundation for Alcohol Research gefördert.</p

<ol>
	<li>Chakraborty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+system:+a+vital+link+between+metabolic+syndrome+and+inflammation.">Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 1207, 94-94 (2010).</li><li>Zawieja, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+biology+and+the+microcirculation:+past,+present+and+future.">Lymphatic biology and the microcirculation: past, present and future.</a> Microcirculation. 12, 141-141 (2005).</li><li>Benoit, J. N., Zawieja, D. C., Goodman, A. H., Granger, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+intact+mesenteric+lymphatic+pump+and+its+responsiveness+to+acute+edemagenic+stress.">Characterization of intact mesenteric lymphatic pump and its responsiveness to acute edemagenic stress.</a> Am. J. Physiol. 257, H2059-H2059 (1989).</li><li>Davis, M. J., Davis, A. M., Ku, C. W., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+constriction+and+dilation+of+isolated+lymphatic+vessels.">Myogenic constriction and dilation of isolated lymphatic vessels.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 296, H293-H293 (2009).</li><li>Dougherty, P. J., Davis, M. J., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sensitivity+and+cooperativity+of+permeabilized+rat+mesenteric+lymphatics.">Calcium sensitivity and cooperativity of permeabilized rat mesenteric lymphatics.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294, R1524-R1524 (2008).</li><li>Fay, F. S., Shlevin, H. H., Granger, W. C., Taylor, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aequorin+luminescence+during+activation+of+single+isolated+smooth+muscle+cells.">Aequorin luminescence during activation of single isolated smooth muscle cells.</a> Nature. 280, 506-506 (1979).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+myosin+light+chain+phosphorylation+decreases+rat+mesenteric+lymphatic+contractile+activity.">Inhibition of myosin light chain phosphorylation decreases rat mesenteric lymphatic contractile activity.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, 726-726 (2009).</li><li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+movements,+distribution,+and+functions+in+smooth+muscle.">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-157 (1997).</li><li>Ratz, P. H., Berg, K. M., Urban, N. H., Miner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+smooth+muscle+calcium+sensitivity:+KCl+as+a+calcium-sensitizing+stimulus.">Regulation of smooth muscle calcium sensitivity: KCl as a calcium-sensitizing stimulus.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 288, C769-C769 (2005).</li><li>Somlyo, A. P., Somlyo, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sensitivity+of+smooth+muscle+and+nonmuscle+myosin+II:+modulated+by+G+proteins,+kinases,+and+myosin+phosphatase.">Ca2+ sensitivity of smooth muscle and nonmuscle myosin II: modulated by G proteins, kinases, and myosin phosphatase.</a> Physiol. Rev. 83, 1325-1325 (2003).</li><li>Souza-Smith, F. M., Kurtz, K. M., Molina, P. E., Breslin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+mesenteric+collecting+lymphatic+pump+function+following+acute+alcohol+intoxication.">Adaptation of mesenteric collecting lymphatic pump function following acute alcohol intoxication.</a> Microcirculation. 17, 514-514 (2010).</li><li>Breslin, J. W., Yuan, S. Y., Wu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-C+alters+barrier+function+of+cultured+lymphatic+endothelial+cells+through+a+VEGFR-3-dependent+mechanism.">VEGF-C alters barrier function of cultured lymphatic endothelial cells through a VEGFR-3-dependent mechanism.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 105-105 (2007).</li><li>Shirasawa, Y., Benoit, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretch-induced+calcium+sensitization+of+rat+lymphatic+smooth+muscle.">Stretch-induced calcium sensitization of rat lymphatic smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 285, H2573-H2573 (2003).</li><li>Imtiaz, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pacemaking+through+Ca2++stores+interacting+as+coupled+oscillators+via+membrane+depolarization.">Pacemaking through Ca2+ stores interacting as coupled oscillators via membrane depolarization.</a> Biophys. J. 92, 3843-3843 (2007).</li><li>Muller, J. M., Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+coronary+endothelial+cell+Ca2++concentration+during+shear+stress-+and+agonist-induced+vasodilation.">Changes in coronary endothelial cell Ca2+ concentration during shear stress- and agonist-induced vasodilation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1706-1706 (1999).</li><li>Ferrusi, I., Zhao, J., van Helden, D., von der Weid, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclopiazonic+acid+decreases+spontaneous+transient+depolarizations+in+guinea+pig+mesenteric+lymphatic+vessels+in+endothelium-dependent+and+-independent.">Cyclopiazonic acid decreases spontaneous transient depolarizations in guinea pig mesenteric lymphatic vessels in endothelium-dependent and -independent.</a> 286, H2287-H2287 (2004).</li></ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Eine neuartige Kombination von Methoden wurde eingesetzt, um innere Pumpen von Lymphgefäßen zu studieren. Die Fähigkeit, gleichzeitig zu messen Veränderungen in [Ca 2 +] i und Durchmesser in Pumpen Lymphgefäße wird für die Untersuchung der relativen Beiträge der Ca 2 +-abhängige und Ca 2 +-sensibilisierende Signalwege in der gesamten Mechanismus für die lymphatischen kontraktilen Zyklus. Zulassen Das lymphatische kontraktilen Zyklus beste...

<table border="1"><tbody><tr><td> 1. Ringer 5x Lager </td></tr><tr><td Chemikalie </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Höhe </td></tr><tr><td> Kochsalz </td><td> EMD </td><td> SX0420-3 </td><td> 35 g </td></tr><tr><td> Kaliumchlorid </td><td> JT Baker </td><td> 3040 </td><td> 1,75 g </td></tr><tr><td> Calcium Chloride </td><td> Sigma </td><td> C-3881 </td><td> 1,47 g </td></tr><tr><td> Magnesium Sulfate </td><td> Sigma </td><td> M-9397 </td><td> 1,44 g </td></tr><tr><td> Steriles gefiltertes Wasser </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Bring to 1 L </td></tr><tr><td> Sterile Filter in autoklaviert Flaschen und speichert bei 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2. MOPS-Puffer </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Chemikalie </td><td> Firma </td&gt; <td> Katalog-Nummer </td><td> Höhe </td></tr><tr><td> MOPS </td><td> Sigma </td><td> M3183 </td><td> 125,6 g </td></tr><tr><td> Steriles gefiltertes Wasser </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Bring to 1 L </td></tr><tr><td> Sterile Filter in autoklaviert Flaschen und speichert bei 4 ° C </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3. Albumin physiologischer Kochsalzlösung (APSS) </td></tr><tr><td> Chemikalie </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Höhe </td></tr><tr><td> Ringer Lager (5x) </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 200 ml </td></tr><tr><td> MOPS-Puffer </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> 5 mL </td></tr><tr><td> Sodium Phosphate </td><td> Sigma </td><td> S-9638 </td><td> 0,168 g </td></tr><tr><td> Natriumpyruvat </td><td> Sigma </td><td> P5280 </td><td> 0,22 g </td></tr><tr><td> EDTA-Natrium salt </td><td> Sigma </td><td> ED2SS </td><td> 0,0074 g </td></tr><tr><td> Glucose </td><td> Sigma </td><td> G7528 </td><td> 0,901 g </td></tr><tr><td> Albumin, Bovine </td><td> USB </td><td> 10856 </td><td> 10 g </td></tr><tr><td> Steriles gefiltertes Wasser </td><td> N / A </td><td> N / A </td><td> Bring to 1 L </td></tr><tr><td> Der pH-Wert auf 7,4 bei 37 ° C, dann Sterilfilter in autoklaviert Flaschen und lagern bei 4 ° C. </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Spezifische verwendeten Reagenzien. Speichern Sie alle bei 4 ° C.

measurement of cytosolic ca2+ in isolated contractile lymphatics

Lymphgefäße aus einem multifunktionalen Transport-System, das Flüssigkeitshomöostase unterhält, liefert Lipide zu den zentralen Kreislauf und wirkt wie ein Überwachungssystem für potenziell schädliche Antigene, die Optimierung der Schleimhaut-Immunität und adaptive Immunantworten 1. Lymphe ist in der interstitiellen Flüssigkeit, die blind endenden initialen Lymphgefäße eintritt, und dann gegen einen Druckgradienten in größeren Sammlung Lymphgefäße transportiert gebildet. Jeder sammelt lymphatischen besteht aus einer Reihe von Segmenten bezeichnet Lymphangiome gemacht, getrennt durch bicuspid Ventile Rückfluss zu verhindern. Jeder Lymphangione besitzt einen kontraktilen Zyklus, der Lymphe gegen ein Druckgefälle in Richtung der zentralen Kreislauf 2 antreibt. Diese phasischen kontraktilen Muster ist analog zu den Herzzyklus mit systolischen und diastolischen Phasen, und mit einem geringeren Rückgang Frequenz 4. Darüber hinaus generiert lymphatische Tonus der glatten Muskulatur und zeigt myogene Verengung und Erweiterung in Reaktion auf Zu-und Abnahmen in luminalen Druck bzw. 5. Ein Hybrid aus molekularen Mechanismen, die sowohl die phasischen und tonischen Kontraktilität Lymphgefäße Unterstützung sind daher vorgeschlagen. Kontraktion der glatten Muskulatur in der Regel durch die cytosolische Ca 2 +-Konzentration reguliert ([Ca 2 +] i) plus Sensibilität für Ca 2 +, der kontraktilen Elemente in Reaktion auf Veränderungen in der Umgebung der Zelle 6. [Ca 2 +] i wird durch die Kombination der Bewegung der Ca 2 + durch Plasmamembran Liganden oder spannungsgesteuerten Ca 2 +-Kanäle und die Freisetzung und Aufnahme von Ca 2 + aus dem internen Speicher bestimmt. Cytosolischen Ca 2 + bindet an Calmodulin und aktiviert Enzyme wie Myosin Light Chain (MLC)-Kinase (MLCK), die wiederum phosphoryliert MLC führt zu Aktin-Myosin-vermittelte Kontraktion 8. Allerdings ist die Sensitivität dieses Weges zu Ca <sup&gt; 2 + kann durch die MLC-Phosphatase (MLKP) 9 geregelt werden. MLCP Aktivität wird durch Rho-Kinase (ROCK) und der Myosin-Phosphatase-Inhibitors Protein CPI-17 geregelt. Hier stellen wir eine Methode, um Veränderungen in auszuwerten [Ca 2 +] i im Laufe der Zeit in isolierten, perfundierten Lymphbahnen um Ca 2 +-abhängige und Ca 2 +-sensibilisierende Mechanismen des lymphatischen Kontraktion der glatten Muskulatur zu studieren. Die Verwendung von isolierten Ratten mesenterialen sammeln Lymphbahnen wir untersucht stretch-induzierten Veränderungen in [Ca 2 +] i und kontraktile Aktivität. Die isolierten Lymph-Modell bietet den Vorteil, dass Druck, Durchfluss, und die chemische Zusammensetzung der Badlösung eng kontrolliert werden kann. [Ca 2 +] i wurde durch das Laden Lymphgefäße mit dem ratiometrisch, Ca 2 +-bindenden Farbstoff Fura-2 bestimmt. Diese Studien werden einen neuen Ansatz für die breitere Problem der Untersuchung der verschiedenen molekularen Mechanismen, die phasischen regulieren bietenKontraktionen im Vergleich Tonic Verengung in lymphatischen glatten Muskulatur.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics at JoVE.com

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Wir stellen eine Annäherung an die cytosolische Ca bewerten<sup&gt; 2 +</sup&gt; Konzentration in isolierten Lymphgefäße Ca-Studie<sup&gt; 2 +</sup&gt;-Abhängigen und Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Sensibilisierend Mechanismen des lymphatischen Kontraktion der glatten Muskulatur.

Die Messung der cytosolischen Ca 2 + In Isolated Kontraktile Lymphgefäße

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

measurement-of-cytosolic-ca2-in-isolated-contractile-lymphatics

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

13.5K Aufrufe.  Louisiana State University Health Sciences Center. Wir stellen eine Annäherung an die cytosolische Ca bewerten 2 + Konzentration in isolierten Lymphgefäße Ca-Studie 2 +-Abhängigen und Ca 2 + Sensibilisierend Mechanismen des lymphatischen Kontraktion der glatten Muskulatur.