Les auteurs tiennent à remercier Anni Lee et Maureen Byrne pour leur aide dans l&#39;établissement du protocole de préférence de place conditionnée prolongée.

Toutes les procédures sont menées en conformité avec le Weill Cornell Medical College Institutional Animal Care et les règles du Comité d&#39;utilisation. 1. Préparation et installation de livraison stéréotaxique de vecteurs viraux <ol><li> Si un instrument, écouvillon stérile, ou porter des gants stériles main est contaminée en entrant en contact avec une surface non stérile, jeter ou re-stériliser l&#39;instrument en utilisant un stérilisateur à billes chaud, jeter l&#39;écouvillon ou changer pour de nouveaux gants stériles. </li><li> Placez une cage de la souris avec la literie sur un bloc de chaleur pour réchauffer pour la récupération post-opératoire. </li><li> Mettre en place un rasoir électrique pour tête de rasage et de l&#39;éthanol et de l&#39;iode pour stériliser le cuir chevelu. </li><li> Essuyez barres d&#39;oreilles et la bouche maintien de la stereotax avec 70% d&#39;éthanol. </li><li> L&#39;utilisation d&#39;un 5 pi seringue Hamilton, dresser 5 pi du vecteur viral (1 x 10 6 particules virales / pl) et mis en place dans le porte-seringue sur stereotax. </li><li> Coussin chauffant à micro-onde ou de tourner sur un bloc électriqueème place sur stereotax. Couvrir avec un tampon absorbant propre pour réduire le risque de brûlures. Surveillez la température du corps de la souris (entre 97 à 99,5 ° F) fréquemment tout au long de la procédure. </li><li> Injecter souris (pesant entre 22-35 g) avec un mélange de kétamine (100 mg / kg) et de xylazine (20 mg / kg). Une fois que la souris est anesthésiée, extrémité de la queue de pincement pour vérifier les réflexes de la souris et notez tout mouvement ou une réponse à ce que la souris est correctement anesthésié. </li><li> Raser la tête entre les oreilles et les yeux. </li><li> Nettoyez la tête rasée avec de l&#39;éthanol et de l&#39;iode applicateurs de coton stériles alternatif. </li><li> Transfert souris pour coussin chauffant sur stereotax. </li></ol> 2. La micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux <ol><li> Porter des gants stériles tout au long de l&#39;opération. Si les gants sont contaminés à tout moment en touchant des surfaces non stériles, changer de gants. </li><li> Zéro barre des dents et des écailles de la barre de l&#39;oreille. </li><li> Réglez les dents dans la barre de dent. </li><li> Visser museau. Si tortillant ou moustache mouvementment est à noter, à tout moment, d&#39;administrer une dose de rappel ip (~ 0,05 cm) d&#39;un mélange de kétamine (100 mg / kg) et de xylazine (20 mg / kg). </li><li> Visser dans les bars de l&#39;oreille. </li><li> Lubrifier les yeux avec PuraLube. </li><li> Couper le cuir chevelu ouvert à tout juste derrière les oreilles avec un scalpel. </li><li> Placez les clips de bouledogue sur les coins du cuir chevelu à peler la peau loin de crâne. Bregma et lambda doit être facilement visible. </li><li> Assurez-vous de suture bregma au lambda est aligné droite. Si la suture est le positionnement réajuster tordu de la tête. </li><li> Assurez-vous que tous les paramètres de la stereotax sont mis à zéro. </li><li> Mettez pointe de l&#39;aiguille en place au bregma. </li><li> Mesurez toutes les coordonnées pour les deux bregma et lambda. Cela comprend les coordonnées dorsale / ventrale, interne / externe et antérieur / postérieure. </li><li> Ajuster la tête jusqu&#39;à ce que les coordonnées ventrales pour bregma et lambda est inférieur à 0,02 mm les uns des autres. </li><li> Une fois aligné, à partir de bregma aller dedans sur les coordonnées interne / externe (M / L). S&#39;assurerles côtés gauche et droit sont alignées à l&#39;intérieur de 0,02 mm les uns des autres. </li><li> Extrémité de l&#39;aiguille Re-centre sur bregma et de là déplacer dans la direction antérieure / postérieure (P / A) pour la coordonnée antérieure / postérieure désirée. </li><li> Si nécessaire, aiguille angle dans un sens et s&#39;assurer que le stereotax est verrouillé. Allez vers la gauche M / L de coordonnées (+ / - 1,52) </li><li> Mesurer la position ventrale de la partie supérieure du crâne à utiliser comme référence après le trou de forage est foré. </li><li> Forer un trou de forage utilisant un trépan de forage stérile à la coordonnée désirée. Vérifiez que l&#39;aiguille ne peut entrer sans interruption à travers le crâne. </li><li> Abaissez l&#39;aiguille à la coordonnée ventral souhaité. </li><li> Une fois la coordonnée est atteinte, trempette 0.015 mm en dessous de ~ 10 sec pour créer une petite poche pour le vecteur viral. </li><li> Injecter le volume désiré de vecteur viral à un taux d&#39;environ 0,1 ul / min. Attendre 3 minutes pour vecteur viral pour diffuser complètement. Soulever le nez aiguille 0,015 mm et d&#39;attendre 2 min de plus. </li><li>Plonger l&#39;aiguille (si cela injections inclinées) dans la direction opposée. Encore une fois, enregistrer la position ventrale comme une référence pour le sommet du crâne. </li><li> Répétez les mêmes étapes que sur la première face à injecter vecteur viral sur le côté opposé (si cela injections bilatérales). </li><li> Appliquer de la cire d&#39;os pour les deux trous de les sceller avec l&#39;extrémité en bois d&#39;une pointe d&#39;applicateur de coton stérile. </li><li> Suturer le cuir chevelu. </li><li> Appliquer bloc du nerf de la zone blessée. </li><li> Retirer souris de stereotax et le placer dans la cage réchauffé sur le bloc thermique pour récupérer pendant 45 min. </li><li> Surveiller les signes de la douleur, y compris: diminution de l&#39;activité globale ou agitation, diminution de la nourriture et la consommation d&#39;eau ou d&#39;augmentation de vocalisation. La buprénorphine (0,05 à 0,2 mg / kg) peut être administré deux fois par jour pendant une semaine si nécessaire pour la douleur. Alternatives acceptables: la mépéridine (20-60 mg / kg), la pentazocine (10 mg / kg), nalbuphine (4-8 mg / kg). </li></ol> 3. Préférence de place conditionnée: Acquisition, Extinction, et Rétablissement <ol><li> Placez la souris dans la chambre centrale d&#39;un appareil de préférence lieu à trois chambres (Med Associates Inc., St. Albans, VT, USA) pour une période d&#39;habituation 60 sec de portes à guillotine fermés. </li><li> Après accoutumance, portes à guillotine ouverts et permettre souris exploration libre des 3 chambres pour 1.200 sec, le temps passé dans chaque chambre étant enregistrées en utilisant le logiciel MedPC IV (Med Associates, Inc.). </li><li> Attribuer des souris à des chambres de conditionnement en fonction de leur performance lors du pré-test. En utilisant une conception, l&#39;administration de médicaments paire biaisée pendant les suivantes 3 jours avec le compartiment qui était moins pratique au cours de la pré-test de référence. </li><li> Durant les 3 prochains jours de conditionnement, d&#39;injecter des souris avec de la cocaïne (10 mg / kg; ip) au cours de la séance du matin et les enfermer dans leur chambre attribué à 1,200 sec immédiatement après l&#39;injection. Retour souris dans leur cage d&#39;origine après la séance. Après 4 h, injecter des souris avec une solution saline (0,01 ml / gpoids corporel) et les confiner dans la chambre opposée à la session de 1200 sec l&#39;après-midi. </li><li> Pour tester l&#39;acquisition, placez la souris dans la chambre centrale de portes à guillotine fermées pour une période d&#39;habituation 60 sec. Portes à guillotine s&#39;ouvrir et laisser le libre exploration pour 1200 sec, le temps passé dans toutes les chambres enregistrées par le logiciel MedPC IV (Med Associates, Inc.). Calculer préférence en soustrayant la quantité de temps passé dans la chambre saline apparié à partir de la quantité de temps passé dans la chambre de cocaïne appariés. </li><li> Pour éteindre la préférence de place, exposer des souris à deux séances de 20 min de l&#39;exploration libre tous les jours dans le même appareil, séparés par au moins 2 heures, en commençant 24 heures après le test d&#39;acquisition. Le temps passé dans toutes les chambres devrait à nouveau être enregistrée et l&#39;ampleur de l&#39;initiale du RPC devrait être comparée à celle de chaque séance d&#39;extinction. </li><li> Déterminer si les souris ont éteint la préférence induite par le médicament en évaluant si la préférence pour un pied d&#39;égalitéchambre particulière sur deux jours consécutifs extinction est nettement inférieur à celui du score de préférence d&#39;acquisition. </li><li> Rétablir souris avec une dose d&#39;amorçage de la cocaïne (5 ou 10 mg / kg; ip) et ré-exposer à l&#39;appareil permettant la libre exploration et d&#39;enregistrer le temps passé dans chaque compartiment. </li><li> Administrer la solution de l&#39;euthanasie Euthasol (150 mg / kg). Transcardiaque perfuser des souris avec du paraformaldéhyde 4% (PFA) et d&#39;effectuer un examen histologique de valider le placement de micro-injection correcte. </li></ol>

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Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Régional et l&#39;ablation d&#39;un gène spécifique temporellement par micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux associés avec le RPC qui comporte des phases de remise en extinction et de permettre de retrouver les contributions spécifiques des gènes à trois phases distinctes de comportement addictif-like. Alors KO conditionnel qui est réalisé en utilisant le système Cre-loxP traditionnelle prévoit spatio-temporellement ablation génique limité, micro-injection stéréotaxique Cre-recombinase dans d...

La cocaïne est un psychostimulant très renfort. Après une exposition répétée, plusieurs adaptations moléculaires et cellulaires se produisent en récompense pertinente circuits du cerveau qui sont censés entraîner compulsif comportement cherchant le médicament, ce qui incite les taux élevés de rechute qui posent un sérieux problème clinique 1. La cocaïne exerce ces effets comportementaux durables en régulant l&#39;expression des gènes. Pour étudier les adaptations qui découlent de l&#39;utilisation chronique de la cocaïne, des modèles de rongeurs précliniques ont été utilisés. Un tel modèle est la préférence lieu (RPC) paradigme conditionné. Ce modèle implique le développement d&#39;une association entre un environnement appris précédemment neutre et les propriétés gratifiantes de cocaïne. Après plusieurs paires de cocaïne d&#39;une chambre particulière, les animaux sont autorisés à explorer librement les environnements de cocaïne appariés et non appariés cocaïne et s&#39;ils préfèrent le compartiment drogue jumelés, ils auraient acquis une plac induite par la cocaïnee préférence. Par ailleurs, après une période de formation d&#39;extinction, ce paradigme peut être utilisé pour étudier la réintégration du contexte spécifique de cocaïne comportement de recherche. Par rapport à d&#39;autres modèles de comportement des conduites addictives-like, comme la sensibilisation psychomoteur, qui est utilisé pour étudier à long terme induite par la cocaïne et de la plasticité comportementale moléculaire 2,3 et l&#39;auto-administration (SA), qui est pensé pour plus de précision imiter dépendance -comme le comportement constaté chez les humains, le paradigme du RPC est une procédure simple pour étudier la cocaïne apprentissage contextuel 4. Protocoles RPC peuvent être facilement étendus pour inclure les phases de remise en extinction et, de manière similaire à SA, qui permettent d&#39;enquête sur les mécanismes qui sous-tendent le besoin de drogue et la rechute 5-7 et qui sont soupçonnés de récapituler les aspects de ce qui se passe chez l&#39;homme comportement cherchant le médicament et médicament - et cue-induite rechute 8-10. Un mécanisme qui sous-tend l&#39;induite par la cocaïne plasticité comportementale qui est caractéristique de chacune des phases distinctes du RPC, y compris l&#39;acquisition, extinction, et la réintégration, est l&#39;activation des signatures uniques de l&#39;expression des gènes dans les différentes régions du cerveau. Pour tester directement les gènes dans les régions du cerveau récompense pertinents médiation cocaïne induit des changements de comportement, il est utile d&#39;être capable de manipuler de manière sélective d&#39;une manière spécifique à chaque région. Une façon d&#39;y parvenir est de micro-injection des vecteurs recombinants ADENOASSOCIE virales (rAAV) qui expriment la recombinase Cre en utilisant la chirurgie stéréotaxique, dans des zones distinctes du cerveau de souris qui ont des gènes cibles flanqué par des sites loxP (souris floxés). Cette méthode permet un contrôle temporel et régional très précise où et quand les gènes sont ablation, dans les deux neurones division et non de division, sans induire des réponses immunitaires 11-13. Ce niveau de contrôle représente un avantage important sur la technologie Cre-loxP traditionnelle de la reproduction des souris floxés wvec des souris exprimant la recombinase Cre sous le contrôle d&#39;un promoteur du gène endogène, en ce que le timing et la distribution de délétion du gène peuvent être plus étroitement réglementés. En outre, viral knock-out du gène vecteur médiée contourne effets compensatoires de développement potentiels qui peuvent survenir en utilisant des stratégies de finale traditionnels. En plus de la cocaïne RPC, qui est décrit ici, la micro-injection de rAAV-Cre dans le cerveau de souris floxés d&#39;évaluer le rôle des gènes spécifiques peuvent être appliquées ubiquitaire de paradigmes comportementaux qui impliquent des phases distinctes, y compris l&#39;auto-administration et de sensibilisation psychomoteur. Par exemple, notre laboratoire a utilisé la technologie rAAV-Cre pour étudier le rôle de Ca v 1.2 L de type canaux Ca 2 + de la cocaïne psychomoteur sensibilisation 14. Plus précisément, VAAr-Cre a été micro dans le noyau accumbens (NAC) de souris avec le gène codant Ca v 1.2 floxé, pour démontrer que Ca v </sub&gt; 1.2 agissant dans cette région médiateur de la phase d&#39;expression de la sensibilisation psychomoteur 14,15. Cependant, la stratégie VAAr-Cre ne peut pas être utilisé si des souris avec un gène floxé d&#39;intérêt n&#39;existent pas, comme cela a été notre expérience lors de l&#39;évaluation du rôle de Ca v 1.3 L de type canaux Ca 2 + dans la sensibilisation psychomoteur. Par conséquent, une limitation de l&#39;utilisation de rAAV-Cre se présente si les souris conditionnelles n&#39;existent pas pour un gène d&#39;intérêt particulier. Cependant, rAAVs qui siRNA Express peut être utilisé à des gènes cibles de knockdown, comme nous l&#39;avons fait pour examiner le rôle de Ca v 1.3 canaux 14,15. Microinjection VAAr-Cre dans des régions discrètes du cerveau de souris floxés puis de les tester dans le paradigme du RPC permet d&#39;enquête sur les gènes spécifiques qui interviennent dans les différentes phases du comportement addictif-comme et où ils agissent. L&#39;utilisation de ce paradigme a contribué à notre compréhension de la façon dont l&#39;administration répétée de cocaïne en essence détourne le brains circuit de la récompense provoquant des changements inadaptés dans les voies de transduction du signal moléculaire et l&#39;expression des gènes qui conduisent à l&#39;état de dépendance 1,16,17.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference activity chambers</td>
			<td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA</td>
			<td>MED-CPP-MS</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic alignment system for mouse</td>
			<td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td>
			<td>model 900</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton Company, Reno, Nevada, USA</td>
			<td>7634-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-Cre-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7004</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference

Microinjection viraux adéno-associé vecteurs recombinants (rAAV) exprimant la recombinase Cre dans les régions du cerveau de souris distinctes sélectivement les gènes de finale de l&#39;intérêt permettent une régulation temporelle et régionale spécifique de délétion du gène, par rapport aux méthodes existantes. Alors que la suppression conditionnelle peut également être obtenue par des souris d&#39;accouplement qui expriment la recombinase Cre sous le contrôle de promoteurs de gènes spécifiques avec des souris porteuses d&#39;un gène floxé, la micro-injection stéréotaxique permet de cibler des zones discrètes du cerveau à des moments déterminés expérimentateur d&#39;intérêt. Dans le cadre de la cocaïne préférence de place conditionnée, et d&#39;autres paradigmes comportementaux de la cocaïne comme l&#39;auto-administration ou de sensibilisation psychomoteur qui peuvent impliquer phases de réintégration retrait, l&#39;extinction et / ou, cette technique est particulièrement utile pour explorer la contribution unique de gènes cibles de ces distinct phases de modèles comportementaux de la plasticité induite par la cocaïne. Plus précisément,cette technique permet l&#39;ablation sélective des gènes cibles lors des phases distinctes d&#39;un comportement à tester leur contribution au comportement dans le temps. En fin de compte, cette compréhension permet de thérapies plus ciblées qui sont mieux à même de s&#39;attaquer aux facteurs de risque les plus puissants qui se présentent au cours de chaque phase du comportement addictif.

RPC Après l&#39;exécution RPC sur des souris microinjectés, il faut vérifier que la cohorte de contrôle-injecté (rAAV-GFP) chez la souris ont normalement acquis préférence pour la chambre drogue apparié (Figure 1A, 1B). Les souris sont considérés comme ayant acquis préférence pour une chambre particulière lorsque préférence de cocaïne (temps passé dans la chambre de la cocaïne-appareillé moins de temps passé dans la chambre saline-apparié) est significativ...

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Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Cet article décrit comment micro-injection de vecteurs viraux dans le cerveau de la souris, puis tester dans un endroit paradigme de préférence conditionné qui comprend une phase d&#39;acquisition, l&#39;extinction et la réintégration.

La micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux exprimant la recombinase Cre pour étudier le rôle des gènes cibles de cocaïne préférence de place conditionnée

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

stereotaxic-microinjection-viral-vectors-expressing-cre-recombinase

Research

JoVE Journal

Behavior

18.5K vues.  Weill Cornell Graduate School of Biomedical Sciences. Cet article décrit comment micro-injection de vecteurs viraux dans le cerveau de la souris, puis tester dans un endroit paradigme de préférence conditionné qui comprend une phase d'acquisition, l'extinction et la réintégration.

Vidéo: Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an entire gene expression pathway by inducing destruction and/or inhibiting translation of these targets. Several miRNAs play key roles in maintaining neuronal structure and function and in higher-level brain functions, and methods are sought for manipulating their levels for exploring these functions. Here, we present a direct in vivo method for examining the cognitive consequences of enforced miRNAs excess in mice by stereotactic injection of miRNA-encoding virus particles. Specifically, the current protocol involves injection into the hippocampal CA1 region, which contributes to mammalian memory consolidation, learning, and stress responses, and offers a convenient injection site. The coordinates are measured according to the mouse bregma and virus perfusion is digitally controlled and kept very slow. After injection, the surgery wound is sealed and the animals recover. Lentiviruses encoding silencers of the corresponding mRNA targets serve to implicate the specific miRNA/target interaction responsible for the observed effect, with na&iuml;ve mice, mice injected with saline and mice injected with "empty" lentivirus vectors as controls. One month post-injection, the animals are examined in the Morris Water Maze (MWM) for assessing their navigation learning and memory abilities. The MWM is a round tank filled with colored water with a small platform submerged 1 cm below the water surface. Steady visual cues around the tank allow for spatial navigation (sound and the earth's magnetic field may also assist the animals in navigating). Video camera monitoring enables measuring the route of swim and the time to find and amount the platform. The mouse is first taught that mounting the hidden platform offers an escape from the enforced swimming; it is then tested for using this escape and finally, the platform is removed and probe tests examine if the mouse remembers its previous location. Repeated tests over several consecutive days highlight improved performance of tested mice at shorter latencies to find and mount the platform, and as more direct routes to reach the platform or its location. Failure to show such improvement represents impaired learning and memory and/or anxiety, which may then be tested specifically (e.g. in the elevated plus maze). This approach enables validation of specific miRNAs and target transcripts in the studied cognitive and/or stress-related processes.

MicroRNAs have significant roles in brain structure and function. Here we describe a method to enforce hippocampal miRNA over-expression using stereotactic injection of an engineered miRNA-expressing lentivirus. This approach can serve as a relatively rapid way to assess the in vivo effects of over-expressed miRNAs in specific brain regions.

Injection stéréotaxique de micro-ARN exprimant lentivirus à la souris hippocampe CA1 Région et l&#39;évaluation du résultat comportemental

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

Recherche

Sciences du comportement

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

Une procédure d&#39;étudier l&#39;effet de la restriction alimentaire prolongée sur l&#39;héroïne cherche à rats abstinents

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to this multifactorial disorder is the consumption of a high fat diet, a behavior that has been shown to increase both caloric intake and body fat content. However, the elements regulating preference for high fat food over other foods remain understudied.
To overcome this deficit, a model to quickly and easily test changes in the preference for dietary fat was developed. The Fat Preference model presents rats with a series of choices between foods with differing fat content. Like humans, rats have a natural bias toward consuming high fat food, making the rat model ideal for translational studies. Changes in preference can be ascribed to the effect of either genetic differences or pharmacological interventions. This model allows for the exploration of determinates of fat preference and screening pharmacotherapeutic agents that influence acquisition of obesity.

Dietary fat content influences both energy intake and body fat composition in mammals. By examining rats&#8217; preference for high fat food in a series of choice experiments, it is possible to test genetic differences and pharmacological interventions on their preference for high fat food.

Préférence Fat: A Novel modèle du comportement alimentaire chez le rat

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

Une procédure pour l&#39;observation de renouvellement induite contexte-de pavlovien conditionné alcool comportement de recherche chez le rat

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as appropriate models, partly because the response to behaviorally relevant stimuli and the circuitry parsing stimulus-action outcomes is astonishingly similar between humans and rodents. In studying molecular substrates of complex behaviors, the microinjection of reagents that modify, augment, or silence specific systems is an invaluable technique. However, it is crucial that the microinjection site is precisely targeted in order to aid interpretation of the results. We present a method for the manufacture of surgical implements and microinjection needles that enables accurate microinjection and unlimited customizability with minimal cost. Importantly, this technique can be successfully completed in awake rodents if conducted in conjunction with other JoVE articles that covered requisite surgical procedures. Additionally, there are many behavioral paradigms that are well suited for measuring motivation. The progressive ratio is a commonly used method that quantifies the efficacy of a reinforcer to maintain responding despite an (often exponentially) increasing work requirement. This assay is sensitive to reinforcer magnitude and pharmacological manipulations, which allows reinforcing efficacy and/ or motivation to be determined. We also present a straightforward approach to program operant software to accommodate a progressive ratio reinforcement schedule.

Rodents are an appropriate model to investigate the molecular substrates of behavior and complex psychiatric disorders. Brain microinjection in awake rodents can be used to elucidate disease substrates. An efficient and customizable brain microinjection method as well as the execution of an operant paradigm that quantifies motivation is presented.

Le cerveau de rongeurs microinjection pour l&#39;étude de substrats moléculaires de Motivé Comportement

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Évaluation de la sensibilisation comportementale induite par la cocaïne et de préférence de place conditionnée chez la souris

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

Placez et l&#39;apprentissage de réponse à l&#39;Open-champ Tour Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to acquire a conditioned place preference in a drug-paired compartment, and after the post-conditioning test, they perform several sessions to extinguish the established preference. The CPP permits the evaluation of the conditioned rewarding effects of drugs related to environmental cues. Then, the extinguished CPP can be robustly reinstated by the non-contingent administration of a priming dose of the drug, and by exposure to stressful stimuli. Both methods will be explained here. When the animal reinitiates the behavioral response, a reinstatement of the conditioned reward is considered to have taken place.
The main advantages of this protocol are that it is non-invasive, inexpensive, and simple with good validity criteria. In addition, it allows the study of different environmental manipulations, such as stress or diet, which can modulate relapse into drug seeking behaviors. However, one limitation is that if the researcher aims to explore the motivation and primary reinforcing effects of the drug, it should be complemented with self-administration procedures, as they involve operant responses of animals.

This protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse. This procedure permits the measurement of relapse in laboratory animals, considering the impact of drug-associated environmental cues as craving and relapse in abstaining addicts is currently the focus of drug-abuse treatment programs.

Rétablissement de la recherche de drogue chez les souris en utilisant le paradigme de préférence de Place conditionnée

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Un protocole de préférence de Place conditionnée pour la mesure de l’Incubation des envies chez les Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Assessing the Coherence of Parents' Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with parents. This paper focuses on such a method, namely Five-Minute Speech Sample-Coherence (FMSS-Coherence). In this method, a parent is asked to speak for five uninterrupted minutes about her/his child and their relationship. The resulted narrative is coded for coherence, namely the extent to which the parent provides&#160;in the narrative&#160;a clear, consistent, multidimensional and well-supported portrayal of the child. FMSS-Coherence is based on attachment research that shows that the coherence of parents&#8217; narratives is indicative of the quality of the parent-child relationship and child adjustment. It overcomes the limitations of attachment narrative measures which are typically labor intensive. FMSS-Coherence is less nuanced than extant attachment narrative measures. Yet, studies of families from different cultural backgrounds, across different child ages and in the context of typically developing children as well as children with special needs suggest that coherence can be reliably evaluated using the FMSS procedure. Furthermore, parents&#8217; FMSS-Coherence is associated with parenting quality and children&#8217;s socio-emotional adjustment. Thus, it holds promise for researchers and practitioners who seek a relatively time- and cost-effective method for assessing the coherence of parents&#8217; narratives regarding their child.

Assessing the Coherence of Parents&#039; Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

This paper introduces a method for assessing the coherence of parents' short narratives regarding their child and their relationship using the five-minute speech sample procedure.

Évaluer la cohérence des récits courts des parents concernant leur enfant à l'aide de la procédure d'échantillonnage de la parole de cinq minutes

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with ...