This work received support through Deutsche Forschungsgemeinschaft SFB 1002 (subprojects A05 and B05 to S.E.L.) and KFO 155 (subproject 4 to S.E.L.), a Halbach Foundation award to S.E.L. supporting E.W.; a grant from the German Cardiac Society to S.B.; and a DAAD exchange program supporting T.K. as visitor at the University of Maryland. The research leading to these results has received funding from the European Community&#8217;s Seventh Framework Program FP7/2007-2013 under grant agreement No. HEALTH-F2-2009-241526, EUTrigTreat (to S.E.L.). S.E.L. is a principal investigator of the German Center of Cardiovascular Research (DZHK).

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The authors declare that no conflict of interest exists.

Dans les cellules musculaires striées en bonne santé, les structures de membrane tubulaires avec des orientations «transversales» (tubules T) perpendiculaire à l&#39;axe principal de la cellule sont abondants. Par conséquent, T-tubules ont été caractérisés comme des prolongements continus de la cellule de muscle principal &quot;latéral&quot; membrane de surface (sarcolemme), qui pénètrent profondément le cytosol vers le centre de la cellule. Le rôle physiologique de tubules T continu avec la membrane de surface externe est le couplage électrique rapide des compartiments intracellulaires isolées formées par SER organelles domaines de contact à travers le volume relativement important de cellules de muscle cardiaque par couplage de proximité nanométrique de type L de tension activé par le Ca2 + canaux (Cav1.2) courant entrant (I Ca) activation des récepteurs de la ryanodine adjacente (RyR2) SER Ca2 + de presse. Dans les myocytes ventriculaires (VM), les contacts de la membrane non continues («jonctions») entre les domaines de jonction de SER et T-tubules sont pensés pour contrôler des milliers de particuliers Ca2 + intracellulaire libération nanodomaines dans chaque cellule 1. Pour n&#39;importe quel domaine de contact donnée, les portions juxtaposées de la membrane de chaque tube en T et le périphérique (jonction) SER environ 15 nm sont proches les uns des autres, d&#39;où définis comme nanodomaine. Ainsi, de très petits sous-espaces cytoplasmiques individuels sont séparés qui permettent des comportements des compartiments cellulaires autonome quasi. Quand un potentiel d&#39;action entrant active les canaux Cav1.2 dans les tubules T de machines virtuelles, une relativement faible Ca2 + courant entrant va augmenter rapidement le sous-espace concentration de Ca2 + [Ca2 +] S dans le attoliter nanodomaine taille 1. Ensuite, l&#39;augmentation de S [2 + Ca] 2 + Ca -gated active les récepteurs de la ryanodine (RyR2) à l&#39;intérieur du nanomètre dans la proximité de la jonction de la membrane SER juxtaposées, et ce procédé de couplage se produit dans tout coupler électriquementd myocytes nanodomaines. RyR2s surviennent denses grappes multi-canaux avec une stoechiométrie estimée à 1 canal Cav1.2 5-10 canaux RyR2 2. Depuis le SER-à-cytosol [Ca 2 +] gradient est très raide (rapport 10 4: 1) et RyR2s fonction que de haute conductance Ca2 + des canaux de libération en grappes fonctionnellement couplés, des résultats d&#39;activation RyR2 dans un grand quantitativement Ca2 + La version actuelle de T-tubule couplés domaines de SER de jonction de plus en plus sous-espace locale [Ca2 +] S à 100 um ou plus dans 1-2 ms 3,4. Ce comportement cardiaque d&#39;amplification du signal est également appelé Ca2 + induite Ca la libération (CICR). Dans l&#39;ensemble, T-tubules sont des structures membranaires essentielles qui activent rapidement les signaux de libération de Ca à travers des contacts nanodomaine SER jonction et CICR ​​échelle cellulaire lors de l&#39;excitation-contraction (CE) accouplement. En plus de T-tubules, tube axials (A-tubules) avec une orientation sensiblement parallèle à l&#39;autre axe principal de la cellule (longitudinaux) ont été documentées par microscopie électronique (EM), confocale et études de microscopie deux photons. Par exemple, un réseau continu de grande cellule de A-tubules entre myofibrilles interconnectés avec T-tubules près sarcomériques Z-lignes a été démontré par des traceurs extracellulaires et EM imagerie de Guinée porc fixe VM 5. Utilisation extracellulaire coloration à la fluorescéine de dextran liés et vivre imagerie 2-photons de rat machines virtuelles, un réseau de tubules 3D réticulaire complexe a été visualisée constitué de ~ 60% tubules T et ~ 40% A-tubules 6. Cette étude a non seulement conduit à la visualisation 3D des abondantes A-tubules, mais aussi à la prise de conscience que la coupe pour EM visualisation est intrinsèquement limité pour l&#39;analyse des réseaux de membranes complexes et dynamiques comme le système de tube transversal axial (TATS). Par conséquent, l&#39;imagerie des cellules vivantes confocale des membranes TATS directement tachée de di-8-ANNEPS a été développé. Si la cellule en directles réseaux de TATS sont analysés par transformation de Fourier, l&#39;apparence régulière des composants dans l&#39;espace à proximité des lignes de sarcomères Z T-tubule est réfléchie par le spectre de puissance à partir d&#39;un ensemble de signaux striés région 7. Cette stratégie d&#39;analyse indirect a été utilisé pour détecter les changements régionaux dans l&#39;ensemble des cellules constituant TATS régularité dans des modèles de maladies 7. Par exemple, shRNA médiation Junctophilin-2 knock-down causé l&#39;insuffisance cardiaque et l&#39;insuffisance de la protéine spécifique de l&#39;isoforme ont abouti à la réorganisation T-tubule avec nanodomaine Ca2 + dysfonction version 8. Nous avons récemment étendu l&#39;analyse des réseaux de la membrane TATS par des approches quantitatives directes et en outre en direct microscopie super-résolution de la cellule de composants TATS individuels chez la souris à l&#39;aide de machines virtuelles stimulé l&#39;épuisement d&#39;émission (STED) de nanoscopie 9. Résolution de l&#39;image nanométrique permis pour l&#39;analyse directe d&#39;éléments plus petits de TATS individu, qui se rapproche d&#39;une distribution de 50:50 transversalecontre orientations des tubules axiaux, confirmant quantitativement deux composants TATS abondantes encore orientés différemment individuels dans les cœurs de souris saines 9. Ces stratégies seront décrites plus loin dans la partie protocole ci-dessous. Bien que le rôle physiologique des composants A-tubule abondantes dans le coeur adulte est restée énigmatique, des études ont documenté EM structures membranaires SER associé à un tubules suggérant endogène Ca2 + nanodomaines de libération en Guinée porc et de rat VM 5,10. Analyse confocale de Cav1.2 et RyR2 trouvé un haut degré de colocalisation au niveau des jonctions A-tubule 10. Depuis environ 20% de Ca2 + spontanées des étincelles chez le rat VM est originaire relativement loin de stries Z-ligne où T-tubules se produisent généralement, un argument a été que nanodomaines A-tubule associés peuvent en effet exister et de fonctionner comme Ca2 + sites de libération 11,12. Fait intéressant, la formation des tubules T-oc et maturationroquets seulement après la naissance et est parallèle à la croissance des cellules cardiaques, par exemple, à travers la germination des invaginations précurseur sarcolemmiques à P5 et immature ramifiés assemblées réseau TATS à P10 chez la souris 13. Il semble que Junctophilin-2 est particulièrement important pour postnatal maturation de réseau TATS depuis shRNA knock-down empêcher l&#39;ancrage des membranes T-tubules de jonctions SER conduisant à Ca2 + à libération retardée et de l&#39;organisation de TATS pathologique compatible avec les architectures immature A-tubule dominées par VM 13. Ces observations peuvent finalement conduire à la preuve de concept que T-tubules forment par des processus invagination de la membrane, tandis que A-tubules peuvent se transformer grâce à des mécanismes intracellulaires supplémentaires ou même d&#39;autres 14. Caractérisation de tatouages ​​modifications de la membrane dans la maladie cardiaque est devenue un domaine de recherche important pour les questions physiopathologiques. Les rapports initiaux dans un modèle de coeur failu induit une stimulation chienre a montré une perte de tubules T et le courant Cav1.2 (I Ca) 15. Un modèle porcin de cardiomyopathie ischémique a montré une diminution des densités de T-tubule et une synchronie réduit de Ca2 + intracellulaire de presse 16. En utilisant un modèle de rat spontanément hypertendu (SHR) de l&#39;insuffisance cardiaque, une perte de tubules T est associée à couplage de nanodomaine réduite de Cav1.2 et RyR2 par le mécanisme proposé de &quot;RyR2 orphelins» 7. Une perte de tubules T a également été démontré dans des machines virtuelles à partir d&#39;échantillons humains cardiomyopathie ischémique, dilatées, hypertrophiques et 17. En outre, une augmentation de la A-tubules a été signalé dans des coupes de tissus de cardiomyopathie dilatée humaine 18. Après un infarctus du myocarde, nous avons montré un mécanisme différentiel de réorganisation TATS chez la souris VM à une diminution significative de T-tubules contrairement aux augmentations des composants A-tubule 9. Surtout, contraste amélioré de membrane locale réalisée par superre de cellules vivantessolution STED microscopie a permis une analyse quantitative détaillée des composants par des mesures directes, qui ont montré une prolifération importante de l&#39;A-tubules avec l&#39;augmentation globale de la longueur du réseau de TATS et de branchement complexité 9. En outre, il a été montré que l&#39;entraînement physique peut inverser T-tubule remodelage chez le rat après un infarctus du myocarde 19 et que la thérapie de resynchronisation cardiaque peut conduire à inverser la rénovation des tubules T chez les chiens atteints auriculaire tachypacing insuffisance cardiaque induite par 20. Dans l&#39;ensemble, les études à la fois dans les interventions thérapeutiques potentiels humains malades et des animaux ainsi que les machines virtuelles seront sans doute bénéficier de procédures d&#39;isolement cellulaire de haute qualité et des stratégies d&#39;analyse quantitatives détaillées comme indiqué dans le protocole et les résultats des sections ci-dessous. En outre, comme l&#39;a démontré récemment surface latérale contre TATS trafic membranaire de canaux KATP isoformes 21, il est important de considérer m auriculaireyocytes (AMS) comme biologiquement distincte ainsi que le modèle de cellule cardiaque comparative versus machines virtuelles. T-tubules ont été récemment documentés chez les ovins et les AM humaine 22. Les données actuelles suggèrent que quelques tubules-T existent dans les cellules AM et généralement dans les grands mammifères comme des moutons et des humains, mais pas chez les petits rongeurs 23. Contrairement aux machines virtuelles, MA en Ca2 + intracellulaire libération semble se produire à partir de la multiplication de la surface de la cellule par diffusion vers le centre de la cellule marquée qui se traduit par Ca 2 + spatiale et temporelle des gradients de 23. Dans ce cadre, il semble important d&#39;élucider les mécanismes de Ca2 + intracellulaire instabilité des formes de maladies communes de signalisation tels que la fibrillation auriculaire 24. En résumé, à la fois l&#39;isolement cellulaire AM et VM et chacun pour un cœur en santé et malades sont couramment utilisés protocoles. Seulement si l&#39;isolement cellulaire est fait correctement à en juger par la documentation microscopique de la qualité de cellule suffisante, les échantillons AM et VM doivent être carried avant pour l&#39;analyse quantitative de TATS. En conséquence, les sections de protocole suivantes est essentiellement dépendante de la cellule de haute qualité isolats de souris ou d&#39;autres espèces, suivie par microscopie de cellules vivantes pour analyser les membranes intactes TATS. Comme indiqué précédemment, la caractérisation des membranes TATS est un domaine de recherche difficile avec une propension pour fixation et de préparation des artefacts 6, les changements de la membrane en raison de modifications osmotiques, et les limites de résolution de la microscopie optique conventionnelle 9. Nous notons que les protocoles sur l&#39;état de l&#39;art des dernières pour l&#39;isolement de MA humaines pour Ca2 + imagerie et de patch-clamp et de rat machines virtuelles pour la culture cellulaire ont été publiés dans cette revue 25,26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1552">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Chemicals and enzymes</td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td style="width:759px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">2,3-Butanedione monoxime</td>
			<td style="width:376px;">Sigma-Aldrich, Munich, Germany</td>
			<td style="width:113px;">B0753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Bovine calf serum</td>
			<td style="width:376px;">Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:113px;">SH30073</td>
			<td>Triple 0.1 &#181;m sterile filtered.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">CaCl2</td>
			<td style="width:376px;">Sigma-Aldrich, Munich, Germany</td>
			<td style="width:113px;">21115</td>
			<td style="width:759px;">Diluted 1:10 in MQ water to obtain 100 mM CaCl2 stock concentration.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Collagenase type II</td>
			<td style="width:376px;">Worthington via Cell Systems, Troisdorf, Germany</td>
			<td style="width:113px;">on request</td>
			<td>Enzymatic activity depends on individual collagenase batches. Collagenase II&#160; and other enzyme activities (Caseinase, Clostripain, Tryptic) can be assessed in the &#34;collagenase lot selection tool&#34;. Determine cell yield and quality individually for each new lot of collagenase.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Glucose</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">HN06.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Heparin</td>
			<td style="width:376px;">Rotexmedica, Trittau, Germany</td>
			<td style="width:113px;">PZN-03862340</td>
			<td>Diluted in 0,9 % NaCl and injected subcutaneuosly in abdominal skin.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">HEPES</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">9105.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Forene 100% (V/V)</td>
			<td style="width:376px;">Abbott, Libertyville, IL, USA</td>
			<td style="width:113px;">B506</td>
			<td>Active agent: isoflurane, 250 ml. Use approximately 2 Vol% in air/oxygen dispenser instrument.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">KCl</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">6781.3</td>
			<td style="width:759px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">3904.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Laminin (2 mg/ml)</td>
			<td style="width:376px;">BD Biosciences, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:113px;">354232</td>
			<td>Lamination is described under step 2.1.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">MgCl2 &#183; 6 H2O</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">2189.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">MgSO4 &#183; 7 H2O</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">8283.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Na2HPO4 &#183; 2 H2O</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">4984.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">HN01.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Taurin</td>
			<td style="width:376px;">Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td style="width:113px;">4721.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;"></td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Dyes</td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Di-8-ANEPPS</td>
			<td>Molecular Probes, Life Technologies, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:113px;">D-3167</td>
			<td>Stock solution 2 mM in DMSO</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:376px;">Sigma-Aldrich, Munich, Germany</td>
			<td style="width:113px;">T8154</td>
			<td>Trypan blue is gently mixed 1:1 via tip-cut 1 ml plastic pipette with cell suspension prior to cell counting in Neubauer cytometer.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;"></td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Langendorff perfusion setup</td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Circulation thermostat</td>
			<td style="width:376px;">Lauda, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>Please refer to Louch et al. (JMCC 2011). Heat up thermostat und buffers in perfusion tubing to 37 &#176;C 15 min prior to use.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Flexible silicone tubing Tygon for peristaltic pump</td>
			<td style="width:376px;">VWR, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:113px;">224-2252</td>
			<td rowspan="2">Tubing needs to be changed regularly.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Flexible silicone tubing Tygon for thermostat</td>
			<td style="width:376px;">VWR, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:113px;">228-4340</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:304px;">Heating coil surroundung perfusion tubing</td>
			<td style="width:376px;">Rettberg, G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td style="width:113px;">custom-made</td>
			<td style="width:759px;">Heating coil and tubing needs to be cleaned thoroughly via MQ water after using. Do not use detergents. Glass components should be bathed regularly&#160; in 10 mM NaOH overnight.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:376px;">Ismatec, Wertheim, Germany</td>
			<td style="width:113px;">ISM830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Three way stop cock Discofix C Luer Lock 10 cm</td>
			<td style="width:376px;">Braun, Melsungen, Switzerland</td>
			<td style="width:113px;">16500C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Three way stop cock Discofix 3SC</td>
			<td style="width:376px;">Braun, Melsungen, Switzerland</td>
			<td style="width:113px;">4095146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;"></td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Instruments</td>
			<td style="width:376px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">42 mm glass coverslips</td>
			<td style="width:376px;">Menzel Gl&#228;ser via Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:113px;">on request</td>
			<td>0.13 - 0.16 mm thickness</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Cannula 21G</td>
			<td style="width:376px;">Becton, Dickinson and Company, Franklin Lake, NY, USA</td>
			<td style="width:113px;">304432</td>
			<td>Cut to a length of ~ 5 mm, roughened with sandpaper.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Coverslips for Neubauer cytometer 24 x 24 mm</td>
			<td style="width:376px;">Menzel Gl&#228;ser via Thermo Scientific, Schwerte, Germany</td>
			<td style="width:113px;">on request</td>
			<td>0.38 - 0.42 mm thickness</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Graefe forceps, 0.5 mm tips, slight curve</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11151-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">LSM 710 NLO</td>
			<td style="width:376px;">Carl Zeiss, Jena, Germany</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>63x 1.4 NA oil objective</td>
		</tr>
		<tr height="124">
			<td height="124" style="height:124px;width:304px;">Neubauer improved cytometer</td>
			<td style="width:376px;">Labor Optik, Friedrichsdorf, Germany</td>
			<td style="width:113px;">1100000</td>
			<td style="width:759px;">Counting procedure: Wipe cytometer and coverslip provided with the counting chamber with 70 % ethanol. Press coverslip gently on the counting chamber so that the two glass surfaces are in contact and Newton&#39;s rings can be observed. Subsequently, 10 - 20 &#181;l cell suspension can be applied to the edge of the coverslip to be sucked into the void by capillary action. Count the intact vs. defect myocytes using the squares of the cytometer grid which reflects 100 nl. Repeat counting procedure on the second grid provided on the cytometer. Calculate the density of cells in your original cell suspension by taking account of any dlutions and counting shortcuts.</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">POC-R2 Imaging Chamber</td>
			<td style="width:376px;">Pecon, Erbach, Germany</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>Cell suspension volume: 800 &#181;l; desired plating density: ~ 1000 AM and ~ 10,000 VM</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Spring scissors, 8 mm blades straight, blunt</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td style="width:113px;">15025-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Student dumont #7 forceps, inox</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Student iris scissors, curved, 11.5 cm</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>91461-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Student iris scissors, straight, 11.5 cm</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">Student surcigal scissors, straight, sharp, 12 cm</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>91402-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:304px;">Tissue forceps, 1x2 teeth, slim, 10 cm</td>
			<td style="width:376px;">Fine Science Tools, Heidelberg, Germany</td>
			<td>11023-10</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of tubular membrane networks in cardiac myocytes from atria and ventricles

In cardiac myocytes a complex network of membrane tubules - the transverse-axial tubule system (TATS) - controls deep intracellular signaling functions. While the outer surface membrane and associated TATS membrane components appear to be continuous, there are substantial differences in lipid and protein content. In ventricular myocytes (VMs), certain TATS components are highly abundant contributing to rectilinear tubule networks and regular branching 3D architectures. It is thought that peripheral TATS components propagate action potentials from the cell surface to thousands of remote intracellular sarcoendoplasmic reticulum (SER) membrane contact domains, thereby activating intracellular Ca2+ release units (CRUs). In contrast to VMs, the organization and functional role of TATS membranes in atrial myocytes (AMs) is significantly different and much less understood. Taken together, quantitative structural characterization of TATS membrane networks in healthy and diseased myocytes is an essential prerequisite towards better understanding of functional plasticity and pathophysiological reorganization. Here, we present a strategic combination of protocols for direct quantitative analysis of TATS membrane networks in living VMs and AMs. For this, we accompany primary cell isolations of mouse VMs and/or AMs with critical quality control steps and direct membrane staining protocols for fluorescence imaging of TATS membranes. Using an optimized workflow for confocal or superresolution TATS image processing, binarized and skeletonized data are generated for quantitative analysis of the TATS network and its components. Unlike previously published indirect regional aggregate image analysis strategies, our protocols enable direct characterization of specific components and derive complex physiological properties of TATS membrane networks in living myocytes with high throughput and open access software tools. In summary, the combined protocol strategy can be readily applied for quantitative TATS network studies during physiological myocyte adaptation or disease changes, comparison of different cardiac or skeletal muscle cell types, phenotyping of transgenic models, and pharmacological or therapeutic interventions.

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Analysis of Tubular Membrane Networks in Cardiac Myocytes from Atria and Ventricles

Dans les myocytes cardiaques, les structures membranaires tubulaires forment des réseaux intracellulaires. Nous décrivons les protocoles pour i) l&#39;isolement des myocytes du cœur de souris, y compris le contrôle de qualité, ii) la coloration de cellules vivantes pour la microscopie de fluorescence état-of-the-art optimisé, et iii) l&#39;analyse d&#39;image directe de quantifier la complexité des composants et la plasticité de la membrane intracellulaire réseaux.

Analyse de la membrane tubulaire Networks cardiaque myocytes de oreillettes et les ventricules

In cardiac myocytes a complex network of membrane tubules - the transverse-axial tubule system (TATS) - controls deep intracellular signaling functions. ...

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Bioengineering

20.4K vues.  Heart Research Center Goettingen.  Dans les myocytes cardiaques, les structures membranaires tubulaires forment des réseaux intracellulaires. Nous décrivons les protocoles pour i) l'isolement des myocytes du cœur de souris, y compris le contrôle de qualité, ii) la coloration de cellules vivantes pour la microscopie de fluorescence état-of-the-art optimisé, et iii) l'analyse d'image directe de quantifier la complexité des composants et la plasticité de la membrane intracellulaire rése...