The authors would like to thank Mark Bishop, Mathew Zverev, Victoria Marsh-Durban, Adam Blackwood and Sylvie Robine. This work was funded by a programme grant from Cancer Research UK.

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The authors have nothing to disclose.

En utilisant des souris transgéniques de Cre-lox conditionnelles à disséquer la fonction des gènes et des cellules est une approche couramment utilisée. Ces modèles ont été utilisés avec succès dans l&#39;intestin pour identifier et caractériser les cellules souches 2,4-6 et de comprendre leur rôle dans la maladie 25. Pour exploiter pleinement ces modèles requiert une caractérisation complète du système pour permettre aux données d&#39;être interprété correctement. Une compréhension complète de ces systèmes est difficile à réaliser en raison de gènes étant rarement spécifiques à un type de cellule d&#39;isolement ou de l&#39;emplacement, un manque de connaissances biologiques et l&#39;inefficacité des systèmes utilisés pour induire l&#39;expression Cre. Les méthodes décrites ici montrent comment nous surmontons ces questions par le biais de la conception expérimentale et l&#39;application des connaissances existantes. Bien que nous avons utilisé ces méthodes pour répondre à une question spécifique de recherche les techniques présentées ici sont génériques et peuvent être exploitées pour toute recherche portant sur la muriintestin ne. Préparation du tissu intestinal L&#39;étape cruciale pour assurer des résultats robustes est la récolte et la transformation du tissu, qui doit être traité en temps opportun des protocoles de modalités et la fixation strictement respectés. Comme la quasi-totalité des questions importantes peuvent être attribués à l&#39;aval des artefacts liés à l&#39;assèchement des tissus sur et / ou la fixation incomplète. Le timing est crucial pour empêcher la dégradation de l&#39;architecture tissulaire et / ou des acides nucléiques et des protéines. Fixation incomplète ou trop zélé peut entraîner la perte de la résolution histochimique. Fixation incomplète en raison de temps ou sections trop épaisse pour permettre la pénétration du fixateur peut entraîner la perte de la résolution dans les cryptes intestinales qui peuvent être observés comme une «marque de marée» sur l&#39;analyse IHC insuffisante. En outre, il est crucial que la fixation ne se prolonge pas trop longtemps, comme β-caténine nucléaire peut diffuser hors du noyau à moins immédiatement proétat brut et la cire incorporé après la fixation du formol. Rôle des cellules de Paneth dans la niche ISC Les données présentées ici montrent effectivement l&#39;importance des cellules de Paneth dans la crypte de régénération dans l&#39;intestin de l&#39;adulte en cas de perte ISC. Cependant, il restait la possibilité que Ah-cre épargne une population de CSI que les objectifs de T2 vil-Cre-ER. Tian et al. 26 élégamment démontré que les CSI hi LGR5 sont remplacés par une population de LGR5 lo CSI de réserve. Il semble maintenant probable que ces entrepreneurs indépendants sont épargnés dans le système Ah-cre en raison de la population de réserve ayant été identifié comme précurseurs de cellules de sécrétion 6,7. L&#39;importance de la cellule mûre Paneth au soutien de ces précurseurs de cellules sécrétoires en cas de besoin de revenir à un état ISC reste à répondre. Comme les cellules de Paneth constituent le jeSC niche 8 et jouer un rôle dans la régulation des réponses Icc à l&#39;apport calorique et l&#39;inflammation 28 27 il reste probable que leurs fonctions infirmières vont étendre à leurs propres précurseurs. Nouvelles approches et technologies pour modéliser efficacement du cancer colorectal humain La découverte de l&#39;ISC a conduit à l&#39;identification des gènes qui sont actuellement utilisés pour générer de nouveaux modèles de souris pour étudier les rôles des gènes et des cellules en biologie et les maladies intestinales, examiné par Clarke et al 9. Les seules limitations de cette technique est l&#39;identification des gènes à exprimer la protéine Cre. Actuellement CSI sont systématiquement étudiés en utilisant des souris transgéniques conditionnels basés sur le profil d&#39;expression génique LGR5. Les souris qui expriment Cre à partir du promoteur LGR5 ont été utilisées pour supprimer APC, le gène le plus fréquemment muté dans le cancer colorectal (CRC), Ce qui démontre l&#39;ISC que la cellule 25 d&#39;origine. Suppression sélective d&#39;autres gènes dans ces cellules CRC fournit un aperçu de progression de la maladie et la propagation par exemple. PTEN 29. En outre aperçu ISC fonction est extraite par l&#39;ablation de cellules exprimant spécifiquement LGR5 chez la souris en utilisant un récepteur de la toxine diphtérique humain (DTR) dans le gène frappé LGR5 26 locus. D&#39;autres stratégies utilisent le système Tet-O qui permet l&#39;expression réversible cours des 30 protéines mutantes. En utilisant ces outils pour modifier gène (s) dans différentes cellules 31 et 32,33 emplacements est utilisée pour comprendre comment le cancer initier, de progrès et métastaser 34. Alternativement mutagenèse en utilisant le système de transposon beauté de couchage est d&#39;identifier de nouveaux pilotes de CRC. La poursuite du développement des souris, des techniques et des stratégies de modification génétique continue de développer des modèles plus pertinents patients. Nouveau modes ont été développés pour la caractérisation des épithéliums et CSI intestinaux. Caractérisation du ratio de types de cellules epitheliales peuvent être obtenus en utilisant la cytométrie de flux basé sur l&#39;expression différentielle de 35 lectine et CD24. Potentiellement, le plus grand progrès dans la compréhension de la biologie ISC et leur rôle dans la maladie seront effectués en utilisant l&#39;ex vivo organoïde système de culture 36. Ce système permet CSI normales et malignes à la culture en 3D, où ils se répliquent et se différencient d&#39;une manière plus physiologiquement pertinent. Il est à espérer que ces tests permettront directe des médicaments sur des échantillons de patients in vitro, ouvrant la voie à la médecine personnalisée 37.

La surface luminale de l&#39;intestin des mammifères caractéristiques des unités de cryptes et de répéter doigt comme des projections, appelées villosités, qui font saillie dans la lumière. Cette surface est une feuille continue de l&#39;épithélium qui subit une auto-renouvellement complet environ tous les 3 - 4 jours 1. Ce tissu dynamique est supporté par une population de vélo rapidement les cellules souches (CSI; également connu en tant que base de crypte des cellules cylindriques), qui ont été initialement identifiés par leur expression du gène LGR5 2,3. Ces cellules existent dans un créneau spécialisé au fond des cryptes de Lieberkuhn. Initialement, la découverte que les CSI sont rapidement cyclisme est discordante avec l&#39;idée répandue selon laquelle une cellule souche est au repos dans la nature. Avant l&#39;identification de la LGR5 + ISC il a été postulé qu&#39;une population de cellules retenant l&#39;étiquette de repos à la position 4, par rapport à la base de la crypte, ont été les CSI 1. Des recherches récentes hcomme maintenant réconcilié ces observations en démontrant que surtout il ya une piscine du cyclisme équipotente ISC dans chaque crypte dont le sort sont régis par ses voisins de 4,5. Dans le cas où ils sont perdus ceux-ci peuvent être remplacés par des cellules au repos qui habituellement se sont engagés à la lignée de sécrétion, mais peut revenir à CSI si la population ISC est endommagé 6. Voisins ISC peuvent être soit des entrepreneurs indépendants ou leurs cellules filles. Les entrepreneurs indépendants produisent des cellules filles naïves qui se multiplient et se différencient en types de cellules spécialisées qui composent la feuille épithéliale qui tapisse les lumière intestinale 1. Le gobelet, entéroendocrine, entérocytes, touffe et les cellules M migrent vers le haut pour la surface luminale où ils fournissent diverses fonctions d&#39;absorption et réglementaires, cependant, les cellules de Paneth restent au fond de la crypte où ils existent entremêlées avec l&#39;ISC. Ces dernières années, il a été démontré qu&#39;une proportion de la daught naïfcellules er destinés à une lignée de sécrétion sont étiquette de repos en conservant les cellules LGR5 lo capables de revenir à un entrepreneur indépendant sur ​​blessure 6,7. En raison de son importance dans la régénération crypte une priorité a été placée sur la compréhension des interactions entre la CSI et ses voisins, en particulier les cellules de Paneth. Les cellules de Paneth jouent un rôle crucial dans la niche qui soutient la CSI 8. En plus des produits bactéricides les cellules de Paneth produisent des molécules qui activent les voies qui régissent le renouvellement ISC ou la différenciation de signalisation. Des études antérieures ont montré que le LGR5 + CSI ne pouvait exister quand ils pourraient concurrencer pour les signaux de niche essentiels fournis par leur fille cellules de Paneth 8. Ces études ont examiné le rôle des cellules de Paneth sur LGR5 normale + CSI et non pas dans une situation où ils sont endommagés et nécessitent reconstitution d&#39;une population LGR5 lo. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; Pour comprendre la biologie et le modèle maladie intestinale nous examinons le rôle fonctionnel de cellules et / ou des gènes en utilisant des modèles de souris transgéniques 9,10. Souvent, ces modèles utilisent la technologie cre-lox de modifier conditionnellement gène (s) 9,10. Cre (causes recombinaison) recombinase est une recombinase spécifique du site de la famille de l&#39;intégrase, isolé de bactériophage P1. Cre catalyse recombinaison spécifique de site entre défini 34 pb &#39; Lox P &#39;(locus χ de CrossOver P1) sites. Les souris sont génétiquement modifiées pour contenir des sites LoxP qui flanquent les régions d&#39;intérêt qui lors de l&#39;expression de la recombinase Cre sont excisés. Lier l&#39;expression du gène Cre à une cellule ou promoteur spécifique de développement permet de changement qui pourra être fait de façon spatiale 9,10, ce qui est particulièrement utile pour surmonter les mutations létales embryonnaires. Relierons encore davantage l&#39;expression Cre à une voie du récepteur,qui peuvent être activés artificiellement, permet des modifications temporelles. Grâce à cette technologie, nous inactivé le gène CatnB 11 dans l&#39;épithélium intestinal. β-caténine, le produit du gène CatnB, est un régulateur clé de la voie de signalisation Wnt canonique qui régit l&#39;homéostasie ISC. Deux études précédentes en utilisant cette stratégie a produit des résultats contradictoires 12,13. L&#39;étude par févr et al. 12, a montré une perte de cellules souches et de l&#39;homéostasie intestinale. Alors que l&#39;Irlande et al. 14 étude a signalé que suite à une réduction de la viabilité cellulaire de l&#39;axe crypte-villosité a été repeuplé à partir de cellules de type sauvage exprimant CatnB. La principale différence dans ces études était le promoteur utilisé pour exprimer la Cre dans l&#39;épithélium intestinal. La févr et al., Étude a utilisé le promoteur du gène de la villine lié au récepteur d&#39;œstrogène qui peut être activé par administration de tamoxifen (vil-Cre-ER T2) 15,16. En revanche Ireland et al., Utilise l&#39;élément promoteur du gène du cytochrome rat P450A1 (CYP1A1) pour diriger l&#39;expression Cre en réponse à la β-naphtoflavone xénobiotique (Ah-cre). Les caractéristiques de ces différents systèmes ont généré deux hypothèses pour expliquer ces différentes observations. La première est que CatnB plus efficacement supprimée dans la CAI en utilisant le système de T2 vil-Cre-ER par rapport à la Ah-cre, réduisant ainsi le nombre d&#39;entrepreneurs indépendants à des niveaux sous-repeuplement. Alternativement, il est dû à une différence de CatnB suppression dans la population de cellules différenciées. Le système T2 vil-Cre-ER cibles toutes les cellules épithéliales de la crypte et de villosités alors que le système Ah-cre ne cible les cellules non-Paneth de la niche ISC et la crypte. Ces systèmes constituent des outils idéaux pour examiner le comporIOR de l&#39;ISC et leur interaction avec les cellules de Paneth. Ici, nous présentons plusieurs protocoles détaillés basés sur la façon dont nous avons utilisé ces systèmes pour déterminer que les cellules de Paneth jouent un rôle crucial dans la médiation de la réponse à une lésion intestinale 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetate buffer</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 4.8ml 0.2M Acetic acid, 45.2ml 0.2M Sodium acetate &#38; 50ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/0400/PB17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic anhydride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic anhydride solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>2 M Acetic anhydride in 0.1 M triethanolamine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcian Blue ph2.5</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 500ml: 15ml acetic acid, 5g Alcian Blue &#38; 485ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-digoxigenin alkaline phosphatase conjugated antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab119345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B(beta)-Naphthoflavone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N3633</td>
			<td>BNF, inject without allowing the solution to cool too much as compound will drop out of solution. Solution can be re-used &#8211; store at -20&#176;C between uses, do not reheat more than twice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bloxall</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SP-6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BM purple</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11442074001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td>Bovine serum albumin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C/4920/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer/Antigen Unmasking Solution</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Demucifiying solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>For 500ml: 50ml glycerol, 50ml Tris 0.1M pH8.8, 100ml EtOH, 300ml saline (0.9% NaCl in water), DTT 1.7g.&#160; Demucifying solution can be made in advance and stored, but DTT sholud be added just before incubation (340mg/100ml).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC treated water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>750023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>101509944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>O3690</td>
			<td>0.5M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E/0650DF/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>3000917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SLBL11382V</td>
			<td>Neutral buffered formalin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehye</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>216763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haematoxylin</td>
			<td>Raymond A Lamb</td>
			<td>12698616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-053</td>
			<td>HBSS (-MgCl2+; -CaCl2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridisation buffer</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>&#160;5&#215; SSC, 50% formamide, 5% SDS, 1 mg/ml heparin, 1 mg/ml calf liver tRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroquinone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Peroxidase</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpress HRP Anti-Mouse IgG Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immpress HRP Anti-Rabbit IgG Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intestinal tissue powder</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>The small intestines of 5 adult mice were combined and homogenised in the minimum volume of ice cold PBS. 4 volumes of ice cold acetone were added to the homogenised intestine, which was mixed thoroughly and incubated on ice for 30 minutes. This was centrifuged and the pellet was washed using ice cold acetone. This was further centrifuged and the resulting pellet spread onto filter paper and allowed to dry. Once thoroughly dry the material was ground to a fine powder using a pestle and mortar.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-ferricyanide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-3667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-ferrocyanide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L0380000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacarn</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>60% Methanol:30% Chloroform:10% Acetic acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M/4000/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>S-1012</td>
			<td>NGS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal rabbit serum</td>
			<td>Dako</td>
			<td>X0902</td>
			<td>NRS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTMT</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>100 mM NaCl, 100 mM Tris HCl, 50 mM MgCl2, 0.1% Tween20, 2 mM Levamisole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAP pen</td>
			<td>Vector</td>
			<td>H-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBT</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>0.5M NaCl, 10mM TrisHCL pH7.5, 0.1% Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>100x solutiuon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (10x)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP3994</td>
			<td>Dilluted 1:10 with distilled water to make 1x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLL slides</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0425-72EA</td>
			<td>Poly-L-lysine microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase k solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>Dilute Proteinase K at 200 &#181;g/ml in 50 mM Tris, 5 mM EDTA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ralwax</td>
			<td>BDH</td>
			<td>36154 7N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reducer Solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 1g Hydroquinone, 5g sodium sulphite &#38; 100ml distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RnaseA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>0.9% NaCl in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheep serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S/1240/46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver solution</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>To make 100ml: 10ml Acetate buffer, 87ml distilled water, 3ml 1% silver nitrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/2120/53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6753</td>
			<td>NaCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium sulfite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>239321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SSC</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>93017</td>
			<td>20x saline sodium citrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12960495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648</td>
			<td>TAM, inject without allowing the solution to cool too much as compound will drop out of solution. Solution can be re-used &#8211; store at -20&#176;C between uses, do not reheat more than twice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS/T</td>
			<td>Cell Signalling</td>
			<td>#9997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethanolamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCL</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15567-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>TP9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaMount</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield Hardset mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectastain ABC Kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V3941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal fixative</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>2% formaldehyde, 0.1% glutaraldehyde in 1xPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal stain</td>
			<td>*</td>
			<td>*</td>
			<td>X-gal stain; 200ul X-gal (A) in 50ml solution B (0.214g MgCl2, 0.48g K-ferricyanide, 0.734g K-ferrocyanide in 500ml PBS).&#160; Solution B can be made up oin advance and stored at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X/0200/21</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for analyzing the role of paneth cells in regenerating the murine intestine using conditional cre-lox mouse models

La surface de l&#39;épithélium de l&#39;intestin des mammifères est un tissu dynamique qui renouvelle toutes les 3 - 7 jours. Comprendre ce processus de renouvellement identifié une population de vélo rapidement les cellules souches intestinales (CSI) caractérisées par leur expression du gène LGR5. Ceux-ci sont prises en charge par une population de cellules souches quiescentes, marqué par Bmi-1 expression, capable de les remplacer en cas de dommage. Enquêter sur les interactions entre ces populations est cruciale pour comprendre leurs rôles dans la maladie et le cancer. Les entrepreneurs indépendants existent dans des cryptes sur la surface intestinale, ces niches soutiennent l&#39;ISC à reconstituer l&#39;épithélium. L&#39;interaction entre les ISC actives et inactives implique probablement d&#39;autres cellules différenciées dans le créneau, comme il a déjà été démontré que le &#39;&#39; stemness &#39;&#39; de l&#39;LGR5 ISC est étroitement liée à la présence de leurs cellules de Paneth voisins. Utilisation conditionnelle souris cre-loxon modèles testés pour effet de supprimer la majorité des CSI actifs dans la présence ou l&#39;absence des cellules de Paneth. Nous décrivons ici les techniques et les analyses menées pour caractériser l&#39;intestin et démontrent que les cellules de Paneth jouent un rôle crucial dans le créneau ISC en aidant la récupération après l&#39;insulte substantielle.

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Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

Cellules souches épithéliales intestinales (CSI) sont entremêlées avec des cellules de Paneth. Ces cellules se différencient descendance de l&#39;ISC, qui soutiennent la CSI et de fournir une protection antibactérienne. Ici, nous démontrons comment nous avons utilisé des modèles de souris transgéniques conditionnelles pour établir que les cellules de Paneth jouent un rôle crucial dans le maintien de l&#39;épithélium intestinal.

Protocoles pour analyser le rôle des cellules de Paneth dans la régénération de l&#39;intestin murin utilisant conditionnelle<em&gt; Cre-lox</em&gt; Modèles de souris

The epithelial surface of the mammalian intestine is a dynamic tissue that renews every 3 - 7 days. Understanding this renewal process identified a ...

protocols-for-analyzing-role-paneth-cells-regenerating-murine

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Protocols for Analyzing the Role of Paneth Cells in Regenerating the Murine Intestine using Conditional Cre-lox Mouse Models

17.5K vues.  Cardiff University.  Cellules souches épithéliales intestinales (CSI) sont entremêlées avec des cellules de Paneth. Ces cellules se différencient descendance de l'ISC, qui soutiennent la CSI et de fournir une protection antibactérienne. Ici, nous démontrons comment nous avons utilisé des modèles de souris transgéniques conditionnelles pour établir que les cellules de Paneth jouent un rôle crucial dans le maintien de l'épithélium intestinal. 